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《浙江大学》 2001年
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缺血预处理对肝硬化大鼠肝脏保护作用的实验研究

程向东  
【摘要】: 第一部分 缺血预处理对缺血再灌注硬化肝脏p-选择素表达的影响 及保护作用的实验研究 “缺血预处理”(Ischemic Preconditioning, IPC)是指组织多次短暂的缺血 后,能增加对随后较长时程的缺血再灌注(Ischemia Rerperfusion, I/R)的耐受 力。这一现象15年前在心肌中第一次得到证实,随后得到不断地深入研究。尽管 具体机制还不十分清楚,但已被证实有效的激发物有:一氧化氮(Nitrogen monoxide, NO)、腺苷、前列腺素、缓激肽等等,它们的作用大小随所研究的脏器 不同而不同。心脏IPC研究中发现,腺苷与蛋白激酶C(Protein Kinase C, PKC) 在IPC中起着关键的作用,IPC能促进腺苷与腺苷受体Al结合后与百日咳毒素敏 感的G蛋白偶联,激活磷脂酶C(Phospholipase C, PLC),催化磷脂酰肌醇分解, 产生甘油二酯(Diacylglycerol DG),最后激活PKC,使K~+离子通道开放,产生心 肌的保护作用。而对肝脏的研究发现,腺苷只能通过NO启动IPC保护肝脏机制, 而且它通过抑制白细胞-内皮细胞的相互作用,减少白细胞黏附、聚集、浸润,从 而减轻肝脏I/R损伤。 I/R激发炎症介质的释放,使选择素、内皮细胞黏附分子表达上调,介导中性 粒细胞滚动、黏附以及血小板-内皮细胞黏附,进而使微血管郁积、阻塞和血栓形 成,加重组织缺血缺氧;中性粒细胞浸润,产生大量氧自由基,释放蛋白酶进一 步损害组织。实验表明,P-选择素(P-selectin)是介导中性粒细胞滚动和起始 黏附的关键介质,在P-选择素缺乏的大鼠中肝脏缺血再灌注后不会出现多形核细 胞(Polymorphonuclear cell, PMN)滚动和黏附,同时也发现运用p-选择素单抗 后PMN滚动和黏附受到抑制。再者P-选择素介导的PMN滚动和黏附将进一步引起 牢固黏附和PMN浸润、迁移,加重肝组织损伤破坏。 因此,我们推测肝脏IPC可能通过促进NO分泌,抑制P-选择素表达,而发 浙江大学硕士研究生毕业论文 挥作用的。类似的研究目前尚未见报道。本研究旨在大鼠肝硬化模型基础上,探 讨IPC对肝硬化肝脏I爪损伤的保护作用和机制以及IPC对卜选择素表达的影响 和作用。 材料和方法 1.肝硬化模型复制:雄性SD大鼠,体重200士30克,皮下注射60%四氯化碳橄榔 油剂(0.3。1/100克体重),每4天一次,同时5%乙醇液作唯一饮用水,模型制 备时间60天。 2.手术操作:首先游离肝周韧带,于胆总管置管作胆汁5;流并计胆汁分泌量。阻 断左、中叶肝蒂致左、中叶缺血,保持肝右叶和尾状叶血流通畅。按实验设计 的时间要求阻断和开放左、中叶肝蒂,开放左、中叶肝蒂的同时结扎其他肝蒂。 3.分组:雄性,肝硬化SD大鼠,40只,随机分为五组,每组人只:假手术组帕 印er。t儿n gr。W,SO组);缺血再灌注组(Isch。l。-Reperhsl。ngr。W,IR 组);缺血预处理组(Isch。访Pre。。ndlt。。mug groop,IPC组);精氨酸预处 理组(L-虹gkec。ndltl。mug gr。W,APC组);NO-硝基-L-精氨酸甲酯预处 理组预处理组(L-NAME Precondlt。oning grollp,NPc组)。 4.指标的检测;以肝组织ATP、ADP、AM:P及EC(用高效液相色谱法测定),血清 ALT、AST、LDH(用全自动生化仪测定)和肝脏胆汁分泌量来评价肝功能。用SP 法免疫组化染色检测肝组织卜选择素蛋白表达,计算肝组织中中性粒细胞浸润 数,并观察形态学变化。 结 果 1.缺血30分钟末,IR组、IPC组、APC组、NPC组间ATP含量及能荷水平明显下 降(HO.05)。再灌注120分钟后,IPC组和讪C组ATP含量和能荷水平明显高 于 IR组,而 NPC组与 IR组间无显著差异(HO.05)。 2.IR组中,ALT、AST、LDH明显高于 SO组。10 W缺血 5分钟再灌注预处理后(IPC 组),ALT、AST。LDH升高受到明显抑制(HO.000)。予外源性NO一L-Arg预处 理后(APC组)出现上述 IPC样保护作用,而予卜NAME预处理后(NPC组)IPC 保护作用受到抑制。 3.IPC组中肝组织胆汁分泌量明显多于IR组(0.101士0.027对0.066土0.027 ml/g 2 浙江大学硕士研究生毕业论文 h、r,HO.002),APC组与IR组及NPC组与SO组间有显著性差异(分另HO.001, HO.000),而 NPC组与 IR组间无显著差异性(HO.05)。 4.肝组织中白细胞记数显示:IR组与SO组间有显著性差异(P<0.001),IPC组 中白细胞浸润受到抑制(HO.028)。予卜缸刀预处理后(APC组)出现同IPC 样作用,而NO合成抑制后(NPC组)IPC保护作用消失。 5.IR组肝细胞卜选择素蛋白表达显著增强(HO.of)。IPC组和 APC组卜选择素 蛋白表达明显抑制,而NO合成抑制后仰PC组),P-选择素表达恢复增强 (AO.01)。 6.经SPea。等级相关陛分析发现肝组织中卜选择索蛋白表达与中性粒细胞浸 润数之间呈显著性正?
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R575.2

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【参考文献】
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