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FTY720联合CsA在人卵巢组织家兔背肌移植模型中的远期疗效探究

应映芬  
【摘要】:背景: 随着现代肿瘤治疗方案的进展,肿瘤病人的生存率大大提高。卵巢组织对化疗、放疗损伤很敏感,可引起卵巢内分泌功能及生育能力的丧失。值得注意的是,有越来越多的女性推迟她们的生育年龄至30到40岁。年轻女性肿瘤患者的长期存活以及首次生育年龄的推迟迫使她们不得不面对卵巢早衰和不育的风险。卵巢组织的异种移植是当前保留生殖能力的重要途径。国内外多数研究将鼠模型作为人卵巢组织异种移植最佳受体,效果值得肯定的同时我们看到它有种属亲缘性远,受体较难管理,移植物生长空间局限等不足之处。尚未有研究报道人卵巢组织家兔背肌内移植模型。选择家兔作为异种移植模型受体可以丰富现有移植模型,为抢救性保护年轻女性患者生殖能力提供更多选择余地。 目的: 探讨人新鲜人卵巢组织家兔背肌内移植效果,评估联合应用FTY720和CsA对此模型远期疗效观察。 方法: 选择20只新西兰大耳雌兔作为人卵巢组织异种移植的受体。经去势处理后的20只雌兔随机分配到7组中(实验组每组3只,空白组2只)。新鲜人卵巢组织异种移植到家兔背肌内,所有移植物及相关淋巴器官于移植后8周全部回收。采用放免技术检测外周血E2水平;用酶联免疫法检测血清IFN-Γ和IL-4水平;流式细胞检测外周全血细胞CD4+/CD8+T淋巴细胞比例;回收后移植物HE染色观察形态;移植物内新生血管生成情况及卵泡生长情况分别用CD31和Ki-67进行免疫组化方法(EnVision二步法)检测;淋巴器官圆小囊、胭窝淋巴结、脾脏、胸腺组织用TLR-2/TLR-4进行免疫组化定位。 结果: 1.联合用药组中人卵巢组织背肌内移植后的家兔能够恢复正常的发情周期; 2.较之空白组、单独应用CsA组和FTY720组,联合用药组明显保护了家兔背肌内的移植物,延长了卵巢组织的生存时间,明显降低了外周血中CD4+/CD8+T淋巴细胞比例; 3.联合用药组移植物靠近肌肉组织的外周部分有CD31+阳性染色的新生血管数明显多于空白组和CsA组;联合用药组移植物内低级别卵泡上的颗粒细胞以及卵巢基质细胞有Ki-67阳性染色,空白组和CsA组内仅卵巢基质细胞有Ki-67弱阳性染色。 4. TLR-2+/TLR-4+T淋巴细胞主要分布于胭窝淋巴结内和脾脏动脉鞘周围。较之空白组和CsA组,联合用药组和FTY720组的胭窝淋巴结内和脾脏动脉鞘周围TLR-2+/TLR-4+T淋巴细胞聚集明显增加。 结论: 1.我们应用FTY720联合CsA建立了人卵巢组织家兔移植的新模型。 2.家兔背肌可以为人卵巢组织内的卵泡生长提供快速建立移植物和受体之间血供的支持,降低移植后关键时刻缺血再灌注的损伤。 3.FTY720联合CsA组(组1和组2)有效维持了移植后8周内的人卵巢组织始基卵泡和原始卵泡的正常形态,单独应用CsA或FTY720不足以维持家兔背肌内的人卵巢组织的正常生长。


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