收藏本站
《浙江大学》 2001年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

番茄乙烯受体基因LeETR1和LeETR2的分子生物学研究

郑铁松  
【摘要】: 乙烯是调控植物生长发育的一种重要激素,植物内源乙烯的生物合成、信号转 导和生物效应的调控研究一直是一个热门课题。乙烯生物合成的途径已经阐明,而 乙烯信号转导系统的研究则刚刚起步,且主要集中在拟南芥上。但拟南芥无法作为 果实尤真是呼吸跃变型果实(如番茄)的成熟模型。 本课题在克隆番茄乙烯受体基因LeETR1和LeETR2部分特异序列的基础上, 首次将乙烯受体基因LeETR1 mRNA和LeETR2 mRNA的表达和反义抑制结合起来 研究,使研究的结果能够比较全面地反映LeETR1和LeETR2的功能特性。主要结 果如下: 1.采用RT-PCR从番茄组织总RNA中克隆了LeETR1和LeETR2的3’-端部 分序列,所克隆的LeETR1和LeETR2 cDNA的长度分别为313bP和265bp。通过序 列测定证明与文献报导的相同。以克隆的DNA序列为探针进行LeETR1 mRNA和 LeETR2 mRNA表达的核酸酶保护分析(RPA)时,分别只产生单一的特异带,说 明克隆的DNA序列具有高度特异性。 2.采用RPA方法对番茄乙烯过表达单基因突变体Epi和野生型VFN8中 LeETR1 mRNA表达特征的研究表明,在正常番茄中LeETR1 mRNA不受内源乙烯 含量的影响,呈组成型表达。LeETR1 mRNA在Epi部分组织中的表达强度发生了 改变,这些表达强度的改变与Epi的形态特征变化相吻合,提示LeETR1在叶片的形 态建成和果实成熟中可能起着重要的作用。 3.采用RPA方法对番茄乙烯过表达单基因突变体Epi和野生型VFN8中 LeETR2 mRNA表达特征的研究表明,在所有被检组织中LeETR2 mRNA均表达。 真表达丰度在叶组织中呈发育调节模式,但不受内源乙烯含量的影响;而在果实成 熟后期受乙烯的轻微诱导。LeETR2的这种表达模式明显有别于其他乙烯受体基 因。实验结果提示LeETR1、LeETR2和已知的诱导型乙烯受体LeETR3(NR)可 能分属不同的乙烯受体系统,它们在番茄乙烯信号转导中起着不同的作用。 4.我们以不同番茄品种(9551、T9253、Estrella、9209、B1)的子叶为外植 体,以附加适当配比BA和IAA的改良MS培养基(MS无机组分+B5有机组分) 为分化培养基,以不加激素的改良MS培养基为生根培养基,建立了具有高效芽再 生和生根频率的番茄再生体系。番茄品种9551、T9253、Estrella、9209和B1的最 适分化培养基上附加的激素分别为BAZ.sing几n 刀m叭、 BAZ刀mg/L+IAAO.Zing/L、BAZ.smgiL+IAAO.4mg/L、BAZ刀mg/L+IAAO.4mg/L、 BAZ.sing/L0.4mg/L;在最适培养基上它们的芽分化频率分别为 92.4%、 88.5%、gi石%、89.2%和94.1%。 5.外植体尤其是下胚轴外植休的放置方式对分化频率有明显的影响。采用下 胚轴作外植体时,一定要正向放置,否则苗再生的频率会严重下降。 6.番茄品种 9551、T9253、Estrella、9209和 BI对卡那霉素(Xill)的敏感 性不同。9551、T9253、Estrella和 9209在附加 25mg/L loll的培养基上其分化即完 全受抑制,而抑制番茄 BI的再生则需要附加 100mg/L loll。 7.以中间表达载体 pPZPll IA为基础,以克隆的乙烯受体基因 LeETRI fD LeETRZ的特异序列为目的插入DNA,构建了反义表达载体pPZPEI和 pPZPEZ。 通过PCR和酶切验证,表明 LeETRI和 LeETRZ的反义表达载体己经构建成功,并 己转入农杆茵中,为下一步的番茄转基因研究奠定了基础。 8.以 7-9 日龄的番茄 BI无菌苗子叶为外植体,根癌农杆菌 LBA4404 OPZPEI)、LBA4404OPZPEZ)、EHA105toPZPEI)%D EHA105 toPZPEZ)为介导,采 用叶盘转化法进行了反义LeETRI和反义LeETRZ的遗传转化研究。在筛选压力为 Km 100mg/L的分化培养基和筛选压力为 M 50mg/L的生根培养基上,2种反义转 基因番茄各获得了082%和0.91%的阳性转化苗再生频率:通过PCR和Southern blot的结果证明,己经获得了反义LeETRI和反义LeETRZ的转基因番而檀株。亲代 的转基因番茄目前在温室中生长良好。同时在进行遗传转化的过程中,我们也对农 杆菌的类型、农杆茵的浸染方式、共培养及预培养时间等多种因素对转化效率的影 响进行了研究。证明LBA4404和E皿105都可有效地进行番茄的遗传转化 9.对亲代转基因番茄生长特性的初步研究表明,两种转化植株都表现出了一 定的抗裹老特性,但初步观察真结果率低于末转化番茄。转化番茄与对照相比在生 长特性上的这些差异,预示着乙烯受体基因LETR!和LETRZ与番茄的叶片生长和 果实发育过程相夫,这一结果与我们前面对LeETRI tnRNA和LeETRZ m洲A表达 特性的研究结果相吻台。提示与诱导型的乙烯受体LeETR3(NR不同,LeETRI和
【学位授予单位】:

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 韩继成;植物乙烯受体及转基因育种研究进展[J];分子植物育种;2004年02期
2 魏绍冲,陈昆松;成熟猕猴桃果实中乙烯受体基因Ad-ETR2的克隆与序列分析[J];果树学报;2004年06期
3 魏绍冲,陈昆松,张玉,张望舒,丁建国;猕猴桃果实乙烯受体基因Ad-ETR1的克隆及其表达[J];植物生理与分子生物学学报;2004年06期
4 韩继成,江良荣,郑景生,李义珍;海南疣粒野生稻乙烯受体的保守序列分析[J];分子植物育种;2004年01期
5 曹宛虹,董亿,张劲松,陈受宜;水稻乙烯受体类似物基因的克隆及其表达特性[J];中国科学C辑;2003年02期
6 谢永红,陈学年,吕斌,丁志祥,欧毅;桃果实采后乙烯合成及乙烯受体ETR1同源基因表达模式的研究[J];西南园艺;2005年03期
7 王中凤,应铁进;植物乙烯信号转导研究进展[J];植物生理与分子生物学学报;2004年06期
8 韩继成,方宣钧;编码荔枝乙烯受体(LcERS1)的cDNA基因的克隆与分析[J];分子植物育种;2003年03期
9 王然;王成荣;秦斐斐;加藤雅也;西川芙美惠;兵藤宏;;青花菜预冷后乙烯生成特性及受体基因的表达分析[J];园艺学报;2008年06期
10 莫爱琼;万小荣;;乙烯信号转导的分子生物学研究[J];安徽农业科学;2009年29期
11 张明方,向庆宁,应铁进,杨虎清,郑铁松,杜荣茂;反义乙烯受体LeETR_2基因对番茄的转化和功能分析[J];农业生物技术学报;2003年02期
12 林积秀;;乙烯与基因表达调控关系的研究进展[J];安徽农学通报;2007年17期
13 宋春丽;马俊莲;唐霞;张子德;刘永巨;;千代田草莓乙烯受体Etr2基因克隆及序列分析[J];华北农学报;2008年06期
14 宋春丽;赵丛枝;马俊莲;;草莓乙烯受体FaEtr2基因植物表达载体构建[J];华北农学报;2010年06期
15 李正国,ElSharkawyI,LelievreJM;温度、丙烯和1-MCP对西洋梨果实乙烯合成和乙烯受体ETR1同源基因表达的影响[J];园艺学报;2000年05期
16 张志刚,巩燕,何新建,王玉军,孙仲序,张劲松,陈受宜;烟草乙烯受体类似物NTHK2全长基因的克隆及其激酶结构域生化特性(英文)[J];Acta Botanica Sinica;2003年01期
17 迟君德;王然;杨绍兰;王倩倩;王成荣;;1-MCP对大果水晶梨冷藏效果的影响[J];北方园艺;2010年14期
18 郑铁松,应铁进,何国庆,曹家树;乙烯受体基因LeETR1在番茄突变体Epi及其野生型中的表达[J];园艺学报;2001年02期
19 郑铁松,应铁进,曾广文,何国庆;乙烯受体基因LeETR1在番茄Epi和VFN8中的表达及反义表达载体构建(英文)[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);2001年02期
20 肖再云;校现周;;橡胶树胶乳铜离子含量与乙烯刺激强度的关系初探[J];热带农业科技;2010年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 曹宛虹;张劲松;陈受宜;;植物乙烯受体参与逆境胁迫反应(摘要)[A];植物分子育种——第四届全国植物分子育种学术研讨会论文集[C];2004年
2 刘茜;谢芳;文啟光;;拟南芥乙烯受体的功能分析[A];中国植物生理学会全国学术年会暨成立40周年庆祝大会学术论文摘要汇编[C];2003年
3 李志强;王三红;徐长宝;蔡斌华;章镇;;两个砂梨乙烯受体基因的克隆及全序列分析[A];中国园艺学会十届二次理事会暨学术研讨会论文摘要集[C];2007年
4 刘茜;文启光;;拟南芥乙烯受体属性及第一亚家族受体特征分析[A];2006年中国植物逆境生理生态与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];2006年
5 李凝;;乙烯的生物合成调控作用及其遗传工程[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(上册)[C];1999年
6 周欣;张杰;文光;;RTE1:拟南芥乙烯受体ETR1的调节子[A];2006年中国植物逆境生理生态与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];2006年
7 谢芳;Caren Chang;文启光;;乙烯受体亚家族分类对于受体信号的输出在生物学和功能上的意义[A];中国遗传学会植物遗传与基因组学专业委员会2005年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
8 陈明;陈金印;;1-MCP处理对采后猕猴桃果实内源激素变化的影响[A];中国园艺学会第十届会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2005年
9 汤雪奴;常立;李鹏丽;王宁宁;;乙烯受体ETR1突变对拟南芥AtACS7基因激素响应的影响[A];2007中国植物生理学会全国学术会议论文摘要汇编[C];2007年
10 贾培义;张玉环;刘燕燕;董丽;;乙烯及1-MCP处理对牡丹切花采后开花衰老进程的影响[A];2007年中国园艺学会观赏园艺专业委员会年会论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 鲍碧丽;番茄乙烯受体调控规律的研究[D];浙江大学;2008年
2 冯斗;香蕉乙烯受体cDNA的克隆与特异性表达及RNAi技术应用于鉴定植物基因功能的方法研究[D];华南热带农业大学;2003年
3 王中凤;番茄乙烯受体基因LeETR1与LeETR2的功能特性及其组织、器官特异性比较研究[D];浙江大学;2005年
4 谭辉;外源乙烯通过调节乙烯受体和信号转导元件基因表达影响月季切花开放[D];中国农业大学;2005年
5 杨虎清;乙烯受体基因LeETR1和LeETR2在番茄乙烯受体系统中的生理学功能定位[D];浙江大学;2003年
6 朱海生;草莓乙烯受体反义基因遗传转化的研究[D];福建农林大学;2008年
7 Arnold Mathew Opiyo;[D];浙江大学;2005年
8 谢芳;拟南芥乙烯受体信号作用机理的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2007年
9 宋春丽;草莓乙烯受体FaEtr2基因RNAi植物表达载体构建及遗传转化研究[D];河北农业大学;2009年
10 郑铁松;番茄乙烯受体基因LeETR1和LeETR2的分子生物学研究[D];浙江大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王佳;水稻乙烯受体与OsTPR1蛋白的相互作用研究[D];湖南农业大学;2011年
2 梅花;水稻乙烯受体OsERS1与OsERS2相互作用的初步研究[D];湖南农业大学;2012年
3 肖苏生;双链RNA介导的拟南芥ETR1基因沉默[D];华南热带农业大学;2004年
4 罗鹏;转mETR和Ipt基因对水稻生长发育和抗逆性影响的研究[D];扬州大学;2006年
5 郝海婷;蚓果芥植物资源调查鉴定及ETR1序列的进化分析[D];甘肃农业大学;2013年
6 刘方;乙烯与脱落酸对HrpN_(Ea)促进植物生长过程的调控作用[D];南京农业大学;2008年
7 汪丽;草莓乙烯受体Etr1基因克隆及其植物表达载体的构建[D];河北农业大学;2011年
8 向庆宁;乙烯受体基因LeETR1和LeETR2反义转化番茄纯合体的鉴定及其表型的初步研究[D];浙江大学;2003年
9 陈静;百合乙烯信号转导系统相关基因cDNA的克隆与序列分析[D];福建农林大学;2006年
10 张海霞;采后1-MCP和1-MCP+单果包膜处理对早酥梨黄化的控制及部分机理的研究[D];甘肃农业大学;2009年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978