收藏本站
《浙江大学》 2002年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

神经元NMDA损伤:脑片及神经元模型、药物保护作用及信号转导特点

严乐勤  
【摘要】: 脑缺血疾病是多发的中枢神经病变,是常见的致死致残原因,在人口老龄化的现代社会,其防治意义越来越重要,本类疾病的早期发现和治疗可以极大程度地降低致死致残率。故研究其损伤/抗损伤机制,探索其防治措施,具有重大的意义。在过去的10~15年越来越多的证据表明兴奋性毒性是缺血性脑损伤的最主要发病机理。NMDA受体在介导急性谷氨酸兴奋性毒性中起了关键性作用,NMDA受体的拮抗剂的使用能降低缺血性或低糖脑损伤动物模型中的神经元死亡。许多实验室都证明阻断了NMDA受体能降低短暂或永久性局灶性缺血模型的梗死面积。 本实验室在脑缺血损伤研究中,已建立了整体局灶性脑缺血(大脑中动脉阻塞,MCAO)和全脑缺血(四血管阻断,4VO)模型。在局灶性脑缺血模型中,已经发现半胱氨酰白三烯受体拮抗剂ONO-1078(pranlukast)对脑缺血损伤有保护作用。为了更加深入地研究脑缺血损伤机制,探讨脑缺血损伤中起主要作用的兴奋性氨基酸毒性 一 机制及其治疗药物,本研究进一步建立了脑片和神经元水平的体外脑缺血模型;探讨 了新类型N’MD损伤对抗药物;还对NMD的信号转导特点作了分析。希望通过本 研究,能够阐明体外NMDA损伤特点及发现抗脑缺血新药的途径;并且,为今后药 物干预兴奋性氨基酸信号通路打下必要的基础。 0 l.离体脑片损伤模型(OGD和 NMDA)及原代培养神经元 NMDA损伤 大鼠离体海马脑片缺氧缺糖(OGD)损伤 大鼠离体海马脑片制备后,在通氧混合气的正常脑脊液(nACSF)中恢复 60 min, 然后移入通氮混合气的无糖脑脊液(吵化SF)中缺氧缺糖,取出脑片与2%TTC避光 37’C温浴 60 dll,染色后根据每克湿重加入 20 ml抽提液(乙醇:二甲亚矾一 50:50), 在密闭容器内避光置 24 h,测量前摇匀后取 200 PI至 96孔板,在 490 urn波长,酶 标仪测定各孔OD_值。另一组平行实验测得各组脑片上清和匀浆LDH,计算LDH 释放率。结果发现,随着缺氧缺糖时间的延长脑片hC染色逐渐下降,LDH释放率 也逐渐增高,TTC染色下降百分率和LDH释放百分率呈显著负相关(r。-0.933)。 提示了本实验首次建立的分光光度法检测hC还原产物来评价大鼠海马脑片的缺氧 缺糖性损伤的方法,是一种简便快速、切实可行的方法,可用于评价神经保护药物的 作用。 小鼠皮层-纹状体离体脑片OGD模型及NMDA损伤模型的建立 小鼠皮层.纹状体离体脑片制备后,恢复 60 min,然后进行缺氧缺糖处理或加入 NMDA处理。取出脑片与2%TTC避光37’C温裕60 min,经甲醛固定后,在体视显 微镜下以CCD摄像头摄取并输入计算机保存24位RGB彩色图像。用本实验室开发 的脑缺血图像分析软件计算皮层、纹状体的nC染色面积,并计算染色面积百分率。 二 — — 然后将RGB图像转换为8-位的平均灰度模式,计算皮层、纹状体区的hC染色平均 灰度,并计算平均灰度百分率。结果发现,OGD时间越长,皮层、纹状体TTC染色 的平均灰度和面积越小。NMDA剂量依赖性损伤脑片,导致TTC染色平均灰度明显 下降。提示了用TTC染色方法结合计算机图像分析的评价方法为离体脑片急性损伤 及神经保护药作用的评价提供了另一种简便、客观、定量和可行的评价方法,在脑缺 血或其他脑损伤研究中,有推广应用的价值。 大鼠皮层神经元NMDA损伤模型的建立 原代培养的皮层神经元体外10天(DfV10)时,用神经元特异的烯醇化酶抗体进 行免疫组化鉴定,证明所培养的是神经元。神经元用不同浓度的NMDA,处理不同 时间,观察神经元的损伤情况。我们观察到NMDA对皮层神经元的毒性作用有明显 的剂量依赖关系,随着N’MDA浓度的增加和作用时间的延长,其毒性作用增强。我 们选择了 50 u mol/L NMDA处理 15 nun为损伤模型。 2.药物对OGD和NMDA损伤的保护作用 用大鼠离体海马脑片缺氧缺糖(OGD)模型和分光光度法检测 nC还原产物的评 价方法,我们首先对几种常用的抗脑缺血药物:尼莫地平、地塞米松、氯肢酮作了观 察,发现尼莫地平、氯胺酮和地塞米松都能显著提高缺氧缺糖海马脑片的TTC染色。 但整体动物实验有效的半肮氨酞白三烯受体桔抗剂ONO-1078对脑片OGD损伤无保 护作用。我们还首次发现了经典的抗精神病药氟吸陡醇对大鼠海马脑片缺氧缺糖损伤 的保护作用,同时也发现了氟嗓唆醇对大鼠海马脑片NMDA损伤的保护作用。但多 巴胺不影响正常脑片的活性,及D。多巴胺受体特异的桔抗剂多潘立酮对大鼠海马脑 片缺氧缺糖损伤没有保护作用提示了氟赈唆醇的保护作用与多巴胺D
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:Q42

知网文化
【相似文献】
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈玉;冯丹丹;曹生田;汪沛;黄艳红;汉建忠;刘惠君;罗自强;;NMDA受体启动对胰岛结构和功能的影响[A];传承与发展,创湖南省生理科学事业的新高——湖南省生理科学会2011年度学术年会论文摘要汇编[C];2011年
2 廖素群;刘晓琳;侯国强;李东风;;NMDA对成年斑胸草雀弓状皮质栎核投射神经元增益的调节[A];“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议论文摘要[C];2009年
3 蒋星红;刘宁昂;;NMDA受体和非NMDA受体参与外周炎症诱发的下丘脑弓状核神经元的敏感化[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年
4 王韵;;DREAM负性调控NMDA受体功能发挥细胞保护作用[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年
5 王德生;汤颖;苏志强;;亚低温对NMDA损伤后大鼠海马神经元存活率和死亡率的影响[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
6 邱爽;张筱敏;曹静远;杨巍;严颖刚;单凌;郑颉;罗建红;;NMDA受体NR2亚单位ER质控机制研究[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
7 金燕;金元哲;;前庭损伤急性期低血压兴奋VN的NMDA受体机制初探[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年
8 黄晏;周文霞;张永祥;;β-淀粉样蛋白致LTP损伤与NMDA受体亚型之间的关系[A];中国药理学会第十一次全国学术会议专刊[C];2011年
9 黄晏;周文霞;武艳;张永祥;;NMDA受体NR2A/B亚型在Aβ致LTP损伤中的作用[A];2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第三届山东省神经内科医师(学术)论坛论文汇编[C];2011年
10 许梓荣;冯杰;;纳米型NMDA对肥育猪生长和胴体组成的影响及NMDA调控生长机理研究[A];动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 柯季;基因技术:未来让人更聪明[N];经济参考报;2002年
2 黄斌;利用基因技术培育聪明宝贝[N];大众科技报;2000年
3 本报记者 游婕 董艳春;如何对癌症疼痛说不[N];中国消费者报;2005年
4 中原;垃圾基因不容小觑[N];医药经济报;2002年
5 罗玲;帕金森病的神经保护治疗研究[N];中国医药报;2004年
6 通讯员 万姗姗 记者 王春;我科学家一新发现有望使人忘记痛苦[N];科技日报;2008年
7 田耕;修改基因能否“尽得风流”[N];大众科技报;2002年
8 本报记者 袁志勇;好记忆靠天赋还是靠科技[N];科技日报;2009年
9 麦迪信;多巴胺D1受体与NMDA受体存在交互作用[N];医药经济报;2002年
10 玫雅;吃脑真能补脑?[N];医药经济报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 严乐勤;神经元NMDA损伤:脑片及神经元模型、药物保护作用及信号转导特点[D];浙江大学;2002年
2 朱佳;锌慢性处理特异性下调培养海马神经元表面含有NR2A亚基NMDA受体表达[D];浙江大学;2012年
3 张丽男;钠钾泵参与5-羟色胺对大鼠海马CA1区NMDA电流的调节[D];河北医科大学;2010年
4 张琰敏;1、促肾上腺皮质激素释放激素对海马突触发育的调节作用 2、糖皮质激素作用于G蛋白耦联相关受体对海马神经元NMDA受体的快速作用[D];第二军医大学;2012年
5 杨茜;突触外N-甲基-D-天冬氨酸受体在成年小鼠海马CA1区神经元长时程增强中的作用[D];上海交通大学;2011年
6 曹静远;NMDA受体亚单位装配关键结构域的研究[D];浙江大学;2011年
7 冯杰;纳米型NMDA对肥育猪生长和胴体组成的影响及NMDA调控生长机理研究[D];浙江大学;2004年
8 徐斌;锰干扰谷氨酸代谢和NMDA受体表达及MK-801对其防护作用的研究[D];中国医科大学;2010年
9 李翠;NMDA受体调节少突胶质前体细胞分化以及铜腙模型中的髄鞘再生过程[D];浙江大学;2012年
10 元元;糖原合成酶激酶-3β和NMDA受体亚单位运输在切口痛—瑞芬太尼痛觉过敏大鼠脊髓中的变化及调节[D];天津医科大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 姚雯;中枢神经系统海马神经元NMDA受体功能调控的分子机制研究[D];南京医科大学;2011年
2 琚珏刚;突触外NMDA受体介导的癫痫发生机制的电生理学研究[D];上海交通大学;2010年
3 徐卓;活动依赖的功能性NMDA受体组成变化在调节突触可塑性中的作用[D];南京医科大学;2009年
4 刘英涛;一种NMDA受体显像剂—~(99)Tc~m-N-ethyl-N_2S_2-Memantine的研究[D];江南大学;2010年
5 罗清清;雌激素和双酚A快速影响发育中大鼠海马NMDA受体活性及其机制[D];浙江师范大学;2010年
6 高萌;水杨酸钠对大鼠耳蜗螺旋神经节神经元NMDA受体的易化作用[D];广西医科大学;2010年
7 李文雅;5-羟色胺对大鼠海马CA1区NMDA电流的调节作用[D];河北医科大学;2012年
8 张宁;组蛋白乙酰化在NMDA受体依赖的情景恐惧记忆中的作用研究[D];华东师范大学;2011年
9 董素平;海马NMDA受体参与慢性应激经SP-NK1受体通路诱发抑郁样行为[D];陕西师范大学;2011年
10 陈玉;NMDA受体长时间激活对胰岛β细胞功能的影响[D];中南大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026