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《浙江大学》 2019年
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cAMP/PKA通路介导的戊唑醇对斑马鱼性别分化影响的机制研究

吴琼  
【摘要】:戊唑醇是一种常用的三唑类杀菌剂,具有高效广谱的特性,在土壤和水环境中可以检测到戊唑醇残留。而与戊唑醇有关的研究主要是环境行为、检测方法和哺乳动物毒性方面,关于其对水生生物的毒性研究不多。本论文以戊唑醇为研究对象,重点研究了戊唑醇对斑马鱼性别分化产生的影响,并对其可能的分子机制进行了探讨。(1)研究了戊唑醇影响斑马鱼性别分化最显著的时期。将不同生命阶段的斑马鱼(0-5 dpf,5-19 dpf,0-19 dpf,19-60 dpf,5-60 dpf,0-60 dpf)分别曝露于同一浓度(0.5 mg/L)的戊唑醇中,结果表明戊唑醇曝露对斑马鱼有发育毒性,包括存活率下降、体长体重减少。但性别分化前曝露并未对性别分化造成显著影响,并确定影响最显著的5-60 dpf为以后研究的曝露阶段。(2)研究了戊唑醇曝露对斑马鱼性别分化相关基因和性激素水平的影响,结果表明,戊唑醇使雄性发育相关基因gata4,fzd2,fzd7a转录水平上调,雌性发育相关基因rspo1,cyp19a1a,fox12,sf-1转录水平下调,dmrt1转录水平下调。并且雌二醇含量降低,睾酮含量升高。(3)研究了戊唑醇曝露对cAMP/PKA通路的影响。结果表明,戊唑醇抑制了该通路的活性,使PKA活性降低,FOXL2蛋白的磷酸化受阻碍,FOXL2调控的下游芳香化酶cyp19a转录受抑制,睾酮向雌二醇转化的效率降低,导致了性别比例偏向雄性化。推测戊唑醇可干扰cAMP/PKA的磷酸化。(4)通过非标记定量蛋白质组学和磷酸化非标记定量蛋白质组学测序,进一步探索戊唑醇影响斑马鱼性别分化的相关通路,发现戊唑醇可影响蛋白的磷酸化功能,FOXL2的同源蛋白FOXO有显著富集的KEGG通路,蛋白激酶B也受到了显著影响,证明我们的推测正确,戊唑醇通过干扰磷酸化来影响性别分化过程。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:X171.5

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