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《浙江大学》 2003年
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杀虫剂对鱼体乙酰胆碱酯酶免疫含量(AChE-IR)的影响及其生态毒理学意义

谢显传  
【摘要】: 本文建立了间接非竞争法ELSA,能够定量测定麦穗鱼(Pseudorasbora parva)脑乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AChE, EC3.1,1.7)的含量;研究了鱼的体重、环境水温与AChE活性(A)、AChE免疫含量(AChE-IR)以及A/AChE-IR的关系,初步探讨这2个因素引起AChE活性变化的作用机制;研究了在不同浓度的三唑磷和氰戊菊酯处理后,麦穗鱼AChE活性(A)、AChE-IR、A/AChE-IR的变化;初步探讨了锐劲特影响AChE活性恢复的机制。主要研究结果如下: 麦穗鱼脑AChE粗酶液先后经过PEG2000双水相萃取、DEAE-SephadexA-50和Sephadex G-200柱层析后,AChE在HPLC图谱显示只有单一吸收峰,比活性提高了533倍。 建立的间接非竞争ELISA法在不同蛋白浓度的批内、批间和整体的变异系数均小于10%,灵敏度为0.004μg/mL,回收率在90~105%之间。可见测定麦穗鱼脑AChE的间接非竞争ELISA法能达到质量控制要求。 当水温在10.5℃~30℃时,随着试验水温的升高,麦穗鱼脑AChE活性递增;与AChE活性类似,随着水温的升高,麦穗鱼脑AChE-IR递增;当水温在10.5℃~30℃时,麦穗鱼脑A/AChE-IR并无显著差异(P>0.05)。 体重为1.0~1.5g的麦穗鱼的脑AChE活性和AChE-IR都要显著小于3.0~3.5g、5.0~5.5g、7.0~7.5g的麦穗鱼(P<0.05),而后者之间无显著差异(P>0.05);以上所有麦穗鱼的A/AChE-IR之间都无显著差异(P>0.05)。 麦穗鱼经低浓度(0.1μg/L和0.4μ/L)的三唑磷处理后,鱼脑AChE活性出现高于对照的现象,即低浓度三唑磷对麦穗鱼脑AChE活性有诱导作用;三唑磷浓度为3.0~48.0μg/L时,麦穗鱼脑AChE活性明显被抑制,最高达90%以上;麦穗鱼经过不管是高浓度的还是低浓度的三唑磷处理后,它的脑AChE-IR在240h内总会出现显著高于对照的现象,说明三唑磷能刺激麦穗鱼脑AChE合成。A/AChE-IR表示的是AChE的催化效率。实验结果表明,即使三唑磷在很低浓度(0.1μg/L和0.4μg/L)下,麦穗鱼脑A/AChE-IR AChE的催化效率就会降低。 在较低浓度下,氰戊菊酯对麦穗鱼脑AChE活性及其AChE-IR有一定诱导作用,但它并没有影响A/AChE-IR,说明氰戊菊酯只是对AChE的合成有一定刺激 作用,对酶的催化效率没有影响,因为AChE并非氰戊菊酯的靶标酶;而当氰戊 菊酯浓度增加到2.0~4.OW/L时,麦穗鱼表现出明显的中毒症状,也出现了中 毒死亡现象;此浓度下,麦穗鱼脑A/AChE-IR出现小幅度被抑制现象。 试验结果表明,与单用三哇磷处理相比,锐劲特与三哇磷混合处理的麦穗鱼, 在恢复期内,脑AChE可R明显低,因此推测锐劲特阻碍麦穗鱼脑AChE活性恢复 的主要原因是阻碍AChE合成。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:X174

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【引证文献】
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