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《浙江大学》 2002年
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青菜离体再生和农杆菌介导遗传转化影响因子的研究

范正琪  
【摘要】: 本文研究了青菜的再生体系和农杆菌介导转化几种重要因子的影响,并首次探讨了辐射处理对青菜再生和遗传转化的影响。 为建立青菜的高频再生体系,对影响青菜再生的因素进行了分析。在青菜的离体培养过程中,外源激素对再生有着至关重要的作用。在所用的15种激素组合中,MS培养基中附加5mg/L 6-BA和0.5mg/L NAA可以使再生频率达到最高。在培养基中添加AgNO_3对于叶离体再生具有明显的促进作用,5~7.5mg/L的AgNO3可以显著提高再生频率。不同苗龄的外植体其再生频率存在很大的差异,而且随基因型的不同而变化。最适苗龄一般在无菌苗培养3~6天,矮抗青为3天,上海青为4天,苏州青为6天。对子叶、子叶柄、带柄的子叶、下胚轴四种外植体的再生能力进行了比较,发现带柄的子叶再生频率最高,可作为建立青菜再生体系的适宜外植体。基因型对再生也有重要的影响,不同基因型的再生能力有很大差异。在所用的5个青菜品种中,以香港菜心的再生频率最高,为78%,其它依次为苏州青、矮抗青、上海青、高桦白菜。 为了能有效地杀除共培养后残余的农杆菌和筛选转化体,测定了青菜对5种抗生素的敏感性。经实验证明,离体培养的子叶对潮霉素的敏感性大于卡那霉素。因此,在青菜的遗传转化中应使用潮霉素作为筛选转化体,浓度以25mg/L为宜。在所用的羧苄青霉素、氨苄青霉素、头孢霉素三种抑菌抗生素中,根据它们对芽再生的影响,应首选羧苄青霉素。 为建立农杆菌介导青菜转化的稳定体系,以gus基因瞬时表达频率为指标,对影响转化频率的几个重要因子进行了优化。通过对菌液浓度、感染时间、共培养时间的梯度实验得出,菌液浓度为OD600=0.5、感染10~15分钟、共培养5天时,gus瞬时表达频率达到最高。不同的农杆菌其转化效果不同,在所用的2个农杆菌菌株中,用EHA105转化时,gus瞬时表达频率高于LBA4404。同一菌株与不同的质粒组合,其转化频率也有差异,在菌株EHA105与3种质粒pKUB、pKUC和pKSB的组合中,以EHA105(pKUC)的转化频率最高。基因型对转化频率也有重要的影响,在所用的5个青菜品种中,以高桦白菜的gus瞬时表达频率最高,为54%,其它依次为上海青、苏州青、矮抗青、香港菜心。 本文还研究了Y射线辐射处理对青菜离体再生和转化的影响。在再生试验时, 分别采用了Y射线处理外植体的供体一无菌苗和培养中的外植体。发现用l~SGy 的剂量处理外植体能明显促进不定芽的再生。在转化时,分别对在感染前和感染后 对外植体进行了辐射处理。结果表明在感染后用低剂量处理有助于圳瞬时表达的 提高。这一结果证明,在进行青菜的组织培养和转化时,辅以低剂量的Y射线处理, 可以提高再生和转化频率。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S634.03

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 梁婷;刘毅;蔡应繁;岳显可;江怀仲;何晓红;;应用正交试验法优选茎瘤芥高效遗传转化体系[J];安徽农业科学;2012年14期
中国硕士学位论文全文数据库 前7条
1 李海萍;萝卜带柄子叶离体再生体系的建立及遗传转化[D];西北农林科技大学;2011年
2 茹磊;大白菜离体再生体系的建立及遗传转化[D];西北农林科技大学;2011年
3 史超;农杆菌介导的菜心遗传转化研究[D];河南农业大学;2011年
4 马茜;大白菜BcDREB1基因的遗传转化研究[D];河北农业大学;2010年
5 孟箭;农杆菌对大白菜种子萌发及植株生长发育的影响[D];西北农林科技大学;2010年
6 胥宇建;大白菜子叶再生体系的建立及遗传转化[D];西北农林科技大学;2010年
7 张永侠;农杆菌介导的转Bt cry1Iα基因抗虫花椰菜的研究[D];东北农业大学;2010年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 苏军,段榕琦,胡昌泉,王锋;农杆菌介导小白菜的gus基因瞬间表达[J];福建果树;2000年02期
2 关雄,黄志鹏,高日霞;苏云金芽胞杆菌ICP基因工程菌的研究进展[J];福建农业大学学报;1995年02期
3 易自力,刘选明,周朴华;植物抗虫基因的研究与应用[J];高技术通讯;1999年06期
4 秦新民,高成伟,王任翔,李春瑶;小白菜子叶离体培养再生系统的建立[J];广西师范大学学报(自然科学版);1997年04期
5 高成伟,王任翔,李凤英;小白菜离体培养植株再生方式的组织学研究[J];广西师范大学学报(自然科学版);2001年01期
6 刘凡,姚磊,李岩,曹鸣庆,刘公社;利用大白菜小孢子胚状体获得抗除草剂转基因植株[J];华北农学报;1998年04期
7 范家霖,杨保安,张建伟,王柏楠;组织培养在菊花辐射育种中的应用研究[J];河南科学;1996年04期
8 林良斌,官春云;Bt毒蛋白基因的研究进展[J];湖南农业大学学报;1997年04期
9 刘智宏,胡张华,郎春秀,黄锐之,陈锦清;大豆幼嫩子叶离体培养及辐照处理配合基因枪遗传转化研究[J];核农学报;2001年05期
10 申馥玉,邱庆树,王传堂,刘光臻,毕英娜,苗华荣,臧新运;辐照花生离体果针组培诱变效应的研究[J];核农学通报;1994年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘栓桃,赵智中,何启伟;大白菜转基因育种及分子标记研究进展[J];山东农业科学;2004年03期
2 夏广清,何启伟;大白菜雄性不育及其机理的研究进展[J];山东农业科学;2004年06期
3 赵志文,崔德才;生物技术在三叶草遗传育种研究中的应用[J];山东农业科学;2005年02期
4 王玉珍;刘永信;魏春兰;;马尼拉草茎尖组织培养优化组合筛选[J];山东农业科学;2006年01期
5 徐文玲;王淑芬;何启伟;刘栓桃;刘贤娴;;萝卜高频再生体系的建立[J];山东农业科学;2006年06期
6 马雪;邱丽娜;弓爱君;郎序菲;王兆龙;;Bt生物农药研究进展[J];山东农业科学;2009年10期
7 魏国芹;戴洪义;孙玉刚;梁美霞;安淼;;榅桲离体培养繁殖的研究[J];山东农业科学;2010年01期
8 张晓东;李利斌;宋宜现;李化银;刘立峰;高玲;高建伟;;大白菜高效稳定遗传转化体系的建立[J];山东农业科学;2010年02期
9 刘媛媛;张春庆;吴承来;;LeJA2基因沉默表达载体导入番茄转化系统的建立[J];山东农业科学;2010年02期
10 董飞;陈运起;刘世琦;高莉敏;;蔬菜游离小孢子培养的研究进展[J];山东农业科学;2011年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黄月琴;薛建平;;植物抗病分子机制及抗病基因工程研究进展[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 马慧;赵开军;徐正进;;含芥菜几丁质酶基因的双元表达载体的构建[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
3 赵琦;杨奇志;渠柏艳;潘宁;王振莲;潘光堂;;Thaumatin基因在玉米胚幼中的表达[A];2004全国玉米种质扩增、改良、创新与分子育种学术会议论文集[C];2004年
4 尹钧;任江萍;李志岗;李磊;周苏玫;卫丽;宋丽;;转基因抗穗发芽小麦的获得[A];中国作物学会2007年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2007年
5 吴洁;周宇;张雪梅;阎文昭;;幽门螺杆菌热休克蛋白基因HspB-C对甘薯遗传转化的研究[A];中国核科学技术进展报告——中国核学会2009年学术年会论文集(第一卷·第8册)[C];2009年
6 胡开林;;十字花科蔬菜花药、花粉培养的研究进展[A];中国科学技术协会第二届青年学术年会园艺学论文集[C];1995年
7 杨广东;李艳娥;上官晓霞;;大白菜遗传转化系统优化的研究[A];中国园艺学会第四届青年学术讨论会论文集[C];2000年
8 侯喜林;;不结球白菜育种研究新进展[A];全国蔬菜遗传育种学术讨论会论文集[C];2002年
9 蒋武生;原玉香;张晓伟;耿建峰;韩永平;高睦枪;栗根义;;提高大白菜游离小孢子胚诱导率的研究[A];全国蔬菜遗传育种学术讨论会论文集[C];2002年
10 梅时勇;姚芳;张新毅;;萝卜花药培养[A];全国蔬菜遗传育种学术讨论会论文集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐丽;马铃薯Y病毒复制酶基因介导的病毒抗性研究[D];山东农业大学;2010年
2 刘宏波;甘蓝型油菜抗病虫基因遗传转化及转基因植株抗性鉴定的研究[D];浙江大学;2010年
3 李俊;拟南芥阿拉伯半乳糖蛋白基因AtFLA3生物学功能研究[D];武汉大学;2010年
4 王丽丽;大白菜核基因雄性不育系定向转育及分子标记辅助育种研究[D];沈阳农业大学;2010年
5 冯守千;红梨着色机理的研究[D];山东农业大学;2011年
6 马进;水稻条纹病毒(RSV)RNA3、RNA4的克隆与抗RSV转基因水稻的培育[D];山东农业大学;2011年
7 姜芳;马铃薯Y病毒CP基因不同区段对发夹RNA和人工的miRNA介导的病毒抗性的影响[D];山东农业大学;2011年
8 王小刚;湖北麦冬种植优化和遗传多样性研究[D];华中科技大学;2011年
9 郝金凤;无载体无选择标记转基因耐贮藏甜瓜的培育[D];内蒙古大学;2010年
10 杜振国;三种水稻病毒基因沉默抑制子的鉴定和研究[D];福建农林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张庆福;枳精氨酸脱羧酶基因(PtADC)转化烟草提高抗脱水研究[D];华中农业大学;2010年
2 兰楠;利用天南星科凝集素构建内生工程真菌及其抗虫防病效果研究[D];华中农业大学;2010年
3 刘红梅;农杆菌介导百子莲抗寒基因CBF1高效转化体系的建立[D];华中农业大学;2010年
4 魏礼玲;MYB转录因子家族相关EST干涉载体构建及遗传转化的研究[D];华中农业大学;2010年
5 刘冉冉;枫香遗传转化体系的优化及转化PaFT基因的研究[D];华中农业大学;2010年
6 秦华伟;黄瓜再生体系的建立及耐热材料的筛选[D];华中农业大学;2010年
7 徐娟;农杆菌介导的Ac/Ds转座系统转化甘蓝型油菜的研究[D];郑州大学;2010年
8 介智靖;甘蓝型油菜小孢子培养及倍性鉴定[D];郑州大学;2010年
9 张鲁军;离子束诱导普通小麦小偃81 HMW-GS 1Ax1缺失突变家系突变机制研究[D];郑州大学;2010年
10 刘无双;拟南芥种子特异表达基因启动子分析[D];山东农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘栓桃,赵智中,何启伟;大白菜转基因育种及分子标记研究进展[J];山东农业科学;2004年03期
2 徐文玲;王淑芬;何启伟;刘栓桃;刘贤娴;;萝卜高频再生体系的建立[J];山东农业科学;2006年06期
3 张晓东;李利斌;宋宜现;李化银;刘立峰;高玲;高建伟;;大白菜高效稳定遗传转化体系的建立[J];山东农业科学;2010年02期
4 于洪欣,柳建军,冯兆礼;大白菜外植体分化诱导及植株再生的研究[J];山东农业科学;1998年05期
5 江力;孔小卫;吴晓杰;李少松;;烟草原生质体的分离纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2006年06期
6 薛仁镐;;农杆菌介导大豆萌动种子遗传转化的影响因素研究[J];安徽农业科学;2008年07期
7 杜金霞;庞实锋;徐岩;许延铎;汪洪;刘秀明;薛萍;肖艳双;李营;李洪志;李校堃;;油菜子叶及下胚轴对潮霉素敏感性研究[J];安徽农业科学;2009年06期
8 熊先军,杨丽梅,刘明月,方智远;蔬菜转基因研究进展[J];北方园艺;2004年01期
9 张国英,刘美娟;不结球白菜“苏州青”下胚轴、子叶高频再生技术研究[J];北方园艺;2004年01期
10 费瑞,杨洋,张丽娇,高久春,周钇灼;蜘蛛毒素的研究概况及应用[J];吉林大学学报(医学版);2004年06期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 薛万新;白菜类蔬菜叶球发育相关基因的分子克隆及其转基因植物研究[D];西北农林科技大学;2001年
2 唐桂香;油菜高效再生体系的创建及农杆菌介导法基因转化研究[D];浙江大学;2004年
3 严继勇;BcpLH反义基因在大白菜中的转化及其功能的研究[D];浙江大学;2004年
4 徐恒戬;利用真空渗入法获得转基因抗虫白菜及其转化机理的研究[D];山东农业大学;2004年
5 孙保娟;白菜花组织再生体系的建立及离体条件下阶段发育转变的研究[D];浙江大学;2005年
6 夏广清;GA对大白菜开花的诱导效应及利用RNAi技术获得晚抽薹转基因大白菜[D];山东农业大学;2005年
7 韩德俊;甘蓝型油菜再生体系与农杆菌介导的甜菜碱合成基因遗传转化研究[D];西北农林科技大学;2005年
8 赵军良;基因工程改良大白菜的抗虫抗病性研究[D];山西大学;2006年
9 唐微;Bt抗虫水稻的培育[D];华中农业大学;2006年
10 朱波;不结球白菜抗逆相关转录因子的克隆及耐热耐寒相关蛋白的功能鉴定[D];南京农业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 宋正旭;小白菜植株原位真空渗入遗传转化体系的研究[D];西北农林科技大学;2002年
2 樊明琴;结球白菜高效离体不定芽再生体系的研究[D];南京农业大学;2004年
3 杜雪玲;多年生黑麦草和结缕草再生体系及以农杆菌为介导的抗草甘瞵遗传转化体系建立的研究[D];甘肃农业大学;2004年
4 朱丽华;大白菜下胚轴高效离体不定芽再生的研究[D];南京农业大学;2005年
5 吴涛;农杆菌介导CryIAc基因高效转化辣椒的改进方法[D];华中师范大学;2005年
6 赖来;农杆菌介导的MADS-box基因转化黄瓜初步研究[D];上海交通大学;2007年
7 屈会玲;橙色大白菜离体再生体系的建立及原生质体分离[D];西北农林科技大学;2007年
8 陈敏敏;不结球白菜离体培养再生体系的优化及抗病转基因研究[D];南京农业大学;2007年
9 邹智;油菜安全高效转化体系研究[D];中国农业科学院;2008年
10 郑丽娟;黄瓜离体培养及根癌农杆菌介导的遗传转化体系的研究[D];扬州大学;2009年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 李海萍;张鲁刚;胥宇建;范爱丽;;萝卜遗传转化体系的建立[J];中国瓜菜;2011年04期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 刘学成;大白菜真叶离体再生体系的研究[D];西北农林科技大学;2011年
2 李海萍;萝卜带柄子叶离体再生体系的建立及遗传转化[D];西北农林科技大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 秦新民,刘佩瑛;蔬菜作物基因工程研究进展(上)[J];长江蔬菜;1999年11期
2 何龙飞,周嫦,王爱勤;青菜的原生质体培养[J];广西农业大学学报;1996年03期
3 秦新民,高成伟,王任翔,李春瑶;小白菜子叶离体培养再生系统的建立[J];广西师范大学学报(自然科学版);1997年04期
4 李鹏飞,郭碧霞;结球莴苣顶芽及叶片组织培养(初报)[J];华南农学院学报;1980年03期
5 沈庆康;包建忠;;菊花辐射诱变研究初报[J];核农学通报;1989年05期
6 邱庆树;;花生辐射诱变遗传育种的研究概况[J];核农学通报;1989年06期
7 郭安熙;杨保安;范家霖;王柏楠;张建伟;张经芬;刘志强;王士荣;安熙乐;;金光四射等六个菊花新品种的辐射选育[J];核农学通报;1991年02期
8 毛慧珠,唐惕,曹湘玲,白永延,郭培福,符文俊;抗虫转基因甘蓝及其后代的研究[J];中国科学C辑:生命科学;1996年04期
9 贾士荣;植物遗传转化的进展[J];江苏农业学报;1990年01期
10 陆春贵;徐鹤林;余文贵;杨荣昌;曹晓凤;朱玉贤;陈章良;;番茄ACC合成酶反义cDNA转化及转基因番茄果实贮藏生理特性研究[J];江苏农业学报;1996年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 何龙飞,周嫦,王爱勤;青菜的原生质体培养[J];广西农业生物科学;1996年03期
2 王克升;青菜新品种简介[J];吉林畜牧兽医;1998年07期
3 ;“青菜萝卜”上拍台[J];长江蔬菜;2002年04期
4 王怀,陈锦璜,吴志梅,史传怀;地膜毛豆、水稻、冬青菜高效种植模式[J];上海农业科技;2004年02期
5 张虎社;;青菜喂太多 教训很深刻[J];北方牧业;2006年07期
6 张渝洁;;不同胁迫条件对青菜生理生化指标的影响[J];北方园艺;2009年06期
7 王怀香;;加工“青菜豆腐”也发家[J];农村新技术;2009年13期
8 张渝洁;;低温弱光对不同品种青菜生理生化指标的影响[J];江苏农业科学;2009年05期
9 ;蔬菜品种——青菜[J];北方园艺;2011年07期
10 蔡小宁,佘建明,朱祯,朱卫民,袁希汉,苏小俊;建立青菜(Brassica chinensis)农杆菌介导法基因转化体系[J];江苏农业学报;1997年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘鸿宇;付桂荣;汪清胤;黄永芬;;异戊烯基转移酶(IPT)基因转化青菜的研究(摘要)[A];植物分子育种——第四届全国植物分子育种学术研讨会论文集[C];2004年
2 王瑛;顾根茂;许军;潘云俊;;“龙灯”含海藻酸可溶性肥料在青菜上的应用肥效试验[A];江苏耕地质量建设论文集[C];2008年
3 毛建萍;顾伟伟;浦冠勤;;不同饲料对斜纹夜蛾饲育成绩的影响[A];中国蚕学会桑树病虫害防治学术研讨会论文集[C];2008年
4 徐江兵;林先贵;王一明;王俊华;;施用茶树菇菌糠对青菜生长及土壤生物学活性的影响[A];第八届全国绿色环保肥料(农药)新技术、新产品交流会论文集[C];2009年
5 胡学玉;李学垣;谢振翅;;青菜(Brassica campestris ssp.chinenses (L.) Makino)根际环境特征及其锌的有效性[A];土壤化学与生态环境建设和农业可持续发展学术讨论会会议指南与论文摘要集[C];2001年
6 李明;姚东伟;吴凌云;;几种植物源农药在青菜种子丸粒化包衣上的应用研究[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
7 刘传平;沈振国;;Cd在青菜、大白菜体内的积累和分布[A];中国植物生理学会第九次全国会议论文摘要汇编[C];2004年
8 朱玉英;侯瑞贤;李晓锋;朱红芳;成素云;岳翔;;夏季专用青菜新品种“新夏青2号”的选育及特性研究[A];中国十字花科蔬菜研究进展 2009——中国园艺学会十字花科分会第七届学术研讨会论文集[C];2009年
9 朱玉英;侯瑞贤;李晓锋;朱红芳;成素云;岳翔;;优质不结球白菜新品种“新绿”的选育[A];中国园艺学会十字花科蔬菜分会第六届学术研讨会暨新品种展示会论文集[C];2008年
10 叶建人;施海萍;蔡娟娟;陈謇;黄贤夫;冯永斌;陈海波;;几种常用农药在棚栽青菜上的降解及影响因素[A];第二十一届全国农药械“双交会”论文集[C];2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 范志红;吃青菜才是富人生活[N];四川科技报;2008年
2 陈杏泉;肥水内流 养大“小青菜”[N];中国航天报;2000年
3 黄勇娣;“青菜新家族”让市民菜篮子无忧[N];解放日报;2007年
4 见习记者 张正伟 通讯员 陈波;全市首家蔬菜直营店亮相鄞州[N];宁波日报;2011年
5 黄勇娣;“青菜新家族”让上海市民菜篮子无忧[N];农民日报;2007年
6 ;华王青菜[N];东方城乡报;2006年
7 记者 石永红;南农大研究出10个不易得病青菜品种[N];新华每日电讯;2006年
8 吴昌红 吴红梅;我省专家研发出新型青菜[N];新华日报;2006年
9 大雨;萝卜青菜 各有所爱[N];中国计算机报;2000年
10 ;“锦园新矮青”青菜[N];东方城乡报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 胡学玉;不同青菜品种吸收利用土壤锌能力的差异与机制[D];华中农业大学;2001年
2 谷运红;离子束诱变和介导转化在拟南芥中的应用[D];郑州大学;2003年
3 李宏宇;稻瘟病菌T-DNA插入突变研究[D];福建农林大学;2003年
4 黎定军;辣椒高效离体再生与遗传转化体系建立及抗病转基因研究[D];湖南农业大学;2000年
5 赵艳;基因枪介导转化的外源基因表达框和质粒在水稻中遗传和表达行为的比较研究[D];浙江大学;2003年
6 徐凌飞;梨离体再生和遗传转化的研究[D];西北农林科技大学;2005年
7 严爱兰;碘生物地球化学行为的~(125)Ⅰ示踪与植物中生物碘的稳定性研究[D];浙江大学;2008年
8 刘士旺;生防绿色木霉工程菌的构建及其诱导植物抗病性研究[D];浙江大学;2003年
9 刘菊华;麝香百合T-DNA插入突变群体的构建与分析[D];华南热带农业大学;2006年
10 申屠佳丽;蔬菜系统镉污染的土壤化学与生物学响应及蔬菜安全诊断[D];浙江大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 范正琪;青菜离体再生和农杆菌介导遗传转化影响因子的研究[D];浙江大学;2002年
2 薛艳;青菜耐铜性差异及机理探讨[D];南京农业大学;2004年
3 宋相帝;青菜对铬吸收积累的基因型差异[D];西北农林科技大学;2011年
4 刘传平;青菜、大白菜对Cd耐性及吸收积累差异的研究[D];南京农业大学;2004年
5 冯慧芳;凤眼莲发酵沼液对青菜生长和品质的影响及机理初探[D];南京师范大学;2011年
6 曹菲;青菜薄膜包装的研究[D];天津科技大学;2005年
7 黄立章;壳聚糖包膜尿素的研制及其特性与肥效研究[D];浙江大学;2004年
8 杜静;利用农业有机废弃物进行大棚CO_2施肥的发酵条件及可行性研究[D];浙江大学;2003年
9 陈峰;蚯蚓消解稻麦秸秆的效果与蚓粪的初步利用研究[D];扬州大学;2009年
10 陈林华;水稻和青菜吸收积累重金属的阻控技术研究[D];浙江大学;2008年
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