收藏本站
《浙江大学》 2002年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

结核分支杆菌耐多药性与rpoB及katG基因关系的研究

葛超荣  
【摘要】: 自20世纪80年代中期以来,全球范围内结核病疫情死灰复燃。导致疫情难以控制的主要原因是结核分支杆菌(结核菌)的耐多药性。利福平与异烟肼是最重要的一线抗结核药物,对结核病的防治发挥了重要作用,但目前,由于耐多药结核病的传播,这两种药物对结核病的防治作用受到严重制约。结核菌产生耐药性的主要分子机制为药物靶基因突变导致药物作用靶位的蛋白质结构的改变从而影响药物与作用靶位的结合,结核菌耐利福平和异烟肼分别与rpoB及katG基因突变密切相关。但目前对结核菌耐多药性产生的机制并不完全清楚,可能是各种耐药基因自发突变累加的结果,也可能与菌体内存在某个耐多药基因或缺失某些基因有关。本课题研究了结核菌耐多药性与rpoB及katG基因突变的关系,并对新的快速、简单、经济的结核菌耐多药性筛查方法进行了探索。为了给结核菌耐药性研究提供材料,本课题还建立了3株耐药性结核菌株。 第一部分 结核分支杆菌耐多药性与rpoB及katG基因关系的研究 为了了解结核菌耐多药性产生与rpoB及katG基因突变之间的关系,本研究收集了杭州及绍兴地区临床分离的113株结核菌,对其进行药物敏感性(药敏)试验,并对30株敏感株(对利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇均敏感的菌株)和18株耐多药株的rpoB基因的利福平耐药决定区及katG基因中包括315位密码子(其错义突变与其耐异烟肼关系最密切)在内的片段进行体外扩增,并对上 浙江大学硕士学位论文 述扩增产物进行DNA序列测定,药敏试验采用经典的间接耐药比例法。试验结果 为 64株对利福平及异烟盼均敏感、20株耐利福平但对异烟盼敏感、11株对利福 平敏感但耐异烟胁、18株耐多药。DNA测序结果显示,在18株耐多药菌株中有 16株菌株的rpoB基因 531位密码子由 TCG(丝氨酸,Ser)突变成TTG(亮氨酸, Leu),占89%,另2株菌株的rpoB基因526位密码于由CAC(组氨酸,His)突 变成 AAC(天冬酞胺,Asn),同时 533位由 CTG(亮氨酸,Leu)突变成 CCG(脯 氨酸,Pro),占11%:有6株的katG基因315位密码子由AGC(丝氨酸,Ser) 突变成ACC(苏氨酸,Thr),占44%,无其它变异类型。在30株敏感菌株中仅有 1株结核菌的rpoB基因531位密码子由TCG突变成TfG,占3%,无其它变异类 型。经四格表资料 x‘检验的确切概率检验法分析,结核菌的耐多药性与 rpoB基 因 531位密码子 TCG突变成 hG密切相关(P=1.08X 10‘),与 katG基因 315位 密码于由 AGC突变成爪C显著相关(p=l.16 X 10-‘)。上述结果提示结核菌 rPoB 基囚531位密码子由TCG向TTG突变可作为快速筛查其耐多药性的指标。为了缩 短结核菌的药敏试验时间,争取结核病的尽早治疗,降低病人的医疗费用,本研 究对结核菌耐多药性的快速、简单、经济的筛查方法进行了探索。本研究设计了 一种检测结核菌rpoB基因531位密码于由TCG向TTG突变的PCR方法,并应用 此方法对 113株临床分离株进行了检测。结果显m,18株耐多药株中 89%可检出 耐多药性,95株非耐多药株中也有20%可险出耐多药性。以经典的问接耐药比例 法为标准,peR法检测结核菌耐多药性的灵敏度为89%,特异度为80%。其中经 DNA测序的 4S株门 株敏感株及旧株耐多药株)的 eR结果与*A测序结果的 符合率为100%。因此,本研究设计的PCll方法在结核菌耐多药性初筛中具有应 用潜力。 第二部分 耐多药、单耐利福平及单耐异烟肘结核分支杆菌菌株的建立 为了给结核菌耐药性研究提质控菌株,本研究建立了耐多药、耐利福平及耐 异烟盼结核菌株。选取对所有耐多药、单耐利福平及单耐异烟胁的临床分离株进 行6次传代,每代培养物均进行经典的间接耐药比例法和菌种鉴定。最后选取六 2 浙江大学硕士学位论文 代培养物药敏试验结果都一致的耐多药、单耐利福平及单耐异烟脐菌株进行大量 增菌培养并冷冻干燥保存,建成耐多药、单耐利福平及单耐异烟胁结核菌株. 综上所述,结核分支秆菌耐多药性与rPoB基因及katG基因突变有关,与 rpoB基因的531位密码子由TCG(丝氨酸,Ser)突变成TTG(亮氨酸,Leu)密 切相关,rpoB基因的这种突变可以单独作为结核菌耐多药牲筛查的指标。据此 我们设计了一种快速、简单、经?
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R96

手机知网App
【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 刘巍;鹿源结核菌中药抗菌增效剂的筛选及其对PhoPR双组份系统基因转录水平的影响[D];吉林农业大学;2017年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 钟敏,温博海,王易伟,王安容,陈荣,陈炜;临床依赖利福平分支杆菌的初步研究[J];中国人兽共患病杂志;2001年01期
2 吴雪琼,庄玉辉,张俊仙,张晓刚,何秀云,李国利;耐多药结核病耐药分子机制的研究[J];中华结核和呼吸杂志;1997年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李强;马丽萍;高孟秋;;结核分枝杆菌依赖利福平的实验观察[J];临床肺科杂志;2015年12期
2 石洁;朱岩坤;刘国栋;马晓光;王少华;闫国蕊;邢进;李辉;;结核分枝杆菌利福平依赖株和耐药株表观形态及分子生物学差异性分析[J];中国病原生物学杂志;2014年07期
3 石洁;马晓光;李辉;闫国蕊;王少华;邢进;刘国栋;靳晓伟;李峰;;利福平依赖结核杆菌筛选及分子生物学特征初步鉴定[J];河南预防医学杂志;2013年04期
4 李同心;陈天刚;廖传玉;王静;李桓;聂晓平;易学军;周刚;钟敏;;临床分枝杆菌培养中同步筛检依赖利福平菌的应用价值探讨[J];中国防痨杂志;2013年06期
5 刘巧;邵燕;宋红焕;李国莉;杨丹丹;陈诚;竺丽梅;许卫国;陆伟;;江苏省结核分枝杆菌耐药相关基因突变特征研究[J];中华疾病控制杂志;2013年02期
6 陆军;叶松;李朝品;秦蕊;李卫鹏;;淮南矿区煤工尘肺结核患者耐多药结核分枝杆菌耐药基因rpoB序列分析[J];中华劳动卫生职业病杂志;2012年08期
7 赵莉;纳玮;周学章;王玉炯;;奶牛结核分枝杆菌rpoB和katG基因突变与多重耐药的相关性[J];中国畜牧兽医;2011年01期
8 吴园;胡频频;王易伟;李秀全;毛旭虎;钟敏;;结核分枝杆菌Rv0341蛋白编码基因iniB的多态性分析[J];中国防痨杂志;2010年11期
9 司建炜;王自立;;PCR-DNA序列测定法检测脊柱结核分枝杆菌耐药基因的研究[J];宁夏医学杂志;2010年09期
10 孟祥红;董梅;匡铁吉;杨彩娥;雷红;何菊芳;佟爱华;宋海燕;;结核分支杆菌对抗痨药物组合依赖的初步调查[J];军医进修学院学报;2010年01期
【同被引文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 周覃;裸花紫珠收敛止血及对结核分枝杆菌的抗菌作用研究[D];湖南师范大学;2014年
2 张艳玲;猫爪草生长发育特性及产量和品质影响因素研究[D];河南农业大学;2009年
3 王琰;耐药结核分枝杆菌基因突变热点筛查与检测技术平台的建立[D];第四军医大学;2004年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 钟敏,娄乐山,温博海,孙川龙;分支杆菌依赖利福平的实验观察[J];中华结核和呼吸杂志;2000年02期
2 屠德华;耐药性结核病的流行病学特征和意义[J];中华结核和呼吸杂志;1997年06期
3 ;结核病诊断细菌学检验规程[J];中国防痨杂志;1996年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张炜煜;杨修军;王慧;张立夫;李可维;;吉林省耐多药结核分枝杆菌rpoB及katG基因突变特征分析[J];中国实验诊断学;2017年10期
2 杨雪梅;戴园娟;;用莫西沙星治疗耐多药性肺结核的效果研究[J];当代医药论丛;2016年21期
3 韩涛;章健;;寒热药性刍议[J];光明中医;2014年06期
4 黄志辉;郑伟雄;邱月恒;林育佳;;《药性赋》与《中国药典》2010版药性对比分析[J];亚太传统医药;2014年14期
5 张廷;崔瑛;申玲玲;王君明;冯志毅;;中药药性复杂性与药性物质研究的思考[J];中华中医药杂志;2013年03期
6 肖小河;郭玉明;王伽伯;赵艳玲;鄢丹;罗国安;李梢;张冰;;基于传统功效的中药寒热药性研究策论[J];世界科学技术-中医药现代化;2013年01期
7 高建苑;吴立平;张荣怀;韩亚军;房海英;陈金凤;;住院老年病患者多病性和多药性研究[J];西南国防医药;2013年06期
8 颜素容;王耘;乔延江;;方剂药性特征的表述方法及其应用[J];北京中医药大学学报;2010年05期
9 唐小莉;林霏申;郭晶;张侠;;莫西沙星在耐多药性肺结核患者中的应用价值研究[J];中国继续医学教育;2015年31期
10 赵艳;;明代方剂配伍中的药性原则[J];中医文献杂志;2014年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈玲;甘辛;陈杨;李娜娜;王建华;张建勇;张泓;;新rpoB和katG基因突变的检测及其与耐利福平和异烟肼结核分枝杆菌的关系分析[A];中华医学会结核病学分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年
2 王耘;张燕玲;史新元;乔延江;;基于药性组合的中药性效规律研究框架[A];中华中医药学会中药分析分会第五届学术交流会论文集[C];2012年
3 肖小河;郭玉明;王伽伯;赵艳玲;鄢丹;罗国安;李梢;张冰;;基于传统功效的中药寒热药性研究策论[A];2013第六次临床中药学学术年会暨临床中药学学科建设经验交流会论文集[C];2013年
4 袁颖;金素安;何世民;车立娟;郭忻;;动静、刚柔药性辨[A];2013第六次临床中药学学术年会暨临床中药学学科建设经验交流会论文集[C];2013年
5 蒋俊;贾晓斌;薛璟;蔡宝昌;吴皓;;萸黄连“以热制寒”药性差异性研究概况[A];中华中医药学会中药炮制分会2009年学术研讨会论文集[C];2009年
6 郭宗儒;;药物的杂泛性与成药性[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周报告集[C];2010年
7 郭宗儒;;药物的杂泛性与成药性[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
8 敦静先;;药性词赋[A];中医药现代化研究学术大会论文集[C];2001年
9 李丽;肖永庆;张村;;炮制与药性相关性研究方法探讨[A];2010全国知名中医院院长暨道家文化与中医药养生论坛论文集[C];2010年
10 张村;李丽;肖永庆;;炮制与药性相关性研究方法探讨[A];2010中药炮制技术、学术交流暨产业发展高峰论坛论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 毕煜;品牌培育宜善用四种“药性”[N];东方烟草报;2018年
2 北京商报记者 夏姗姗;“中医重医理更要识药性”[N];北京商报;2014年
3 张雅娟;用药膳先识药性[N];卫生与生活报;2007年
4 周万龙;水果有药性[N];医药养生保健报;2003年
5 韩素芹;中药煎煮:应按药性确定方法[N];医药经济报;2000年
6 沈元良 浙江省绍兴市中医院 绍派伤寒传承工作室;药性探源说(上)[N];中国中医药报;2016年
7 浙江省绍兴市中医院 绍派伤寒传承工作室 沈元良;药性探源说(下)[N];中国中医药报;2016年
8 王霞凌;一字之差 药性迥异[N];中国消费者报;2002年
9 本报记者 王蔚佳;治疗慢阻肺 严防赖药性[N];中国消费者报;2003年
10 记者 叶芳 通讯员 戴绍飞 宋忠雷;为试药性20多次用自身做实验[N];广东科技报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 王晓燕;基于贝叶斯网络的中药寒热药性、药效及物质成分相关性的研究[D];山东中医药大学;2014年
2 杨波;植物类中药寒热药性与化学成分相关性的文献研究[D];山东中医药大学;2010年
3 周正礼;基于初生物质成分的寒热药性识别和偏最小二乘路径模型的建立[D];山东中医药大学;2012年
4 王加锋;天冬药性及配伍规律研究[D];山东中医药大学;2012年
5 崔宁;基于全基因表达谱的黄芪及其拆分组分健脾祛湿机制研究[D];山东中医药大学;2015年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 葛超荣;结核分支杆菌耐多药性与rpoB及katG基因关系的研究[D];浙江大学;2002年
2 钟春蕾;结核分枝杆菌rpoB、katG基因突变位点的克隆及其应用[D];遵义医学院;2012年
3 孙超群;逆向点杂交方法检测结核分支杆菌耐药基因katG、rpoB突变[D];第二军医大学;2005年
4 孙婧;药性组合的配伍理论模型研究[D];北京中医药大学;2015年
5 崔艳丽;烟台地区结核分支杆菌rpoB、KatG和rpsL三种耐药基因的检测与耐药相关性的研究[D];青岛大学;2006年
6 李晓晓;豆科药物药性规律研究[D];山东中医药大学;2016年
7 李萌;基于药性组合模式的《伤寒论》方剂配伍规律研究[D];北京中医药大学;2012年
8 李晓亮;基于rpoB基因的非结核分枝杆菌菌种鉴定PCR-RFLP方法的研究[D];扬州大学;2011年
9 王韵;中药寒热药性代谢组学判别模式的建立研究[D];复旦大学;2010年
10 杨花;用细胞学方法研究西药的寒热药性[D];西北大学;2013年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026