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《浙江大学》 2001年
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人表皮生长因子工艺的应用基础研究

童望宇  
【摘要】: 分离是导致生物技术产品价格高昂的主要原因。提高发酵目标产物 的产量、降低发酵液中的杂质含量与扩大目标产物和杂质间的理化性质 差异是降低分离成本的有力措施。发酵与分离过程的相互兼容,有机结 合(集成)将是降低生产成本的有效途径。基于此原则,本文对生物技 术产品hEGF的生产进行了研究。 实验考察了理化因素对工程菌生长的影响,特别是发酵培养条件对 人表皮生长因子(human epidermal growth factor,hEGF)产量和发酵液组 成的影响,同时对摇瓶发酵的动力学进行了初步探讨,结果表明: (1)氨苄青霉素(Ampicillin,Amp)浓度的增加对工程菌的生长有 一定的抑制作用;异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D- thiogalactoside,IPTG)对工程菌生长的影响较小;接种量的减 少导致延滞期增长。 (2)根据正交实验极差分析结果,各因素影响对产量的影响作用大 小为:接种量>Amp浓度>IPTG浓度>胰蛋白陈(trypton,try) 与酪蛋白酸水解物(casein,cas)之比>葡萄糖(glucose,glu) 与乳糖(lactose,lac)之比。 (3)优化培养基组成为:接种量1%,IPTG浓度0.3mM,Amp浓 度150mg/L,lac:glu 5:0(总量为5g/L),Try:Cas为1:1(总量 为40g/L)。在此优化条件下,hEGF的产量从213.4mg/l提高 到242mg/l,特别是发酵培养基中用乳糖替代葡萄糖,其发酵 液中的杂蛋白质浓度显著下降,为纯化分离提供了有利条件。 (4)通过对该发酵体系的分析,建立描述该过程的发酵动力学模 型,由计算结果与实验结果的比较可知,该动力学模型基本上 反映了重组E.coli发酵hEGF过程的规律,特别是在描述菌体 生长上,比较准确。 考察了用STREAMLINE-DEAE阴离子交换剂以填充床模式在AKTA Explore100进行hEGF的初步浓缩分离,各种操作条件对纯化过程的影 响进行了系统研究,结果表明: (1)hEGF保留体积随线性流速、进样体积、柱床高度、梯度长度 及pH的增加而增加,但保留体积的增加值等于进样体积的增 加量,此外进样浓度的改变基本不改变其保留体积。回收峰面 积%随进样体积、进样浓度及梯度长度的增加而下降,随柱 床高度及pH值的增加而增加,且线性流速的改变基本不改变 其回收峰面积%。容量因子随线性流速、进样体积、柱床高度、 梯度长度及Ph值的增加而加大;但进样浓度对容量因子影响 浙江大学博土学位论文 摘要 甚小。峰宽随线性流速、进样体积、柱床高度、梯度长度、pH 及进样浓度的增加而上升。但由于进样体积与进样浓度的大量 增加仅引起峰宽的少量加大,故适当加大进样体积与进样浓度 可提高产品浓缩效率和产品的生产率。 Q)初步优化的分离条件为:线性流速为 150 cln/h,进样体积为 50 ml,柱床高度为 11.3 cm,洗脱液为含 2 M NaCI的 0乃2 M的磷 酸盐缓冲液…H7刀),洗脱梯度为ZCV(柱体积)。在此条 件下,hEGF的浓缩倍数达 2.9,回收率达 85%,纯度达 10%以 上。故 STREAMLINE DEAE以填充床模式分离高附加值产品 hEGF是完全可行的。另外,研究表明,采用累加进样方法, 能够扩大柱的吸附容量,并可节省操作时间提高分离效率,也 是一种比较可行的方法。 考察了用ST肪AMLffeE-DEAE阴离子交换剂以扩张床模式对hEGF 进行初步浓缩纯化,研究了多种操作条件对分离过程的影响,结果表明: ()线性流速、进样体积、梯度长度、样品浓度及 pH对 hEGF保 留体积、回收峰面积%、容量因子、峰宽等有不同的影响, 而其影晌趋势常与填充床趋势相似,说明扩张床与填充床有相 似的分离机理。 (二)初步优化的分离条件为:线性进样流速为 183 ctn/h,线性洗脱 流速为37 c1Ylul,进样体积为300 ml,柱床高度为 13.8 cm,洗 脱液为含2 M NaCI的0.02 M的磷酸盐缓冲液巾H7刀),洗 脱梯度为 ICV(柱体积)。在此条件下,hEGF的浓缩倍数达 4.3,回收率达80%,纯度达20%以上。从hEGF的扩张床分 离与填充床分高的优化结果发现,其产品的纯度、浓缩倍数及 生产能力都有较大提高,故STngAMLINE DEAE以扩张床模 式分离高附加值产品hEGF具有较好的效果。 考察了不同的线性流速、进样体积与柱床高度对hEGF在凝胶层析 中的分离特性和样品组分间分离度的影响。结论如下: 门)hEGF的保留体积具有流速依赖性,hEGF的分配系数随线性 流速的改变而改变,随样品体积的增加而上升,但柱床高度对 hEGF的分配系数几乎无影响。hEGF的标准偏差随进样量的 上?
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:Q819

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 郑志永;姚善泾;;应用溶氧反馈控制高密度培养重组大肠杆菌过程中乙酸的产生[J];高校化学工程学报;2006年02期
2 王伟;徐云龙;;生长因子脂质体的研究现状[J];中国新药杂志;2007年07期
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1 靳挺;基因工程药物人干扰素-γ体外重折叠复性研究[D];浙江大学;2004年
【参考文献】
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1 赵忠良,路凡,陈南春,柴玉波,陈苏民;人表皮生长因子在大肠杆菌中的融合表达与活性分析[J];第四军医大学学报;1997年05期
2 梁峰,郭治安,高俊萍,常建华;在高效离子交换色谱上蛋白质累加进样分离法的研究[J];分析化学;1998年08期
3 陆豪杰,康经武,杨永坛,欧庆瑜;聚乙烯吡咯烷酮动态涂敷毛细管电泳柱分离碱性蛋白质[J];分析化学;1999年05期
4 张丽华,屠红 ,吴高德,徐来根,夏其昌;HPLC在线二阶微分光谱法检测人表皮生长因子的C-端肽[J];高技术通讯;1995年05期
5 金业涛,冯小黎,苏志国;扩张床吸附技术及其在生物化工中的应用[J];化工进展;1998年04期
6 梅乐和,姚善泾,林东强,朱自强;生物分离过程研究的新趋势——高效集成化[J];化学工程;1999年05期
7 胡洪波,姚善泾,朱自强;膨胀床吸附层析及其在生化分离中的应用[J];化学工程;1999年01期
8 刘坐镇,陈士安,邬行彦;扩张床吸附技术[J];离子交换与吸附;1999年03期
9 刘农乐,蒋滋慧,赵明,王会信,赵强,周廷冲;表皮生长因子的发光免疫测定法——吖啶酯标记抗体的应用[J];生物化学与生物物理进展;1993年01期
10 贺师鹏,黄天贵,黄力新,郭淑英;放射受体法测定表皮生长因子[J];生物化学与生物物理进展;1993年03期
【共引文献】
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1 郑敏;树立“两自”观念 注重课堂实践[J];安徽教育学院学报;2001年03期
2 游银伟,汪天虹,岳寿松;海洋青霉(Penicilliumsp.)FS010441的形态学观察和产纤维素酶性质初步研究[J];山东农业科学;2005年01期
3 李瑞国;朱秀敏;杨慧;;不同萌发期绿豆芽蛋白质含量的测定及营养价值分析[J];山东农业科学;2011年01期
4 葛宏华,孙莉宁,张其瑞;家蚕血淋巴蛋白的发育变化和BmLSP的纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年03期
5 孔小卫,李坤,江洪波;二甲亚砜对水稻浸种及苗期的后续效应研究[J];安徽大学学报(自然科学版);2002年03期
6 刘晓颖,丁毅;鸡脑P物质的制取及分析[J];安徽大学学报(自然科学版);2003年01期
7 朱华庆,陈飞,谢惠安,张萍;热击对水稻(O.sativaL.)叶绿素a,b及POR同功酶的效应[J];安徽大学学报(自然科学版);1998年04期
8 叶生梅;多菌联合固态发酵生产酒糟菌体蛋白饲料的实验研究[J];安徽机电学院学报;2001年04期
9 孔小卫;二甲亚砜(DMSO)对大豆萌发及幼苗期生理生化指标的影响[J];安徽机电学院学报;2002年04期
10 叶生梅,王岚岚,欧阳明;一株纤维素酶产生菌的固态发酵初步研究[J];安徽工程科技学院学报(自然科学版);2003年01期
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1 周亚军;康建波;刘妍菊;苏丹;马龙彪;;混合肉肌原纤维蛋白特性研究[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
2 褚西宁;罗建颖;程巧梅;;棒束孢霉碱性磷酸酯酶部分理化性质的研究[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第四卷)[C];1996年
3 蒋少军;李志忠;张新璞;胥顺吉;;大麻纤维性能及生物酶脱胶工艺研究[A];第八届功能性纺织品及纳米技术研讨会论文集[C];2008年
4 蒋少军;李志忠;张新璞;胥顺吉;;大麻纤维的生物酶脱胶技术[A];铜牛杯第九届功能性纺织品及纳米技术研讨会论文集[C];2009年
5 蒋少军;李志忠;张新璞;;亚麻纤维的酶处理技术[A];雪莲杯第10届功能性纺织品及纳米技术应用研讨会论文集[C];2010年
6 杨云娟;钟巧芳;唐湘华;李俊俊;黄遵锡;;一株异淀粉酶产生菌的粗酶酶学性质研究及发酵条件优化[A];饲用酶制剂开发与应用技术交流研讨会论文集[C];2010年
7 赵国华;罗爱民;;萃取分离技术最新进展[A];'99全国包装与食品加工技术研讨会论文集[C];1999年
8 龚加顺;胡小静;彭春秀;周红杰;;普洱茶及其原料多糖分子组成及光谱学特性研究[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第二卷)[C];2010年
9 柏云;朱晓红;仲敬荣;褚明福;;铀离子的微生物富集回收技术[A];2006全国核材料学术交流会论文集[C];2006年
10 肖晶晶;郭萍;田云龙;于江;朱昌雄;;不同腐植酸原料中的微生物分离与鉴定[A];第六届全国绿色环保肥料新技术、新产品交流会论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李彧娜;微孢根霉华根霉变种CICIM F0088生淀粉酶系的研究[D];江南大学;2010年
2 袁久刚;离子液体—蛋白酶处理对羊毛表面性能的影响[D];江南大学;2010年
3 徐军;富苯丙氨酸碱性短肽的发现及其对蛋白质等电点和免疫交叉反应的影响[D];华南理工大学;2010年
4 高云涛;丙醇—盐双水相和盐诱导浮选法分离贵金属的研究[D];昆明理工大学;2008年
5 陈义勇;桦褐孔菌多糖纯化、结构及其抗肿瘤机制研究[D];江南大学;2010年
6 田壮;食品中甾体激素残留免疫分析技术与方法研究[D];江南大学;2010年
7 邵凌健;槐糖脂补料发酵及抗真菌、抗肿瘤活性的研究[D];山东大学;2010年
8 邱桔;城市生态风险评价研究[D];中南林业科技大学;2006年
9 迟雷;基于过程控制优化的重组大肠杆菌高密度发酵研究[D];西北大学;2011年
10 孙红男;苹果渣中多酚类物质的高压脉冲电场处理及其生物活性研究[D];北京林业大学;2011年
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1 周艳华;可溶性鸡蛋壳膜蛋白与多肽的制备及其抗氧化活性的研究[D];华中农业大学;2010年
2 冷一非;嗜热链球菌抗噬菌体菌株的选育、培养及冻干发酵剂的研究[D];华中农业大学;2010年
3 申君;桃蚜的抗药性监测、杀虫剂的配方筛选及其增效生化机理的研究[D];华中农业大学;2010年
4 杜学敏;蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分组分的性质[D];河北大学;2007年
5 刘辉;红曲霉发酵提高γ-氨基丁酸含量的研究[D];安徽工程大学;2010年
6 潘海波;利用DNA体外重组技术构建高活性纤维素酶基因工程菌[D];安徽工程大学;2010年
7 洪伟;酪蛋白中血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的研究[D];安徽工程大学;2010年
8 刘川顺;谷氨酰胺合成酶产酶菌株的筛选[D];安徽农业大学;2010年
9 王美花;里氏木霉swollenin在米曲霉中的表达和纯化[D];浙江理工大学;2010年
10 吕文兵;杜氏盐藻异养转化藻株的鉴定及初步功能分析[D];郑州大学;2010年
【同被引文献】
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1 张德震,吴淑华,侯云德,苏成芝;重组人γ干扰素的纯化[J];病毒学报;1989年01期
2 杨芳,袁长吉,李舜华;基因重组γ-干扰素与化疗合用治疗慢性粒细胞白血病的临床观察[J];白求恩医科大学学报;1999年05期
3 刘红岩,马雁冰,李智华,姬秋彦,李健峰,周丽,郭仁,戴长柏;人白细胞介素-6基因的克隆表达和纯化的研究[J];白求恩医科大学学报;1999年01期
4 郑平华,陆峰,郭嘉,陆德如;伴同蛋白GroE的纯化及对蛋白质复性的作用[J];高技术通讯;1995年08期
5 何诚;;干扰素的分子生物学研究进展[J];国外医学(微生物学分册);1994年04期
6 阎哲;原核细胞表达的重组蛋白质复性研究进展[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1997年01期
7 唐松山,刘钟滨;大肠杆菌外源基因表达产物的下游技术[J];国外医学.遗传学分册;1995年03期
8 修志龙,安利佳,曾安平,Deckwer Wolf-Dieter;甘油连续生物歧化过程的过渡行为及其数学模拟[J];高校化学工程学报;2000年01期
9 王守业,徐小龙,刘清亮,解永树;荧光光谱在蛋白质分子构象研究中的应用[J];化学进展;2001年04期
10 王子轩,杨迪,王启松,李伯良,吕兆海,虞建良,郑宏大,范佩芳,唐建伟,钱民章,郭海鸿,姚曼华,郑仲承,刘新垣;合成的人γ-干扰素cDNA在大肠杆菌的高效表达[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1994年10期
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1 高永贵;溶菌酶和重组人干扰素-γ包涵体体外折叠复性的研究[D];浙江大学;2002年
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1 张佳艺;小分子伴侣的制备及其协助基因工程蛋白体外重折叠的初步研究[D];浙江大学;2003年
2 吴飞;神经生长因子柔性脂质体及其脑靶向性的初步研究[D];沈阳药科大学;2002年
【二级引证文献】
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1 黄金;谢希贤;徐庆阳;温廷益;陈宁;;溶氧强制振荡对L-苏氨酸发酵产率及其代谢流迁移的影响[J];高校化学工程学报;2010年01期
2 胡爽;蔡海波;蒋加庆;谭文松;;表达GLP-1融合蛋白的重组大肠杆菌分批补料培养工艺优化[J];高校化学工程学报;2010年03期
3 翁雪清;施巧琴;吴松刚;;氧载体、表面活性剂及H_2O_2对L-phe发酵影响的研究[J];氨基酸和生物资源;2012年02期
4 胡丹;周希贵;胡炎华;李岩;;L-苏氨酸发酵过程中乙酸的控制[J];发酵科技通讯;2012年04期
5 蔡友华;严杰能;陆最青;;L-苏氨酸工业研究进展[J];广东饲料;2012年12期
6 逄春华;董海霞;包艳玲;;生物制药产业的发展及药品生物的测定[J];黑龙江医药;2011年05期
7 田吉来;唐琴琴;赵应征;李校堃;孙昌正;;成纤维细胞生长因子给药技术研究进展[J];中国生化药物杂志;2010年05期
8 薛文娇;侯文洁;;重组大肠杆菌高密度发酵过程中乙酸的控制[J];陕西农业科学;2011年06期
9 冯志彬;徐庆阳;陈宁;;代谢副产物对L-苏氨酸发酵的影响及应对措施[J];食品与发酵工业;2007年06期
10 程立坤;赵春光;黄静;徐庆阳;谢希贤;陈宁;;葡萄糖浓度对大肠杆菌发酵L-色氨酸的影响[J];食品与发酵工业;2010年03期
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1 薛文娇;重组E. coli生产类人胶原蛋白发酵调控策略与500L中试规模放大方法优化[D];西北大学;2009年
2 赵喜红;HIV结构蛋白重组表达复性及检测方法的研究[D];华南理工大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 岳晖;DsbC对植酸酶体外折叠及功能影响的研究[D];山东农业大学;2010年
2 黄丽霖;高密度限氧酵母发酵木糖生产乙醇及其细胞应激乙醇耐受机理的研究[D];湖南工业大学;2011年
3 谭培生;核糖核酸酶A的体外重折叠过程研究[D];浙江大学;2006年
4 梅春升;猪γ干扰素的克隆表达及其联合中药抗PRRSV的研究[D];华中农业大学;2007年
5 陈莹莹;线性聚N-异丙基丙烯酰胺协助蛋白质体外复性研究[D];浙江大学;2008年
6 邓宇;Bacillus subtilis WSHDZ-01发酵生产过氧化氢酶条件优化[D];江南大学;2008年
7 马立伟;微生物多糖热凝胶高生产强度发酵工艺研究[D];江南大学;2008年
8 刘靖;米根霉高密度半连续发酵L-乳酸初步研究[D];合肥工业大学;2009年
9 姚丹丹;基于内外源胁迫诱导的Bacillus subtilis过氧化氢酶发酵优化和发酵过程放大[D];江南大学;2009年
10 张伟;基于一般化学习网络的非线性系统预测、辨识及内模控制方法研究[D];北京化工大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵忠良,陈南春,李飙,陈苏民;人表皮生长因子基因化学及酶促合成与克隆[J];第四军医大学学报;1991年03期
2 康经武,欧庆瑜;二烯丙基聚乙二醇20M交联键合型毛细管电泳柱的制备及其评价[J];分析化学;1996年02期
3 常建华;分离蛋白质的高效离子交换色谱填料的研究(Ⅳ)──强阴离子交换色谱填料的合成及应用[J];高等学校化学学报;1995年11期
4 常建华;分离蛋白质的高效离子交换色谱填料的研究(Ⅲ)──膦酸基阳离子交换色谱填料的性能[J];高等学校化学学报;1995年12期
5 伍艳辉,王世昌;亲和膜分离技术研究进展[J];化工时刊;1997年08期
6 蒋滋慧;刘农乐;王会信;王永强;黄蓉蓉;吴雪琼;;吖啶酯标记抗体应用于结核病人抗体水平的测定[J];军事医学科学院院刊;1991年04期
7 屠红旻,夏其昌;蛋白质和多肽 C 端氨基酸序列研究进展[J];生物化学与生物物理进展;1993年03期
8 王海波,徐来根,吴高德,夏其昌,应国光,王兴娟,童葵塘;基因工程人γ干扰素C端的结构分析及功能作用[J];生物工程学报;1994年01期
9 张毅,屈贤铭,杨胜利;粒细胞巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素-3融合蛋白的表达研究[J];生物工程学报;2000年03期
10 常建华,郭立安;蛋白质的累加进样分离法的研究[J];色谱;1997年02期
【相似文献】
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1 刘大壮;王福安;黄恩才;张量渠;;气液色谱中同系物的保留体积随温度变化的关系(Ⅱ)[J];河南师范大学学报(自然科学版);1964年03期
2 刘大壮;黃恩才;王福安;张量渠;;使用氣相色譜鑑定同系物官能团的一个新方法[J];河南师范大学学报(自然科学版);1964年02期
3 黄茂春,钱玉民,戴玉文,曲淑蕙,王书媛,徐福培,王志模;气相色谱定性指标和区域宽度变化规律——第四部份:气相色谱定性指标随柱温的变化规律的探讨[J];中山大学学报(自然科学版);1964年01期
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5 卢佩章;吕祖芳;李浩春;;控制气液色谱分离的因素[J];科学通报;1957年22期
6 文承诚;在聚苯乙烯、四氢呋喃体系中温度对凝胶渗透色谱(GPC)结果的影响[J];吉林大学学报(理学版);1981年02期
7 郑禄彬;徐荫晟;;C_5及C_6饱和烃的气液色层分析[J];科学通报;1958年03期
8 王福安;刘大壮;;气相色譜中馬丁公式的图算法 Ⅱ、较低大气压力下使用的算图[J];河南师范大学学报(自然科学版);1965年04期
9 吴征铠;李长林;;气体色层分析(Ⅰ)—气液分配色层的控制因素[J];复旦学报(自然科学版);1959年02期
10 刘大壮;常凤善;叶剑虹;胡葆平;王鸿新;张树屏;;乙炔——氯乙烯混合气的气相色谱分析 Ⅲ、以磷酸三丁酯作为固定液[J];河南师范大学学报(自然科学版);1965年02期
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1 贺智端;阮梅娜;金晓明;黄家贤;李春荣;王林富;;环型聚苯乙烯的分子尺寸[A];第二届全国光散射学术会议论文集(上)[C];1983年
2 陈锚;石慧;韩尚英;王曙光;;葡聚糖凝胶G-10、G-15的合成及分离效果的研究[A];天津市第八次色谱学术交流会论文集[C];1993年
3 陈成;石恒冲;;利用反相气相色谱测定木粉的表面性能[A];第二届中国林业学术大会——S11 木材及生物质资源高效增值利用与木材安全论文集[C];2009年
4 孔祥苓;李季静;李海生;;脑活素的肽色谱图及分子量测定[A];天津市第十二次色谱学术交流会论文集[C];1998年
5 王国辉;王楠;庄云龙;;苯氧基乙酸分子记印聚合物色谱行为研究[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(上)[C];2004年
6 卢延斌;刘锐;潘远江;Alain Berthod;;逆流色谱液体固定相特性的应用-反推洗脱逆流色谱[A];中国化学会第十四届有机分析及生物分析学术研讨会会议论文摘要集[C];2007年
7 陆军;徐海兵;李德谦;;高效离心分配色谱仪对稀土萃取体系的研究[A];中国稀土学会第四届学术年会论文集[C];2000年
8 巢志茂;渋沢庸一;神藤平三郎;松本潮;竹谷孝一;糸川秀治;;牛膝高分子物质的细胞毒性及其组成的初步研究[A];1999中药研究论文集[C];2000年
9 蔡仲鉌;张福芝;;催化色谱(摘要)[A];天津市色谱研究会第一届学术报告会论文、报告(摘要)汇集[C];1980年
10 王秀凤;丁有钱;;高效液相色谱法分离镧系元素[A];中国核科学技术进展报告——中国核学会2009年学术年会论文集(第一卷·第4册)[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 童望宇;人表皮生长因子工艺的应用基础研究[D];浙江大学;2001年
2 赵国凤;疏水电荷诱导置换色谱:方法学建立和置换剂筛选[D];天津大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
1 李晓娟;凝胶色谱法在农药残留分析中的应用[D];中国农业大学;2005年
2 苑巍;离子交换电色谱纯化蛋白质的研究[D];天津大学;2005年
3 张菲;丙烯酸纤维素液晶的合成与表征[D];东北林业大学;2007年
4 张洪锋;聚醚砜改性聚丙烯的界面性能研究[D];东北林业大学;2008年
5 于娟;家蝇幼虫抗菌肽抗弓形虫作用的初步研究[D];山西医科大学;2009年
6 连进军;环境污染事故中挥发性有机物应急监测方法的研究[D];中国海洋大学;2004年
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