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《浙江大学》 2001年 硕士论文
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几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因转基因水稻抗病性的研究

毛碧增  
【摘要】: 水稻纹枯病是水稻三大病害之一,目前在我国大多数水稻种植区已经成为最严 重的常发性水稻病害。至今对水稻纹枯病没有有效的防治措施和对纹枯病具有抗性 的品种。我们把水稻几丁质酶基因和苜蓿β-1,3-葡聚糖酶基因双价基因转化水稻, 获得了对纹枯病具有高抗的转基因植株。 1.水稻几丁质酶基因RCH10用其本身的启动子加上一个35S增强子表达,芷蓿β- 1,3-葡聚糖酶基因AGLU用双价35S启动子表达并串联构建于植物表达载体 PBI101,利用农杆菌介导法和基因枪法转化粳稻台北309,分别获得20个和18 个独立转化子,经PCR检测,各有13个和5个阳性独立转化子。 2.18个T0独立转化株系种植于温室繁育,分析其T1代遗传规律。发现不同的转 化方式、不同的株系PCR阳性分离程度不同,并不符合孟德尔遗传规律。共得 到107株PCR检测阳性的T1代。 3.T1代植株经Southern检测,表明外源基因已经整合到了水稻基因组中。 4.T1代植株经Northern检测,表明外源基因在RNA水平表达,在不同转基因株 系间有所差异,两个酶基因的表达水平有着类似性。 5.T1代植株经纹枯病病菌接种鉴定,表明各株系对纹枯病具有不同的抗性,且抗 病与两个外源基因的RNA表达成剂量效应,并获得了2个酶基因高表达且高抗 纹枯病的T1株系,将以该两株系为材料作进一步的基因表达和抗性分子育种研 究。研究表明几丁质酶和葡聚糖酶基因双价表达盒的转基因策略可以获得遗传 缺乏的抗纹枯病等真菌病害的基因资源。


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