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抗水稻纹枯病细菌拮抗物质及菌株基因突变的研究

何青芳  
【摘要】: 拮抗细菌菌株Bacillus subtilis A30分离自水稻叶围。平皿测试表明Bacillus subtilis A30对多种植物病原菌,如病原真菌水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)等,病原细菌稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)等有强烈抑制作用。 对该菌株的生长曲线及活性曲线进行分析,可知当细菌生长到对数生长中期时(OD600约为3.5),拮抗活性开始被检测出;在细菌生长进入稳定生长期后,拮抗活性达到最大,随后趋于稳定。 将拮抗菌A30菌株接种于LB液体培养基中,37℃下培养26小时,然后8000rpm离心20min去菌体,所得的去菌培养液用40%的硫酸铵沉淀过夜后12000rpm离心20min。将得到的沉淀用磷酸缓冲液悬浮,悬浮液离心去杂后通过FPLC疏水色谱和HPLC反相色谱进行分离纯化,最后纯化得到一种拮抗物质P1。经LC-ESI-MS质谱初步判断其分子量为1476.7Da。P1物质经酸处理后活性有部分降低,对碱稳定;经120℃高温处理30min仍保持活性;同时该物质对蛋白酶K和胰蛋白酶以及乙醇、异丙醇,乙腈等有机溶剂具有稳定性。另外,P1的茚三酮反应为阴性,但经酸水解后,茚三酮反应和双缩脲反应呈阳性。根据以上结果推测它可能为一种环肽,或者为含有非氨基酸组分的肽类化合物。但拮抗菌A30菌株去菌培养液经40%的硫酸铵沉淀后所得的悬浮液通过30KDa分子量截流管截流试验发现,拮抗物质可被截流管截流,由此分析其分子量应大于30KDa,这可能是因为拮抗物质与某种大分子结合造成的。 用含Tn917转座子的pTV1-OK质粒转化A30菌株感受态细胞,在红霉素和卡那霉素双抗培养基上筛选获得6个转化子,经质粒检测发现这六株转化子均含有质粒。利用pTVl-OK质粒含有温度敏感基因的特点,通过43℃高 浙 o 大 攀 习 士 学 位 论 文 纫 婴 温处理和红霉素/卡那霉素培养基筛选,获得一批对卡那霉素敏感(丧失质粒) 但对红霉素有抗性(转座子 Tugl7插入染色体 DNA)的突变株。经抽样活性 检测发现这些突变株丧失了拈抗活性。另外,用一系列浓度梯度递增的利福 平诱导得到的A30抗利福平突变株,其不仅具有与野生株相似的形态,还表 现出与野生株相近的桔抗活性。 水稻纹枯病菌菌丝块经桔抗细菌A30菌株的去菌培养液处理后,在滤纸 上生长很缓慢,且有纠集状白色颗粒(菌丝纠集体)出现;而对照菌丝块在 滤纸上生长较快,菌丝舒展,无纠集现象。通过光镜观察,前者的菌丝有生 长扭曲,分枝增多、缩短,菌丝明显变细等异常形态学变化;而对照则生长 正常,菌丝粗壮。同时,研究发现浸过桔抗细菌A30菌株去菌培养液的菌核 萌发率只有24%,菌丝稀疏、细弱;对照菌核萌发率高达86%,菌丝浓密、 粗壮。经水稻叶片离体试验,用A30去菌发酵液浸过的水稻纹枯病菌菌丝块 比正常生长的水稻纹枯病菌菌丝块侵染水稻叶片的能力低:形成的病斑数量、 大小也要少。在田间试验中A30菌株发酵液对水稻纹枯病表现出了较好的防 治效果,防效与井岗霉素相当。


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2 ;亚洲水稻纹枯病的发生和防治[J];世界农业;1997年03期
3 万有莲,付春坤,章永发;水稻纹枯病发生与防治[J];云南农业;1997年06期
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16 范坤成,邹汉玄,李碧文,向绪友,康霄文,翦豪;水稻纹枯病预测和管理模型研究 Ⅴ.水稻纹枯病所致产量损失估计模型[J];湖南农业科学;1990年05期
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19 郑永敏;水稻纹枯病的空间分布型及序贯抽样技术的应用[J];浙江农业科学;2000年05期
20 鲁修琼,尹兆泽;水稻纹枯病的发生与防治[J];农技服务;2003年05期
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6 丁克坚;檀根甲;;影响水稻纹枯病危害损失因素的研究[A];“植物保护21世纪展望”——植物保护21世纪展望暨第三届全国青年植物保护科技工作者学术研讨会文集[C];1998年
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1 方圆;防治水稻纹枯病可以见病打药[N];江苏农业科技报;2010年
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