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《浙江大学》 2001年
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L-精氨酸对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤的保护作用

倪建新  
【摘要】: 在过去30年中,由于显微外科迅速发展,吻合小血管的游离皮瓣移植已 成为整形外科进行组织移植、再植、重建和器宫再造的一项新的重要的技术。 即使游离皮瓣移植围手术期的每一步都能很好完成,仍有10%移植皮瓣因缺 血再灌注(ischemia-reperfusion IR)损伤而出现坏死。皮瓣IR损伤的病 理生理学机制主要包括组织局部中性粒细胞浸润增多、氧自由基损伤、细胞 内钙离子超载、高能磷酸化合物缺乏和无复流。文献报道了一些药物或方法 可改善皮瓣IR损伤,有效地提高皮瓣成活面积。这些药物或方法主要有抗粘 附分子单克隆抗体、自由基清除剂、免疫抑制剂、高能化合物、高压氧、缺 血预处理等。一氧化氮(nitric oxide NO)是具有广泛生物学活性的自由基。 它在心血管系统能维持血管平滑肌的紧张度、抑制血小板聚集、粘附和调节 血管平滑肌细胞增生;在神经系统它参与信息传递、神经和血管间的协调和 内脏功能的调节。NO作为病理生理性信使介导炎症过程和免疫反应。NO在 IR损伤的作用已引起广泛研究,结论颇不一致。大多数人认为NO对IR损伤 有保护作用“-”,osei等用镰状细胞性贫血的转基因鼠及正常鼠观察其在缺 血缺氧时的变化,前者结构型一氧化氮合酶(。。nstitutive NOS cNOS)表达 缺失,在缺血区及其周围,诱生型一氧化氮合酶(inducible NOS iNOS)表 达是升高的,正常鼠iNOS表达不升高且分布无序;组织学检查显示转基因鼠 缺血区组织结构的损伤较正常对照鼠明显减轻,提示iNOS对缺血缺氧性损伤 有保护作用。但也有人认为 NO可加重 IR损伤”-“’。Turnage等应用大鼠小 肠IR模型,于再灌注前应用训 特异性抑制剂可有效改善IR诱导的肺微循 环障碍,而应用广谱NOS抑制剂则对IR诱导的肺微循环障碍无改善作用。以 上实验结果表明,不同实验模型,不同NOS抑制剂可产生不同的实验效果。 实验目的 研究 NO前体卜精氨酸(LArsinine L-Ars)对大鼠皮瓣m损伤有保护作 用还是加重IR损伤。 材料和方法 1.大鼠皮瓣缺血再灌注模型和实验分组 25只雌性SD大鼠,体重180-300克,于大鼠右侧腹部游离一轴型皮瓣, 长宽比为 6cm X 3cm(附图 1、2)。大鼠随机分成 3组,①空白对照组,SD 大鼠5只,皮瓣无缺血再灌注过程。②对照组,SD大鼠10只,于上腹部浅 血管发出点近端之股动脉放置无创伤动脉夹,在手术显微镜下确认股动脉和 蒂动脉血流被完全阻断。10小时后除去动脉夹,放掉动脉夹前半小时经腹腔 注射生理盐水M。@L-Arg组,SD大鼠 10只,缺血再灌注过程与对照组 相同,放掉动脉夹前半小时经腹腔注射5%L-Arg溶液(300mg/kg)。 2 2.组织学检查 空白对照组于术后 22小时、对照组和 L-Afg组于再灌注后 12小时(即 术后22小时),于皮瓣中心处取一全层组织块,放入40%福尔马林溶液中固 定,石蜡包埋切片后行 HE染色。在 400倍光镜下行中性粒细胞(polymor- phofltiCICSFflClltfophilpMN)计数,因肉膜下层pMN浸润最明显,于肉膜下 层选10个不交叉高倍野进行计数,并观察微血管和组织病变情况。 3.红外线热像图测定皮温 室内温度经空调机控制在22OC左右。空白对照组于术后34小时、对照 组和 L-Arg组于再灌注后 24小时(即术后 34小时)进行红外线热像图检查, 用钢丝标志皮瓣范围,将红外线热像图检测仪探头对准皮瓣,调整大鼠与探 头距离,测定皮瓣平均温度,并以相同方法测定对侧腹部相应部位正常皮肤 平均温度。计算对侧腹部相应部位正常皮肤与皮瓣之间的温差。 4.皮瓣坏死比率测定 术后第 7天,经颈静脉注射 10%荧光素钠溶液(15mg/k),20分钟后,在 紫外线下检查皮瓣坏死情况。用带小网格的透明纸计算皮瓣坏死和成活部分 的网格数,并依此计算皮瓣坏死面积占皮瓣总面积的百分比。 结 果 1.皮瓣坏死比率 空白对照组皮瓣全部成活(附图引,对照组皮瓣坏死面积占整个皮瓣面 积的比率平均为 sl.83士10.78%(附图 4),乙-Arg组为 6.68士4.44%(附图 5)。 卜Afg组中有2例皮瓣无坏死。皮瓣坏死主要位于皮瓣远端部分,坏死先从 3 最远端开始,逐渐向近侧扩展,于术后第5天稳定下来。皮瓣坏死比率空白 对照组与对照组相比有显著性差异(P<0.of),L叭fg组与对照组相比也有显 著性差异(P<0.of)。 2.组织学检查 2.IPMN浸润数 PMN浸润以皮瓣肉膜下层最显著,真皮层和皮下层有散在PMN浸润。 空白对照组 PMN浸润数为 67.70士23.05/10HP(附图 6),对照组为 216.90士 55。32门oHP(附图7),L-Afg组为57.Zo士16.05门OHP(附图8)。空白对照组 与对照组相比有显著性差异(P<0.01),*-*侣组与对照组相比也有显著性差 异(P<0刀1),但空白对照组与卜*侣组相比无显著性差异(P>0刀5
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R622.1

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