收藏本站
《浙江大学》 2012年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

水稻OsMADS15基因功能研究及用酵母双杂筛选互作蛋白

陆孙杰  
【摘要】:植物的生长发育和形态建成是一个极其复杂的过程,也是一系列基因在不同时间和不同空间上的顺序表达的过程。其中转录因子的表达和活性对植物调节各类基因的时空表达和植物的生长、发育具有重要的调控作用。植物MADS-box基因家族在植物的生长发育、代谢、应对生物与非生物胁迫反应等生理过程中发挥着重要的作用。 水稻OsMADS15是一个AP1/SQUA亚家族的成员。本实验中,我们构建了OsMADS15过表达载体,并用农杆菌转化法得到转基因系。用半定量PCR鉴定表明,在野生型水稻中OsMADS15主要表达在节、节间、成熟叶片、内稃和外稃、浆片中,而在愈伤、根、雄蕊、心皮中表达低或没有。而在OsMADS15转基因植株中,这个基因在各个组织中均有较高的表达量。转基因水稻出现早熟现象,并且可以观察到转基因水稻的矮化。在幼苗期它的节间就已经伸长。伸长的节上长出许多不定根,用Real Time-PCR检测发现WOX11在转基因水稻中表达量提高了近10倍。在伸长的节上可以看到不定根和腋芽的生长。水稻过表达OsMADS15后分蘖推迟,并且在分蘖期时,分蘖数比野生型水稻的少。过表达OsMADS15后还使水稻长出更多伸长的节和节间。在短日照下,转基因水稻的开花期比野生型早,但是株高却普遍比野生型矮。用蛋白质双向电泳技术分析发现OsMADS15过表达植株和野生型植株的叶片和花序的蛋白表达谱有一些差异。 构建了水稻全株的高质量cDNA文库。计算文库的滴度约为1.8×106cfu/ml。用PCR鉴定插入片段表明,插入片段一般都在750bp以上,空载率低,说明构建的cDNA文库质量较高。 用酵母双杂交法结合构建的cDNA文库,筛选与OsMADS15有相互作用的蛋白。通过筛选得到86个阳性克隆。经测序并去除重复克隆后,共得到55个UniGene.用GO分析这些基因的功能和分类表明,在细胞成分方面,筛选到的基因主要是参与细胞、细胞的部分、大分子复合体和细胞器的组成。在分子功能方面,大部分的互作蛋白被归类到结合和催化这两种功能。在参与的生物学过程方面,大部分的蛋白在代谢过程和细胞过程中产生作用。我们也筛到了几个MADS-box基因家族的成员,如OsMADSl, OsMADS8和OsMADS14。 OsMADS1和OsMADSS是E类基因,而OsMADS14是AP1/SQUA亚家族的成员。OsMADS1是已经被证明和OsMADS15有相互作用的基因。这也证实了我们用酵母双杂交方法筛选OsMADS15相互作用蛋白的实验是成功的。在烟草细胞中用BIFC实验验证OsMADS15和候选基因OsMADS1、OsMADS14、OsMADS8之间的相互作用,结果表明在烟草细胞的核内,OsMADS15(?)(?)连的nYFP可以与OsMADS1、OsMADS14、OsMADS8相连的cYFP分别形成互补而产生荧光,证实它们之间在植物体内也具有相互作用。说明这些基因可能与OsMADS15基因的编码蛋白形成四聚体而发挥功能。这些实验为今后近一步研究OsMADS15在水稻花发育和水稻营养器官生长发育中的功能奠定了基础。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S511

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈霞;罗世巧;段翠芳;曾日中;;高等植物转录因子研究进展[J];安徽农学通报;2008年09期
2 刘晓玲;;植物花发育模型的研究进展[J];现代农业科技;2008年22期
3 陈晓,陈彦惠,任永哲;植物开花转换的分子生物学研究[J];分子植物育种;2005年04期
4 李进波;万丙良;戚华雄;;水稻花器官发育的遗传研究进展[J];湖北农业科学;2010年10期
5 刘强,张贵友,陈受宜;植物转录因子的结构与调控作用[J];科学通报;2000年14期
6 徐勇;张林;马荣才;;桃(Prunus persica)中2个MADS box基因功能的初步鉴定和遗传作图[J];科学通报;2008年05期
7 王力娜;范术丽;宋美珍;庞朝友;喻树迅;;植物MADS-box基因的研究进展[J];生物技术通报;2010年08期
8 李洁;植物转录因子与基因调控[J];生物学通报;2004年03期
9 高晶涵;李清昀;;控制植物花器官发育的分子机理[J];生物学通报;2008年02期
10 杨致荣,王兴春,李西明,杨长登;高等植物转录因子的研究进展[J];遗传;2004年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 葛宝宇;林轶;侯和胜;;ERF类转录因子的结构与功能[J];安徽农学通报;2007年20期
2 陈霞;罗世巧;段翠芳;曾日中;;高等植物转录因子研究进展[J];安徽农学通报;2008年09期
3 陈哲;孔祥翔;张斐斐;龚明;;植物抗逆性基因工程研究进展[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年07期
4 刘可杰,吕淑霞,沈世华;FaDREB1基因RNAi的植物表达载体的构建[J];安徽农业科学;2005年07期
5 刘星;仇雪梅;高祥刚;赫崇波;;基因文库构建及其在鱼类遗传研究上的应用[J];现代农业科技;2008年16期
6 刘晓玲;;植物花发育模型的研究进展[J];现代农业科技;2008年22期
7 尹跃;曹有龙;陈晓静;赵建华;;枸杞MYB103转录因子的生物信息学分析[J];北方园艺;2012年14期
8 李晓颖;曹雪;杨光;王晨;沈玉英;房经贵;;果梅花与果实cDNA文库的构建及鉴定[J];北京林业大学学报;2010年S2期
9 王洁雅;赵福永;田志宏;;水稻花器官突变体及相关基因的研究进展[J];长江大学学报(自然科学版);2011年02期
10 肖雄;王睿辉;刘桂茹;温树敏;谷俊涛;;紫大麦草中DREB类转录因子基因Hvi917DREB2的克隆、原核表达及序列分析[J];河北农业大学学报;2012年03期
中国重要会议论文全文数据库 前6条
1 任磊;王雁;周琳;彭镇华;;牡丹SEPALLATA基因的克隆及表达分析[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
2 王巧燕;陈明;邱志刚;程宪国;徐兆师;李连城;马有志;;一个新的编码大豆DREB转录因子基因的克隆及鉴定[A];2005年全国作物遗传育种学术研讨会暨中国作物学会分子育种分会成立大会论文集(二)[C];2005年
3 盂宪鹏;刘传亮;张朝军;武芝侠;李付广;;ERF转录因子研究进展及其与棉花抗病性的关系[A];中国棉花学会2007年年会论文汇编[C];2007年
4 邢世岩;王京梅;李际红;姚林梅;;叶籽银杏GbMADS5基因的克隆与序列分析[A];第二届中国林业学术大会——S2 功能基因组时代的林木遗传与改良论文集[C];2009年
5 蔡更元;陈瑶生;王翀;李加琪;彭国良;刘敬顺;;蓝塘猪骨骼肌组织全长cDNA文库的构建[A];第十次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2006年
6 李菁博;许桂花;;月季变叶病研究进展及发生情况初步调查[A];中国植物园(第十三期)[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李望丰;SsNHX1基因在紫花苜蓿中的表达及其耐盐性研究[D];东北师范大学;2010年
2 吕建;小麦渐渗系山融3号MYB基因家族对非生物胁迫的响应及Tamyb31基因功能研究[D];山东大学;2010年
3 韩莹琰;白菜花粉发育相关的C2H2型锌指蛋白新基因BcMF20的克隆与功能验证[D];浙江大学;2011年
4 王猛;马尾松抑制消减文库的构建及抗病性相关基因的克隆[D];中南林业科技大学;2010年
5 曾兴权;小麦抗条锈病种质的鉴定及其抗性相关基因的差异表达和克隆[D];西北农林科技大学;2010年
6 李慧娥;中国野生华东葡萄抗白粉病株系白河-35-1转录因子基因(WRKY)表达与功能研究[D];西北农林科技大学;2010年
7 李晓薇;大豆两个MYB转录因子基因的克隆及其功能分析[D];吉林大学;2011年
8 陈良;油菜抗逆相关基因的鉴定和功能研究[D];华中师范大学;2011年
9 石雅丽;棉花体细胞胚发生受体类激酶基因的克隆与功能分析[D];中国农业科学院;2011年
10 刘坤;海岛棉ERF族B3和B1亚组转录因子基因的克隆与特征研究[D];中国农业科学院;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 曹银川;柑橘NAC转录因子的克隆与表达分析[D];华中农业大学;2010年
2 詹菁;百合AGAMOUS同源基因的克隆、载体构建及遗传转化[D];华中农业大学;2010年
3 魏礼玲;MYB转录因子家族相关EST干涉载体构建及遗传转化的研究[D];华中农业大学;2010年
4 罗蓓蓓;苎麻茎皮差减文库的构建及纤维发育相关基因的筛选[D];华中农业大学;2010年
5 黄聪;花生中DREB、bZIP类转录因子耐逆性研究[D];哈尔滨师范大学;2010年
6 柴凌燕;植物角质膜蜡质转录因子基因SHN1/WIN1的表达载体构建[D];郑州大学;2010年
7 王京梅;叶籽银杏叶生雌性生殖器官发育相关基因的克隆与序列分析[D];山东农业大学;2010年
8 贾翠玲;葡萄WRKY基因超家族的进化分析[D];辽宁师范大学;2010年
9 刘雨;转录因子OSPHD1的过表达提高水稻耐逆性的研究[D];安徽农业大学;2010年
10 陈林波;茶树抗寒相关基因的克隆与表达特性分析[D];安徽农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘坚;郭龙彪;钱前;;水稻花器官发育基因的研究进展[J];中国稻米;2007年03期
2 胡瑞波;范成明;李宏宇;林辰涛;傅永福;;大豆MIKC型MADS-box基因家族分析[J];分子植物育种;2009年03期
3 谢迎秋,孟蒙,朱祯;植物反式作用因子研究进展[J];高技术通讯;2000年02期
4 乔飞;王力荣;范崇辉;朱更瑞;方伟超;;利用AFLP和RAPD标记构建桃的遗传连锁图谱[J];果树学报;2006年05期
5 樊红;克隆新基因cDNA全长的策略和方法[J];国外医学.遗传学分册;2002年01期
6 谢卡斌,张建伟,向勇,冯旗,韩斌,储昭晖,王石平,张启发,熊立仲;10828条籼稻全长cDNA的分离和注释[J];中国科学C辑:生命科学;2005年01期
7 刘强,赵南明,K.Yamaguch-Shinozaki,K.Shinozaki;DREB转录因子在提高植物抗逆性中的作用[J];科学通报;2000年01期
8 刘强,张贵友,陈受宜;植物转录因子的结构与调控作用[J];科学通报;2000年14期
9 储昭晖,彭开蔓,张利达,周斌,魏君,王石平;水稻全生育期均一化cDNA文库的构建和鉴定[J];科学通报;2002年21期
10 刘建喜,林爱星,李雪辉,陈新荣,陈永福;用PCR法从cDNA文库中快速克隆基因[J];农业生物技术学报;2001年03期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 李继刚;棉花生殖器官发育相关基因的克隆与表达研究[D];中国农业科学院;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 高伟;玉米光周期反应与类LFY基因克隆的研究[D];河南农业大学;2004年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴博良;日本农业专家与我合作进行水稻栽培试验[J];农业现代化研究;1980年01期
2 吴军;中日合作水稻栽培试验继续在桃源进行[J];农业现代化研究;1981年01期
3 汲惠吉;水稻栽培管理作业历——二月下半月[J];新农业;1985年03期
4 贾玉敏;肖连成;;水稻栽培计算机模拟、优化决策系统的使用方法[J];农村科学实验;2003年08期
5 池海清;;沙地衬膜栽培水稻技术研究[J];现代农业科技;2008年18期
6 胡兆谦;;谈湖南水稻栽培农谚[J];生物学通报;1959年02期
7 杨守仁;;水稻施肥与水肥管理[J];辽宁农业科学;1973年03期
8 刘健华;新疆水稻栽培以插秧为主还是直播为主?[J];新疆农业科学;1979年01期
9 ;甘肃银吴地区机耕农场水稻栽培技术[J];陕西农业科学;1957年02期
10 周恒;江坂正二先生来桃源参加“中日合作水稻栽培试验”[J];农业现代化研究;1982年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 林雄杰;;MoRab5酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
2 卢雅丕;董菁;周飞;王琳;张波;陈美娅;任建林;;人肠三叶因子酵母双杂交载体的构建及其自激活作用鉴定[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(上册)[C];2007年
3 杨长庚;王贤丽;王磊;张博;文华;陈松林;;牙鲆PoAkirin1相互作用蛋白筛选及基因性质的研究[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
4 符向辉;何淑雅;董晓;李斌元;王三虎;秦凌雪;陈小卫;马云;;智力低下相关蛋白FXR1P与CMAS相互作用区域的鉴定[A];传承与发展,创湖南省生理科学事业的新高——湖南省生理科学会2011年度学术年会论文摘要汇编[C];2011年
5 袁顺宗;马兵;易绍萱;贺伟峰;陈希炜;罗高兴;吴军;;以酵母双杂交系统从成人肝cDNA文库中筛选与研究P311相互作用蛋白的基因序列[A];第八届全国烧伤外科学年会论文汇编[C];2007年
6 袁顺宗;谭江琳;马兵;彭旭;贺伟峰;黄正根;程文广;杨世伟;杨俊杰;王晓娟;胡婕;甘成军;陈希炜;胡晓红;张小容;罗高兴;吴军;;以酵母双杂交系统从成人肝cDNA文库中筛选与研究P311相互作用蛋白的基因序列[A];第八届西南五省一市烧伤整形学术会议暨贵州省医学会烧伤整形分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年
7 郭颂;林彩丽;周涛;田国忠;范在丰;;泡桐丛枝植原体侵染的泡桐组培苗酵母双杂交cDNA文库的构建[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
8 张方;施毅;辛晓峰;宋勇;赵明;李子玲;钱桂生;罗向东;;大鼠肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文库的构建与筛选[A];中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班论文汇编[C];2006年
9 童新;刘斌;孙志贤;;利用酵母双杂交系统研究caspase相互作用蛋白[A];中华医学会放射医学与防护学分会第二次中青年专题研讨会论文汇编[C];1999年
10 张旭东;Rhonda R.McCartney;Tommy S.Tillman;Harry Solimeo;Stefan Wf;Ciprian Almonte;Simon C.Watkins;Martin C.Schmidt;;Stdl蛋白对葡萄糖感受体Rgt2和Snf3的作用及对蛋白激酶Snf1活性的调节(英文)[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 杨进 康炳祥;物茂乡水稻栽培技术实现新突破[N];楚雄日报(汉);2009年
2 张书 杨刚 记者 吕晓明;响水灌区续建 改造工程上马[N];牡丹江日报;2007年
3 中化化肥高级顾问、中国农业大学教授 陈伦寿;水稻倒伏的原因及预防措施(一)[N];农资导报;2007年
4 新华社记者 朱立毅 王春雨;脚踏实地才能最终创造辉煌[N];新华每日电讯;2010年
5 记者 易立权 实习生 陈宇;南充在全省率先实验成功[N];南充日报;2010年
6 记者 张志春;桦川七十万亩水稻丰收在望[N];佳木斯日报;2008年
7 贺仁;水稻栽培亦可不用除草剂[N];农民日报;2000年
8 严光彬;水稻长相和分蘖进程的识别[N];吉林农村报;2011年
9 中国农业大学教授 陈伦寿;中化化肥800免费电话集中解答(3)[N];人民日报;2007年
10 上技;旱育稀植水稻栽培技术[N];东方城乡报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陆孙杰;水稻OsMADS15基因功能研究及用酵母双杂筛选互作蛋白[D];浙江大学;2012年
2 宋林霞;利用酵母双杂交系统筛选与G蛋白及CaM相互作用的新蛋白[D];河北师范大学;2003年
3 房玮;杨树次生维管发育相关基因PtCDD和PtSZF的功能分析[D];中国林业科学研究院;2010年
4 崔晓艳;马铃薯Y病毒属编码的膜相关蛋白的功能研究[D];西北农林科技大学;2010年
5 孙涛;肿瘤细胞成血管塑形在血管生成拟态形成中的作用研究[D];天津医科大学;2010年
6 陈莉;ERβ1相互作用蛋白的筛选及ERβ1-Id1信号通路对乳腺癌细胞增殖抑制作用及机制研究[D];第三军医大学;2010年
7 刘秀杰;酵母双杂交筛选Nogo-66的结合分子及功能研究[D];第二军医大学;2006年
8 李星星;hS100A6对人骨肉瘤细胞株143B的作用及机制探讨[D];重庆医科大学;2010年
9 张勇;神经营养因子受体下游信号转导通路的酵母双杂交研究[D];第二军医大学;2002年
10 刘庆;番茄Cf-4/Avr4互作系统中信号传导基因的克隆与功能分析[D];中国农业科学院;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘杰;HPV18E6酵母双杂交诱饵质粒的构建与检测[D];华中科技大学;2009年
2 张巍;MDBK细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及其鉴定[D];吉林大学;2011年
3 陈琼琼;酵母双杂交法对STK11羧基端互作蛋白的筛选[D];中南大学;2010年
4 蒋丽丽;柽柳Peroxiredoxin基因(ThPrx1)的克隆及抗逆功能分析[D];东北林业大学;2010年
5 姜波;柽柳硫氧还蛋白过氧化物酶基因耐盐功能分析[D];东北林业大学;2011年
6 赵艳敏;1.两种蜘蛛多肽毒素诱饵载体的构建及初步鉴定 2.电压门控钠离子通道嵌合体的构建以及生理活性的检测[D];湖南师范大学;2010年
7 张伟;人SARP1基因酵母双杂交诱饵载体的构建、表达鉴定及自激活和毒性检测[D];重庆医科大学;2010年
8 姜静宜;胚胎干细胞中外源性IbeB靶蛋白的筛选及验证[D];中国医科大学;2010年
9 郭超;运用酵母双杂交系统筛选与鉴定神经生长因子受体TrkA结合小肽[D];第二军医大学;2003年
10 张佩景;酵母双杂交筛选孕激素受体相互作用蛋白质及其功能的研究[D];西北农林科技大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026