收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

OsddWRKY基因克隆及水稻基因组WRKY家族分析

李靖  
【摘要】: 利用玉米Ac/Ds系统构建水稻插入突变体库,从突变体库中筛选得到2株发育迟缓的突变体(命名为Osdd1和Osdd2)。使用inverse-PCR、Tail-PCR等方法克隆了插入位点边端序列。Osdd1突变体可能是多拷贝插入,其中一个插入到NPTII转座酶类似基因。Osdd2突变体为单拷贝、插入到一个WRKY类转录因子基因5′翻译起始区附近。根据已有的共分离数据和初步分析结果表明Osdd2突变体的发育迟缓性状是有外源基因插入引起。因此,对Osdd2突变体进行了更详细的分析。 使用克隆的边端插入序列为探针对水稻(中花11品种)进行Southern杂交分析,表明Osdd2基因在水稻基因组中是以单拷贝存在。根据国际水稻基因组测序计划结果,预测这一WRKY基因的可能的转录模式并据之设计引物。以稻瘟病菌的细胞壁成分诱导的cDNA文库为模板,对cDNA进行克降。根据PCR克隆结果,表明Osdd2基因在这个文库中可能存在两种剪接方式。其中一种含有WRKY保守域,一种缺失WRKY保守域,但都与预测结果有一定偏离。序列分析表明两种剪接方式所具有的最大ORF编码的蛋白质都含有核定位序列以及丰富的功能调节域如磷酸化位点、糖基化等。不过,使用水稻中花11的各组织的Northern杂交分析,未检测到该基因的表达。鉴于基因表达模式不清,克隆了Osdd2基因约2kb左右的启动子序列并与Gus基因融合,构建植物转化载体。使用基因枪转化的方法转化水稻,已获得抗性愈伤,正对抗性愈伤做相关处理,检测Gus活性,研究启动子可能的功能模式。 为了进一步验证本基因的功能,利用获得的包含WRKY保守域的cDNA片断构建了可能产生RNA干涉(RNA interference,RNAi)的载体,利用农杆菌转化法转化水稻,目前已经获得一批转基因苗。同时为了避免可能存在的对WRKY基因家族中的其它成员也带来影响,又构建了不含保守域的RNAi载体,目前反向重复的干涉结构已经完成。 同时,对目前能够获得的水稻基因组数据进行WRKY全家族的分析表明在水稻基因组中WRKY的成员有100多个。与拟南芥的WRKY家族相比较结果而言,水稻WRKY家族在各染色体的分布并不均匀,而且存在着WRKY基因的富集区。对两种不同植物WRKY基因的聚类分析表明,各成员在单个基因水平上基本不具有平行性,但拟南芥的每一组和亚组在水稻中都有相应的群体对应,即在组的水平上具有一定平行性。水稻中还有拟南芥中不存在的组或亚组。这些结果表明WRKY基因在进化过程中并不十分保守。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 柴静;强毅;贾荣荣;毛杰利;屈生宪;俞嘉宁;;RNA干涉AtSUS3影响拟南芥SUS家族表达模式及角果成熟[J];中国科学:生命科学;2011年08期
2 ;[J];;年期
3 ;[J];;年期
4 ;[J];;年期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 ;A group of conserved SPTT domain containing WRKY transcription factors are potential substrates of MAP kinases in plants[A];第六届中国植物逆境生理学与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];2010年
2 陈益芳;徐谦;王慧;武维华;;拟南芥WRKY转录因子在植物响应低磷胁迫中的功能分析[A];中国植物学会植物细胞生物学2010年学术年会论文摘要汇编[C];2010年
3 王晨;刘磊;姚凝聪;谭翼;马会;王夏天;何光源;杨广笑;;小麦WRKY基因的克隆、表达分析及其遗传转化[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年
4 邹长松;江文波;余迪求;;拟南芥雄配子特异表达的WRKY34基因负调控成熟花粉抗冷性[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年
5 王海华;郝中娜;谢科;吴坤陆;郭泽建;;水稻WRKY蛋白OsWRKY87的分析[A];中国植物病理学会2004年学术年会论文集[C];2004年
6 ;The WRKY transcription factor OsWRKY78 regulates stem elongation and seed development in rice[A];现代分子植物育种与粮食安全研讨会论文集[C];2011年
7 邹长松;江文波;余迪求;;Male gametophyte-specific WRKY34 transcription factor negatively mediates cold stress tolerance of mature pollen in Arabidopsis[A];中国植物学会植物细胞生物学2010年学术年会论文摘要汇编[C];2010年
8 王彦华;侯喜林;;不结球白菜WRKY转录因子cDNA片段的克隆及分析[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
9 于延冲;向凤宁;;AtWRKY5转录因子调控拟南芥的开花时间[A];中国植物生理学会第十次会员代表大会暨全国学术年会论文摘要汇编[C];2009年
10 梁姗姗;于涌鲲;王丽芳;赵福宽;杜希华;孙清鹏;;茉莉酸诱导的番茄WRKY克隆[A];中国植物生理学会第十次会员代表大会暨全国学术年会论文摘要汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张春秋;辣椒Me3基因介导抗根结线虫WRKY基因CaRKNIF1的分离及其功能分析[D];中国农业科学院;2010年
2 李慧娥;中国野生华东葡萄抗白粉病株系白河-35-1转录因子基因(WRKY)表达与功能研究[D];西北农林科技大学;2010年
3 谢科;水稻WRKY10基因的功能研究[D];浙江大学;2005年
4 王育娜;辣椒WRKY转录因子cDNA的分离与功能鉴定[D];福建农林大学;2008年
5 王海华;水稻WRKY89和WRKY52基因的分离与功能研究[D];浙江大学;2005年
6 沈怀舜;WRKY家族调控植物抗逆信号途径分子机制的初步研究[D];复旦大学;2007年
7 王建飞;两个粳稻地方品种抗瘟性遗传、抗病基因定位和稻瘟菌DNA指纹类型与致病型的关系研究[D];南京农业大学;2004年
8 张颖;黄瓜低温胁迫应答转录因子CsWRKY46和CsWRKY21的表达特征与功能分析[D];中国农业科学院;2012年
9 李南羿;利用转录因子OsiWRKY和OPBP1基因提高水稻抗病及耐盐性研究[D];浙江大学;2005年
10 何莉;转录因子CTCF的功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李靖;OsddWRKY基因克隆及水稻基因组WRKY家族分析[D];浙江大学;2002年
2 王丽芳;番茄WRKY基因克隆及分析[D];山东师范大学;2010年
3 贾翠玲;葡萄WRKY基因超家族的进化分析[D];辽宁师范大学;2010年
4 喻门;小麦WRKY基因的克隆及其在逆境胁迫反应下的表达变化[D];华中科技大学;2009年
5 喻门;小麦WRKY基因的克隆及其在逆境胁迫反应下的表达变化[D];华中科技大学;2009年
6 张雅涵;黄瓜根结线虫取食位点早期形成相关WRKY基因的分离与分析[D];中国农业科学院;2011年
7 刘磊;小麦WRKY基因的克隆、表达分析及其遗传转化[D];华中科技大学;2011年
8 肖翔;辣椒一个新的WRKY转录因子的克隆及其功能初步分析[D];福建农林大学;2011年
9 刘林娟;转大豆WRKY基因烟草后代的鉴定及生理特性研究[D];哈尔滨师范大学;2011年
10 金慧;水杨酸诱导番茄WRKY转录因子的克隆及功能分析[D];大连理工大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前6条
1 李兵;RNA干涉从“根”上治病[N];健康报;2002年
2 倪永华;让基因保持沉默[N];科技日报;2005年
3 翟旺;小核糖核酸推动基因治疗大突破[N];保健时报;2004年
4 本报记者 李东辰;双链核糖核酸干涉有害基因研究获突破[N];中国高新技术产业导报;2002年
5 本报记者 操秀英;探索植物适应环境胁迫的奥秘[N];科技日报;2010年
6 方文君;留神!高级语言编写的感染型病毒开始流行[N];人民邮电;2011年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978