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《浙江大学》 2002年
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嗜水气单胞菌外膜提取物及胞外产物特性的分析

沈锦玉  
【摘要】: 对六株嗜水气单胞菌(二株分离自中国鲤科鱼类、二株分离自中国的中华绒螯蟹、一株来自孟加拉国的鱼类、一株来自英国国家工业与海洋菌种收集中心(NCBIM)虹鳟鱼的标准菌株)的全细胞、外膜提取物和胞外产物(ECP)在不同的培养条件下进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫转印(Western blotting)分析。所用培养基共五种,分别为:(1)胰胨大豆胨肉汤(TSB);(2)缺铁TSB;(3)补铁TSB;(4)加鱼血清TSB;(5)英国水产疫苗公司提供的AVL培养基。 结果发现: 全细胞蛋白质电泳图谱:6株菌株在同一培养条件下全细胞的蛋白质电泳图谱是不一样的,同一菌株在五种不同的培养条件下,其蛋白质电泳图谱相似但不完全一致。 盐酸胍细菌外膜提取物的图谱特征:6株菌株在同一培养条件下的盐酸胍细菌外膜提取物的蛋白质电泳图谱是不一样的,同一菌株在五种不同的培养条件下,其蛋白质电泳图谱相似但不完全一样。但所有的图谱具有相同分子量的条带,分别为34kDa和30kDa。用Schiff's试剂,银染及凝集素标记(BS-1,ConA,UEA-1)法测定及分析提取物中碳水化合物的特征,发现凝集素标记及经蛋白酶k处理后的所有菌株的提取物均含有不同分子量碳水化合物的条带,但具有相同分子量的条带,其中32kDa条带被三种凝集素及银染所显示,而34kDa条带仅被BS-1和UEA-1所识别。而经Schiff's试剂染色后,仅出现少量的条带。 胞外产物(ECP)的特性分析:ECP的蛋白质电泳图谱显示,所有菌株具有不同的蛋白质图谱,但具有35kDa相同分子量的条带,而相同的菌株在 0 不同的培养条什下具相似的图谱。不同的菌株在不同的培养条件下上清 液中蛋白质含量是不一样的,每毫升上清液中蛋白质含量为l听mg。用 底物惭叼匕泳沦测定了**P的蛋白酶活性,所川的底物为u胶 酪蛋白。 商品的牛血红蛋白及新鲜的鱼血红蛋白。所有菌株的**P在明胶和酪蛋 臼底物电泳凝胶上具有清晰的条带,而在血红蛋白凝胶上仅出现少量条 卅。经银染测定及分析**P中碳水化合物的特征,发现经蛋白酶k处理 后所有菌株的ECP均有不同分子量碳水化合物的条带,但具有相同分子 量 3 5 kDa条带。经 Schiff’s试剂染色,在 ECP凝胶上没有显示任何条带。 细菌外膜提取物与胞外产物的免疫原性:用免疫转印法(Western blotting) 测定菌体外膜提取物和 ECP的抗原性。结果显示,提取物有多条不同的 条份被两#11。咖.清所识别,且用活菌制备的血清比死菌的要强得多。所有 菌株在不同培养条件下的外膜提取物均具 3 5 kDa条带被鱼血清所识别。 所有菌株在不同培养条件-厂的 ECP也均具 3 5 ica条带被鱼血清所识别, 卅测 3 5 kDa条俗是l嗜水气单胞菌的共同抗原。经蛋白酶 k处理的 ECP, 35k*。条带消矢,说明这条带是山蛋白质组成的。同时,用**A tL进 行了菌株与鱼血清间的交叉反应。罗非鱼注射活菌T4二周及四周后,鱼 体内抗休的效价及鱼血清与其它5株菌的交叉反应。活菌注射鱼体内二 周及四周时,迄血清。。I。抗活菌*4抗体的效价分别为1:引2,1:8192,而四 周时,抗火活菌的抗体效价为1:1024,负血清与其它5株活菌的交叉反 J。V山很w烈多J)’L仲的 淌以丫!H从 l:slZ到 1:10240
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S917.1

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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9 孔繁德;王荣;陈琼;吴德峰;徐淑菲;;多重RT-PCR一步法技术同时检测猪瘟病毒和蓝耳病病毒方法的建立以及初步应用[A];第十届中国科协年会论文集(三)[C];2008年
10 沈锦玉;尹文林;潘晓艺;郝贵杰;徐洋;何天雷;王友慧;叶金云;;鳖用四价细菌灭活疫苗免疫防治应用研究[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
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7 羊云飞;牦牛、牧民源大肠杆菌分离鉴定、耐药基因检测、PFGE分析及耐药性传递的研究[D];四川农业大学;2011年
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10 张春辉;致病性大肠埃希菌ESBLs的基因检测与耐药性控制[D];西北农林科技大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 罗晶晶;斑点叉尾鮰生鱼片加工过程中的微生物变化[D];华中农业大学;2010年
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4 刘新军;表达布氏杆菌sodc基因的重组沙门氏菌的构建及不同种布氏杆菌鉴别PCR检测方法的建立[D];华中农业大学;2010年
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6 严琦;副猪嗜血杆菌与巨噬细胞相互作用的初步研究[D];华中农业大学;2010年
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【同被引文献】
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1 付乔芳;嗜水气单胞菌毒力特性研究[D];上海海洋大学;2011年
【二级参考文献】
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【相似文献】
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2 周碧君,李永明,温贵兰,胡远洲;斑点叉尾致病性嗜水气单胞菌的分离[J];水产科学;2004年12期
3 陈怀青,陆承平;嗜水气单胞菌表层蛋白及外膜蛋白的初步分析[J];南京农业大学学报;1993年02期
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9 李伟杰;赵耘;刘燕;岂晓鑫;康凯;陈敏;;狐狸源致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及其耐药性分析[A];第三届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会会议论文摘要集[C];2011年
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9 章信;三维透明膜包装机——纸盒外膜包装的理想设备[N];中国包装报;2006年
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