收藏本站
《浙江大学》 2002年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

溶菌酶和重组人干扰素-γ包涵体体外折叠复性的研究

高永贵  
【摘要】: 迄今为止,人们对确信存在的第二遗传密码——蛋白质折叠密码还知之甚少。如何对包涵体蛋白进行高浓度、高收率的复性以获得活性产品是人们经常面临的一个难题,现已成为生物工程产业化的瓶颈之一。为此,本文对模型蛋白溶菌酶和基因工程药物人干扰素—γ包涵体蛋白的体外折叠复性进行了研究,以期促进这一问题的早日解决。 首先以溶菌酶为模型蛋白,通过研究还原剂二硫苏糖醇(DTT)对其变复性过程中自由巯基和复性的影响,结果发现若蛋白质浓度不超过40 mg/mL,变性液中DTT最适浓度为30mM,这样直接稀释复性时无需脱除DTT,简化了后续的复性过程。溶菌酶的变性程度对复性效果有重要影响,因此研究了溶菌酶合适的变性条件,达到了提高复性收率的目的。 稀释复性法是研究其他方法的基础。通过对高浓度溶菌酶的直接稀释复性法的研究,发现最适GSH浓度为3~6mM,GSH:GSSG则为2~5,此外还需添加3~4M脲。同时在此范围内,合适脲浓度随蛋白质浓度增加略有增大。与一步稀释复性法相比,分步流加变性溶菌酶的复性操作不仅能够获得较高的复性终浓度,而且复性收率提高10%~15%,且降低了脲浓度。然后着重探讨了体积排阻层析复性溶菌酶的条件,包括柱高、GSSG与GSG的量及比例、脲浓度、流速、上样量(上样方式和上样体积)以及蛋白质浓度。首次探讨了体积排阻层析复性方法的连续上样操作,并与单次上样操作进行比较,结果两者的活性收率没有差异,但连续操作提高功效约25%,而且节约了复性缓冲液。 在提出变性蛋白质体外复性过程的动力学模型和模型方程求解的基础上,采用C~(++)程序对模型方程与溶菌酶稀释复性的实验数据进行了拟合,拟合系数R基本上在0.98~0.99之间,表明动力学模型能够很好地描述溶菌酶的体外复性过程。复性液中添加脲后使得速率常数K_2和K_3值减小,复性时间延长,但却增加了K_2/K_3,说明脲对聚集反应具有更强的作用,这正是适量脲促进溶菌酶复性的机理。根据拟合出的脲浓度与速率常数K_2和K_3的数学表达式,并结合模型方程,首次探讨了如何从理论上对折叠复性的收率进行预测以及对复性条件进行优化,特别是根据蛋白质浓度而选取最适脲浓度,从而可为复性方法和工业复性过程的设计提供重要的理论指导。 采用单因素和正交试验相结合的方法,对重组人IFN-γ包涵体的洗涤纯化进行了研究,最终使IFN-γ包涵体纯度达到80%以上,目标蛋白仅损失约15%。 浙江大学博士学位论文 摘要 然后考察了体积排阻层析技术复性IFN-Y包涵体,结果表明该技术不仅具有促 进变性 IFN-Y包涵体的体外再折叠,而且对目标蛋白具有纯化作用。在实验室 建立IFN-Y活性测定的基础上,对体积排阻层析复性IFN-Y包涵体的方法进行 了研究,并获得了比活为 6.09 gi 06 IU/mg,浓度为 0.24 mg/mL的 IFN-v样品, 方法的收率为82.1%。最后提出从基因工程菌pBV220IFN1DH5a生产活性IFN1 的工艺。 在实验室制备新型小分于伴侣Mini-GroEL的基础上,研究了游离小分子伴 侣协助正N-Y包涵体的再折叠。根据小分子伴侣具有 Histidine tag的特点,首次 设计了Ni-NTA亲和固定化小分于伴侣柱复性正N-Y包涵体的实验装置。研究结 果表明,该装置不仅可以避免变性剂对小分子伴侣及固定化结合损害,而且连续 重复使用4次,再折叠IFN-Y的活性大小没有明显变化。使用该装置复性丁N- Y包涵体,一次进样0.98mg变性IFN-Y包涵体,经过固定化小分子伴侣柱后可 得到活性达 6.4X 10勺U/mg、浓度为 0.14mg/mL的 IFN-Y样品,操作非常方便。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:Q55;Q51

手机知网App
【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 靳挺;基因工程药物人干扰素-γ体外重折叠复性研究[D];浙江大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前9条
1 张佳艺;小分子伴侣的制备及其协助基因工程蛋白体外重折叠的初步研究[D];浙江大学;2003年
2 谭培生;核糖核酸酶A的体外重折叠过程研究[D];浙江大学;2006年
3 顾玮彦;重组大肠杆菌生产肠激酶的研究[D];浙江大学;2006年
4 梁长利;蛋清溶菌酶稀释复性过程中集聚体和中间态的研究[D];西北大学;2006年
5 余路;折叠酶DsbA的制备及协助蛋白质体外复性的研究[D];浙江大学;2007年
6 师江波;猪胰腺α-淀粉酶变性—复性过程及其部分折叠中间体的研究[D];西北大学;2007年
7 滕婷婷;人IgE受体蛋白FcεRIα-D2的原核表达及其对IgE的选择吸附能力研究[D];大连理工大学;2012年
8 郭平川;重组人胰激肽原酶发酵及复性研究[D];北京化工大学;2012年
9 代彩霞;人溶菌酶蛋白的原核表达、纯化及生物活性检测[D];暨南大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘晓光,董晓燕,周露芳;分子伴侣与蛋白质复性的简介[J];化学工业与工程;2000年02期
2 徐明波,孟文华,马贤凯;PDI,PPI和伴侣分子催化重组人IL-2和GM-CSF的再折叠[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1994年07期
3 王子轩,杨迪,王启松,李伯良,吕兆海,虞建良,郑宏大,范佩芳,唐建伟,钱民章,郭海鸿,姚曼华,郑仲承,刘新垣;合成的人γ-干扰素cDNA在大肠杆菌的高效表达[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1994年10期
4 邹承鲁;第二遗传密码[J];科学通报;2000年16期
5 向近敏,林雨霖,赵利淦;关于干扰素的分子生态学[J];免疫学杂志;1993年02期
6 龙建银,王会信;外源基因在大肠杆菌中表达的研究进展[J];生物化学与生物物理进展;1997年02期
7 周筠梅;蛋白质的错误折叠与疾病[J];生物化学与生物物理进展;2000年06期
8 冯小黎;重组包涵体蛋白质的折叠复性[J];生物化学与生物物理进展;2001年04期
9 瞿成奎,魏汉东,鱼咏涛,贺福初,吴祖泽;中国人γ-干扰素cDNA在大肠杆菌中的高效表达[J];生物化学与生物物理进展;1995年05期
10 史晋辉,董晓燕,孙彦;盐酸胍浓度对变性溶菌酶复性的影响[J];生物化学与生物物理学报;2001年04期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 关怡新;姚善泾;;重组蛋白的体外复性技术研究进展[A];浙江省化工学会成立五十周年庆祝大会暨第二届省(市)际化学化工科技发展研讨会论文集[C];2001年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 夏行权;人γ-干扰素研究进展[J];安徽电子信息职业技术学院学报;2005年05期
2 李维静;;酶的食品保健作用综述[J];安徽农学通报;2007年10期
3 王福慧;郭荣启;伊莉佳;郭琳;聂利珍;王瑞刚;;枯草芽孢杆菌纤溶酶植物根系分泌表达生物反应器模型的建立[J];安徽农业科学;2008年13期
4 常凯;马亮;;溶菌酶提取工艺及其在山核桃乳中的应用研究[J];安徽农业科学;2009年30期
5 张潭;边六交;王世祥;郑晓晖;;荧光相图法研究变性蛋白溶菌酶在脲和盐酸胍溶液中的复性过程[J];安徽农业科学;2010年19期
6 李春梅;刘新光;林小聪;陈小文;梁念慈;;米托蒽醌对人蛋白激酶CK2活性的影响[J];癌症;2008年08期
7 李平,张强,宛晓春,陶文沂,丁霄霖;黑曲霉原生质体形成与再生影响因子的研究[J];安徽农业大学学报;2003年03期
8 张成海,李武平,衣作安,王刚,吕宏亮,段招军,侯云德;人干扰素ω(huIFN-ω)的高效表达、纯化及生物学活性[J];病毒学报;2004年02期
9 贾守菊,张永普,陈艳乐,金爱红,郑雪娇,江为鹏;中国石龙子的同工酶[J];动物学杂志;2002年05期
10 赵建华;赵占西;尹小三;;铝合金复合阳极氧化表面处理工艺[J];表面技术;2008年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张明江;郭伟;孙敏杰;;添加溶菌酶的婴幼儿配方奶粉的研究[A];中国奶业协会年会论文集2009(下册)[C];2009年
2 刘浩强;乌春华;;鸡蛋溶菌酶在婴幼儿配方奶粉中的应用[A];中国奶业协会年会论文集2009(下册)[C];2009年
3 郝继军;张佐光;孙志杰;李敏;顾轶卓;;X-Cor泡沫夹层结构侧压性能实验研究[A];第十五届全国复合材料学术会议论文集(上册)[C];2008年
4 杨咏来;宁桂玲;林源;吕秉玲;;加压干燥法制备Al_2O_3纳米粉的工艺研究[A];第三届中国功能材料及其应用学术会议论文集[C];1998年
5 杨俐锋;刘艳;胡利明;赵玉芬;;细胞色素C与ATP的弱相互作用研究[A];第六届全国磷化学化工学术讨论会论文摘要集[C];2003年
6 董仁威;程婧波;;科普作品的分类研究[A];中国科普理论与实践探索——2008《全民科学素质行动计划纲要》论坛暨第十五届全国科普理论研讨会文集[C];2008年
7 李俊玲;王世立;韩金祥;王国栋;孙杰;;重组人成骨蛋白-1(rhOP-1)的复性[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
8 周鹏;商志才;;一种新的核序列自相关函数用于非同源蛋白质结构类预测[A];第十届全国计算(机)化学学术会议论文摘要集[C];2009年
9 张云峰;郭祀远;;生物物理学与遗传疾病[A];中国科协2005年学术年会生物物理与重大疾病分会论文摘要集[C];2005年
10 张建峰;张皎;姚静;侯加法;;鸡类胰岛素生长因子Ⅰ的克隆、表达及其表达产物的生物学活性研究[A];中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集(下册)[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张小东;崇明前卫村微污染水体的生态修复与基质研究[D];东华大学;2010年
2 韦华南;水力充填负压强制脱水研究[D];中南大学;2010年
3 王博;具有手性选择性酯酶/脂肪酶的筛选、催化特点及应用研究[D];浙江大学;2011年
4 王宇;基于不确定性的优化方法及其在飞机设计中的应用[D];南京航空航天大学;2010年
5 安哲;基于高分散水滑石和手性螺旋氧化硅材料的纳米—生物界面构筑与调控[D];北京化工大学;2011年
6 郝大力;路面性能的评价与分析研究[D];长安大学;2000年
7 沈隽;云杉属木材构造特征与振动特性参数关系的研究[D];东北林业大学;2001年
8 李许卿;双链DNA片断的碱基空间模式BSP[D];中国科学院云南天文台;2001年
9 潘韵;重组人肝再生增强因子(rhALR)的表达、纯化及生物活性研究[D];浙江大学;2003年
10 董晓丽;胶质红假单胞菌对活性艳蓝KN-R的脱色研究[D];大连理工大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王树云;斑点叉尾鮰病毒ORF6和ORF10基因的原核表达及其功能的初步研究[D];华中农业大学;2010年
2 孟庆娜;H5亚型禽流感病毒抗体快速检测试纸条的研制[D];华中农业大学;2010年
3 谷桂娜;介孔分子筛的合成及其孔道中脂肪酶固定化的研究[D];辽宁师范大学;2010年
4 梁晓艳;人脂联素基因的原核表达纯化、抗体制备及应用[D];郑州大学;2010年
5 岳晖;DsbC对植酸酶体外折叠及功能影响的研究[D];山东农业大学;2010年
6 刘操;猪附红细胞体对仔猪非特异性免疫功能的影响及免疫调节剂的筛选[D];山东农业大学;2010年
7 王华芳;小麦新鲜度判别技术的研究[D];河南工业大学;2010年
8 彭福中;链霉亲和素的原核表达及复性[D];江西师范大学;2010年
9 杨杰;TRAIL与LDM联用和作用机制及TRAIL蛋白的表达[D];北京协和医学院;2010年
10 查娟;基于磁滞优化和极值优化算法的蛋白质折叠问题研究[D];浙江大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 唐兵;蛋白质的折叠[J];氨基酸和生物资源;1997年03期
2 陈文实;李仁柱;;通窍活血汤联合胰激肽原酶治疗急性脑梗死疗效观察[J];蚌埠医学院学报;2008年04期
3 张德震,吴淑华,侯云德,苏成芝;重组人γ干扰素的纯化[J];病毒学报;1989年01期
4 袁新清,陈劲春;人胰激肽原酶在毕赤酵母中的分泌表达[J];北京化工大学学报(自然科学版);2004年06期
5 陈晶晶;陈劲春;;巴斯德毕赤酵母发酵生产重组人溶菌酶[J];北京化工大学学报(自然科学版);2006年06期
6 杨芳,袁长吉,李舜华;基因重组γ-干扰素与化疗合用治疗慢性粒细胞白血病的临床观察[J];白求恩医科大学学报;1999年05期
7 刘红岩,马雁冰,李智华,姬秋彦,李健峰,周丽,郭仁,戴长柏;人白细胞介素-6基因的克隆表达和纯化的研究[J];白求恩医科大学学报;1999年01期
8 沈星灿,梁宏,何锡文,王新省;圆二色光谱分析蛋白质构象的方法及研究进展[J];分析化学;2004年03期
9 彭武建,戴勇,李体远,杜珙,孙文学,陈德珩,徐卓佳;人组织激肽释放酶基因真核表达载体的构建与鉴定[J];广东医学;2003年12期
10 郑平华,陆峰,郭嘉,陆德如;伴同蛋白GroE的纯化及对蛋白质复性的作用[J];高技术通讯;1995年08期
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 童望宇;人表皮生长因子工艺的应用基础研究[D];浙江大学;2001年
2 崔志芳;温敏型聚N-异丙基丙烯酰胺凝胶协助蛋白质体外复性的基础研究[D];浙江大学;2004年
3 靳挺;基因工程药物人干扰素-γ体外重折叠复性研究[D];浙江大学;2004年
4 石峰;微生物制备γ-聚谷氨酸的研究[D];浙江大学;2006年
5 王芳薇;疏水作用层析及其渗透质辅助包涵体蛋白质复性的研究[D];大连理工大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 林雪;蛋白A的重组表达及重组菌的发酵过程优化[D];大连理工大学;2010年
2 邳志前;抗体类吸附剂的合成过程优化及性能评价[D];大连理工大学;2011年
3 侯率;重组蛋白A的分离纯化工艺研究[D];大连理工大学;2011年
4 李旋;高产蛋白酶米曲霉的诱变选育及培养条件优化[D];山东轻工业学院;2011年
5 曹涛;变溶菌素发酵生产及在口腔制品中的应用[D];山东轻工业学院;2011年
6 韩斌;溶菌酶-绿色荧光蛋白(Lyz-GFP)双元基因对苜蓿转化的研究[D];甘肃农业大学;2010年
7 钱丽红;几种天然保鲜剂的抑菌机理[D];上海海洋大学;2010年
8 侯乐锋;大肠杆菌表达重组人胰激肽原酶[D];北京化工大学;2011年
9 陈实;重组抗原pGEX-BSjGCP-BSj23诊断家畜日本血吸虫病研究[D];南京农业大学;2010年
10 张佳艺;小分子伴侣的制备及其协助基因工程蛋白体外重折叠的初步研究[D];浙江大学;2003年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 逄春华;董海霞;包艳玲;;生物制药产业的发展及药品生物的测定[J];黑龙江医药;2011年05期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 靳挺;基因工程药物人干扰素-γ体外重折叠复性研究[D];浙江大学;2004年
2 王文龙;Hypodermins A,B,C基因cDNA在大肠杆菌中的表达及牛皮蝇蛆病ELISA诊断方法的建立[D];内蒙古农业大学;2007年
3 赵喜红;HIV结构蛋白重组表达复性及检测方法的研究[D];华南理工大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 岳晖;DsbC对植酸酶体外折叠及功能影响的研究[D];山东农业大学;2010年
2 韩广杰;氧化还原体系对RNaseA包含体复性的影响[D];天津大学;2010年
3 谭培生;核糖核酸酶A的体外重折叠过程研究[D];浙江大学;2006年
4 李巍;虚拟细胞中化学反应定量计算的方法与算法的研究[D];哈尔滨工业大学;2006年
5 陈忠广;犬干扰素-γ的复性及活性测定[D];东北农业大学;2007年
6 梅春升;猪γ干扰素的克隆表达及其联合中药抗PRRSV的研究[D];华中农业大学;2007年
7 赵伟芬;一株拮抗细菌的分离鉴定及其抑菌物质的初步研究[D];西北大学;2008年
8 陈莹莹;线性聚N-异丙基丙烯酰胺协助蛋白质体外复性研究[D];浙江大学;2008年
9 雷祖猛;变性核糖核酸酶在疏水表面置换吸附焓的微量热研究[D];西安工程大学;2008年
10 代彩霞;人溶菌酶蛋白的原核表达、纯化及生物活性检测[D];暨南大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张智清,侯云德,李玉英,赵小侠,周园,段淑敏,姚立红;应用P_RP_L串联启动子和CIts857调控基因高效表达人γ干扰素[J];病毒学报;1988年02期
2 张德震,吴淑华,侯云德,苏成芝;重组人γ干扰素的纯化[J];病毒学报;1989年01期
3 张智清,姚立红,侯云德;含P_RP_L启动子的原核高效表达载体的组建及其应用[J];病毒学报;1990年02期
4 潘宜人,曹之舫,王正旺;重组人干扰素γ治疗亚急性重症肝炎的疗效[J];第二军医大学学报;1995年04期
5 冯起庆,曹之舫,刘玉吉,郭小安;CO_2激光单独或联合rhIFN-γ治疗尖锐湿疣72例报告[J];第二军医大学学报;1998年01期
6 郑平华,陆峰,郭嘉,陆德如;伴同蛋白GroE的纯化及对蛋白质复性的作用[J];高技术通讯;1995年08期
7 蔡卫民,陈智,陈峰,翁红雷,刘荣华;γ-干扰素抗肝纤维化临床疗效的初步观察[J];临床肝胆病杂志;1998年01期
8 杜平;细胞素网络功能的研究进展[J];免疫学杂志;1990年04期
9 何锡尧,邓长明;重组γ-干扰素防止尖锐湿疣冷冻术后复发的疗效观察[J];川北医学院学报;1997年04期
10 郑士民;;牛奶中的天然酶类[J];中国乳品工业;1986年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 董晓燕,史晋辉,孙彦;β-环糊精促进变性-还原溶菌酶复性[J];化工学报;2002年04期
2 童卫;黄亚渝;王一苇;郭立安;;溶菌霉等10种标准蛋白质在高效离子交换色谱上的复性研究[J];第三军医大学学报;2006年09期
3 裴朝玉;刘照胜;苗会娟;方国波;吕宪禹;;还原变性的溶菌酶的体积排阻色谱复性[J];信阳师范学院学报(自然科学版);2009年01期
4 董晓燕,王颖,孙彦;人工伴侣促进溶菌酶复性动力学[J];高校化学工程学报;2002年03期
5 黄亚渝,童卫,郭立安;RNase等10种标准蛋白质在高效疏水作用色谱上的复性[J];第四军医大学学报;2005年08期
6 王增;马会勤;张文;陈尚武;;包涵体蛋白的分离和色谱法体外复性纯化研究进展[J];中国生物工程杂志;2009年07期
7 罗惠霞;李敏;王玉炯;田楠;;rPA(K)原核表达产物的复性与纯化[J];河北师范大学学报(自然科学版);2009年01期
8 朱迎春,王琰,高荣凯,刘群英,化冰,陈宇萍;大肠杆菌表达的单链抗体柱复性的研究[J];海军总医院学报;1998年03期
9 纪剑飞,张成刚;包涵体重组蛋白的纯化及复性[J];沈阳药科大学学报;1998年04期
10 高立勋;我校—高新技术成果问世 变性蛋白复性及同时纯化装置研制成功[J];西北大学学报(自然科学版);1999年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 谷振宇;苏志国;周海梦;;溶菌酶在凝胶过滤复性中的行为特点[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年
2 崔志芳;关怡新;姚善泾;;温敏性凝胶的制备及其在溶菌酶复性中的应用[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年
3 陈净;刘永东;苏志国;;聚乙二醇-多孔聚(甲基丙烯酸环氧丙酯-二乙烯基苯)微球作为蛋白质复性介质的应用[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2006年
4 周兵瑞;杜芬;周拯;莫重瑛;陈杰;梁毅;;混合拥挤试剂对溶菌酶复性的影响[A];湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编[C];2004年
5 王玮;白姝;董晓燕;孙彦;;醇类对溶菌酶结构和折叠过程的影响[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年
6 卢雁;李向荣;;溶菌酶在盐酸胍和尿素体系中变性的微量量热和荧光光谱研究[A];中国化学会第十三届全国化学热力学和热分析学术会议论文摘要集[C];2006年
7 任国平;蔺宗;王志珍;;大分子拥挤对3-磷酸甘油醛脱氢酶变性和复性的影响[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年
8 杨芳;项瑾;杜芬;梁毅;;pH诱导溶菌酶及其同源蛋白去折叠研究[A];湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编[C];2004年
9 郭锡久;阮兴朝;苏德永;赵碧华;江世芬;;复发性口疮与血清微量元素及溶菌酶含量关系探讨的实验研究[A];FDI、CSA临床口腔进展学术会议论文汇编[C];1999年
10 谢韵;周健;;溶菌酶在带电表面的吸附取向的计算机模拟[A];中国化学会第十二届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 骆海涛;两市缩量暴跌 报复性反弹一触即发?[N];南方日报;2007年
2 上海新兰德;报复性反击欲掀60日线压力[N];东方早报;2007年
3 航空证券 陈少丹;修复性反弹后凸显个股机会[N];中国证券报;2008年
4 见习记者 潘圣韬;大盘有望持续反弹[N];上海证券报;2008年
5 本版编辑大摩投资 银华投资 世基投资 肖玉航 北京首证 陈林展 益邦投资;报复性反弹有望延续[N];东方早报;2008年
6 韩晗;多数机构认为节前有望修复性反弹[N];中国证券报;2008年
7 记者花善岱;上海展览业报复性反弹 [N];中华工商时报;2003年
8 记者 吴光振实习生 陈颖佳;两市报复性反弹[N];长江日报;2007年
9 桐铭;豆油 出现报复性上涨[N];期货日报;2006年
10 陈晓阳;大盘修复性筑底反弹悄然来临[N];上海证券报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 高永贵;溶菌酶和重组人干扰素-γ包涵体体外折叠复性的研究[D];浙江大学;2002年
2 靳挺;基因工程药物人干扰素-γ体外重折叠复性研究[D];浙江大学;2004年
3 崔志芳;温敏型聚N-异丙基丙烯酰胺凝胶协助蛋白质体外复性的基础研究[D];浙江大学;2004年
4 王彦;液-固界面的吸附及溶菌酶在液相色谱中复性的应用研究[D];西北大学;2002年
5 董晓燕;辅助因子促进蛋白质复性的研究[D];天津大学;2005年
6 刘建华;渗透剂对蛋白质稳定性和折叠复性的影响[D];天津大学;2007年
7 王君;表面活性剂辅助蛋白质复性过程机理研究[D];清华大学;2004年
8 樊建勇;人源性抗角蛋白抗体的高效表达及其作用研究[D];第四军医大学;2004年
9 申烨华;重组人γ-干扰素生产工艺优化及α-糜蛋白酶复性研究[D];西北大学;2001年
10 胡志明;血管内皮细胞生长因子的制备及其治疗股骨头坏死的实验研究[D];第一军医大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 贾长虹;人工伴侣与小分子添加剂协同辅助变性溶菌酶复性的研究[D];天津大学;2007年
2 刘红妮;弱阳离子交换色谱固定相对还原变性溶菌酶的折叠贡献[D];西北大学;2004年
3 李进;胆固醇配基色谱在蛋白质复性中的应用[D];天津大学;2007年
4 史广泉;添加剂与流加操作辅助变性溶菌酶复性动力学[D];天津大学;2004年
5 程晓玲;人工分子伴侣体系辅助溶菌酶复性的研究[D];浙江大学;2005年
6 吴晓月;色素亲和反胶团辅助溶菌酶复性的研究[D];天津大学;2006年
7 柯从玉;简易型变性蛋白复性并同时纯化色谱柱的研制及应用[D];西北大学;2004年
8 侯丽萍;《老子》“大美”思想及王弼的阐释—兼及对魏晋南北朝文艺思想影响[D];首都师范大学;2004年
9 吴丹;试论李翱《复性书》的心性思想[D];苏州大学;2004年
10 司马健;(一)hsTRAIL基因的克隆表达、载体选择及蛋白复性研究 (二)谷胱甘肽S-转移酶(GSTp)半胱氨酸的定点突变及其在293细胞中的功能研究[D];南京师范大学;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026