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《浙江大学》 2001年
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TTV家族新成员SEN Virus感染状况和基因序列分析

范骏  
【摘要】: 在肝炎病原学诊断过程中,有相当一部分病例无法用已经建立的甲、乙、 丙、丁、戊型肝炎的实验室诊断方法进行病原学分型,1997年12月 Nishizawa采用代表性差异分析(representational difference analysis,RDA)技术 从一例非甲~非戊型输血后肝炎患者血清中成功获得500碱基长的基因克 隆(N22克隆),称为输血后传播病毒(transfusion transmitted virus,TTV)。TTV 广泛存在于世界各地,不仅在非甲~非戊型肝炎患者中存在,而且在各种 甲~戊型肝炎患者、血液透析患者、血友病患者、静脉毒瘾者及正常人群和 职业献血员中存在。TTV的基因型存在高频率变异,其基因型、病因学机 理、传播途径尚不完全清楚。 2000年9月Fiordalisi等在GenBank登录SEN Virus(SENV)基因全序 列,同年Umemura等报道SEN Virus与输血后感染肝炎有关;随后Tanaka 等发现其核苷酸和核苷酸编码的氨基酸序列与TTV家族具有同源性,证实 SENV是TTV家族的新成员,其核苷酸序列存在高度变异。Bowden和Allain 报道SEN Virus可能是潜在的非甲~非戊型肝炎的致病病毒,但是尚无有力 的证据证明。国内尚无有关SEN Virus的报道。 为了了解SEN病毒感染的临床意义,探索TTV家族新成员SEN病毒 基因变异的多样性,为免疫诊断、预防、治疗非甲~非戊型肝炎提供理论依 据,我们对495份不同人群的血清标本(44例非甲~非戊型肝炎患者、150 例甲~戊型肝炎患者、ZI例 ALT升高的婴幼儿、86例血透患者、35例静 脉毒痫者、引例正常体检人群和 108例健康助血.员),-采用巢式PCR方法, 以扩增TTV原型片段为对照,研究SENV在上述人群中的感染状况;对其 中的阳性**R片段进行纯化、汝接及转化,获取重组质粒,进行**A序列 分析。 实验结果菜明,TTV PCR出现人小为 196hp片段,与预计 PCR产物人 小一致。SENV PCR出现预FJJ 360hp片段,同时也出现比 360hp长的片段。 在本文研究的不同人群中的检出如卜 TTV和 SENV的检山率分别为 7.5%和门.9%;TTV在患病者(非甲~非戊江仰‘炎患者、甲~戊型肝炎患 者、ALT升高的婴幼儿、血透患者、静脉毒痫者、)和健康人群(助血.员。 止常体检人群)中的检出率分别为 15.8%、10.l%,两者无显著性差异。而 SENV的检出率分别为门刀%、0刀%,两者有显柠性差异;SENV利 TTV在 健康人群中的检出率分别为0.0%和10.1%,两者有显著性差异;SENV和TTV 在患病者中检出率分别为11.0%和15.8%,同时川性的检出率为3.8%,两者 有显著性差异。SENV在ALT升高患者(非甲~非戊型肝炎患者、甲~戊型 肝炎患者、ALT升高的婴幼儿)和在川。T上常的患者(包括血.透患者、静脉 毒痛者)中的检出率为14.0%、5.8%,两者有显著性差异;而TTV的检出率 分别为 17.7*、12.4%,两者无显柠性差异。将I!II性 PCR”TV片段、SEN V K片段、短片段被克隆至pGEM-T-Easy载体之中,分别命名为pGEM-TTV、 PGEM-SENVL、PGEM-SENVS,选取经酶切鉴定的重组质粒,进行DNA序列分析。 川 DNA Toolss.1和 DNAStar软件处理、分析数据。TTV DNA片段序列与 TTV 1、A278原地(AB008394)卜较芬析的序列同源性为97.4%。三个PGEM-SENV 长片段和两个短片段进行测序,与SENV的序列(AX025667)比较分析,同 源性分别为 87.7%、76.1%、88.2%、72.7%$11 78.8%。 以上研究表明:首次发现我国存在 SEN VirSS散发感染,并且有与 TTV 合并感染存在。SENV可能是一种重要病原体,临床检测SENV可能更有 2 意义。我国存在不同于 SEN Virus(AX025667)的变异株;同一患者存在两 种SEN V变异株的复合感染;SENV变异株其氨基酸序列与TTV家族成 员有一定程度的同源性。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R392-33

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