收藏本站
《浙江大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

低浓度烷化剂诱发的细胞应答反应的蛋白质组学研究

金静华  
【摘要】: 单功能烷化剂N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)是一种在环境中广泛存在的化学诱变剂和致癌剂,它能和DNA及蛋白质等生物大分子形成加合物(adduct),其引起的与突变有关的主要DNA损伤类型是O~6-甲基鸟嘌呤,这种损伤与肿瘤尤其是胃癌的发生密切相关。但是DNA损伤并不是引起突变的必要条件,一个典型的例子就是发生在B淋巴细胞的免疫球蛋白(Ig)可变区基因上的“体细胞超突变(somatic hyermutation)”,是由表面抗原受体而不是DNA损伤驱动的主动突变。环境诱变剂引起的突变也可发生在非DNA损伤部位,我们称之为非定标性突变(nontargeted mutagenesis)。这种突变除了可能由DNA损伤途径触发外,也有可能通过非核起源的外遗传(epigenetic)途径,激活细胞信号转导通路,引起一系列基因表达的改变而最终导致突变的形成。同样地,环境诱变剂诱发的细胞应答反应也不只是单纯地由DNA损伤所触发的。自环境毒物接触细胞开始,细胞就发生了一系列广泛和复杂的应答反应以应对此不良环境。其中包括了即刻发生的并不依赖于核损伤信号的信号转导通路的激活和较迟发生的基因表达的改变。 我们实验室曾用一特殊的突变检测系统,直接证明DNA损伤剂可在哺乳动物细胞诱发非定标性突变:首先用低浓度(0.2μM)的短寿烷化剂MNNG(半寿期为1.1hr)处理细胞2.5h后,继续培养24h,将重组有用作突变检测的靶基因supFtRNA基因的穿梭质粒pZ189转入细胞复制,发现在未受致癌物直接攻击的穿梭质粒中有较自发突变率高5倍以上的靶基因突变。这种突变并非在接受MNNG攻击以 浙江大学博士学位论文 金静华 后立刻出现,而是具有时相依存性,在致癌物攻击后其发生率逐渐升高,在 12h 达最高峰,以后逐渐下降。且突变谱明显不同于由MNNG直接攻击引起的定标 性突变,有其突变好发部位的序列特异性。 进一步地,我们还证明了低浓度MNNG的作用下有广泛的细胞反应,尤其 是在信号转导通路的激活和基因表达的改变的研究中取得了一些突破性的进展。 例如细胞表面受体如表皮生长因子受体、肿瘤坏死因子受体发生聚簇,细胞信号 转导通路CAMP}KAcgyB和JNK/SAPK被激活。更值得注意的是这些有关信 号转导通路的激活并不依赖于细胞核中的DNA损伤,因为在除细胞核的细胞中 这些细胞通路的激活仍可被诱发。我们还利用mRNA差异显示技术分离到了近 30个在 MNNG处理后表达改变的表达序列标签(expressed sequence ag,EsT)。 其中9号片段在MNNG处理后表达增高,其表达改变不受蛋白质合成抑制剂的 影响。利用反义核酸技术构建含反向插入9号片段的真核细胞表达重组体并转染 细胞,以获得反义RNA阻断vero细胞中相应基因的表达,发现MN’NG诱发的 非定标性突变频率显著增高,提示被阻断的相关基因的表达产物可能参与抑制非 定标性突变的发生。 由此可见,信号转导通路的激活和基因表达的改变可能是环境诱变剂通过非 DNA损伤途径诱发哺乳动物细胞非定标突变发生的关键所在。所以,从整体上 研究烷化剂作用后细胞基因表达谱改变,对于了解化学致癌物诱发的哺乳动物细 胞应激反应的全貌和揭示非定标性突变的发生机制具有非常重要的意义。虽然, 利用mRNA差异显示技术和基因芯片技术可在转录水平高通量的筛选基因表达 的差异,但是这些技术都不能提供转录后的尤其是蛋白质在翻译后修饰的信息, 而蛋白质通常是细胞内的功能执行者。蛋白质组学的技术——一种能同时研究成千 上万种蛋白质的技术一更适合于研究细胞对烷化剂的应答反应。因此,本研究中 我们利用蛋白质组学的技术研究了低浓度MN’NG诱发的哺乳动物细胞蛋白质的 表达差异;并且,利用双向凝胶电泳结合相应的ZD分析软件比较了反义阻断9 号片段相关基因的vero巾M-amp”习-细胞和转染空载体的对照细胞vero巾M-amp” 在MN’NG处理后细胞蛋白质组的表达差异,为阐明9号片段相关基因的作用机 制提供线索。 双向凝胶电泳方法的建立和低浓度MNNG诱发的人羊膜F’L细胞蛋白质的 2 浙江大学博士学位论文 金静华 差异表达的初步分析:FL细胞用0二sgu的MNNG处理又5小时后继续培养12 小时,对照组用溶剂二甲亚圃处理,然后提取细胞总蛋白,用双向凝胶电泳分离, 电泳后的凝胶用银染进行染色,并用专门的计算机软件对电泳结果进行数据采集 和图象分析,建立蛋白质组差异表达谱。结果:MNNG处理后的FL细胞中检测 到IO个新出现的蛋白点,同时有5个蛋白点在MN’N G处理后消失:有30个点 在表达量上有显著变化,其中16个点在MNNG处理后表达升高,另14个点则 表达量降低。结论:在低浓度烷化剂攻击的FL细胞中有一系列蛋白质表达水平 的改变,提示这些发生改变的蛋白质可能参与了哺乳类细胞非定标性突变的发 生。 低浓度MNNG诱发的人羊膜FL细胞差异表达蛋白的鉴定:为了能用质谱 的方法鉴定MN-NG诱发的FL细胞的差异表达蛋白,我们采用了上样量更大, 分离距
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:Q26

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 金静华,余应年,钱羽力;反义阻断抑制非定标性突变相关基因后Vero细胞蛋白质组的表达差异[J];生物化学与生物物理学报;2001年06期
2 孙雪敏,余应年,张小山,陈星若;MNNG所致哺乳类细胞非定标性突变的时相分析[J];中国药理学与毒理学杂志;1996年01期
3 冯朝晖,余应年,陈星若;低浓度N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍对HeLa细胞DNA聚合酶及拓扑异构酶Ⅱ α mRNA表达水平的影响[J];中国药理学与毒理学杂志;1999年03期
4 鲁靖,余应年,谢海洋;N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍诱发的vero细胞JNK/SAPK通路的激活[J];中国病理生理杂志;2000年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 金静华,余应年;蛋白质组学研究技术及其在烷化剂引起的细胞应答反应研究中的应用[J];癌变.畸变.突变;2002年03期
2 王晓燕,镡颖,梁子卿,曹能,黄云超,夏晓玲,汪旭;云南肺癌人群NAT1基因多态性研究[J];癌变.畸变.突变;2005年03期
3 张晨;王笑茹;;长期低剂量接触有机磷农药的致癌作用[J];承德医学院学报;2010年02期
4 刘红慧;王萍;宋世震;;中药抗遗传物质损伤的研究进展[J];公共卫生与预防医学;2010年04期
5 林玲;姚丹;钟碧瑾;房振华;王楠楠;耿艳;耿宝荣;;丁草胺对中华大蟾蜍蝌蚪的遗传毒性[J];福建师范大学学报(自然科学版);2009年06期
6 王文蔚;方芳;李春明;;环磷酰胺诱导的小鼠骨髓细胞微核率的时间、剂量-效应观察[J];广东微量元素科学;2006年08期
7 刘静,夏昭林;DNA损伤修复基因高甲基化与肿瘤[J];国外医学(卫生学分册);2005年06期
8 于立青,彭蜀晋;毒气之王和糜烂性毒剂[J];广州化学;2005年03期
9 魏晨曦;刘莉平;袁均林;何亚辉;王黎明;丁书茂;杨旭;;邻苯二甲酸二-(2-乙基己基)酯对小鼠红细胞ATPase活性的影响[J];化学与生物工程;2007年08期
10 王涛,董子明,赵明耀;DNA聚合酶β高表达与细胞癌变关系的研究进展[J];河南职工医学院学报;2004年03期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 苗晶晶;苯并[a]芘对栉孔扇贝分子毒理学机制的研究[D];中国海洋大学;2010年
2 韦霄;饮用水中碘乙酸和碘仿的检测识别、遗传毒性和潜在致癌性研究[D];复旦大学;2011年
3 李永红;宫内多环芳烃暴露对胎儿全基因组基因表达的影响[D];中国疾病预防控制中心;2011年
4 石斌山;FEN-1基因功能及其在遗传不稳定形成中的作用研究[D];浙江大学;2001年
5 陈建明;运用反义策略对人的两个突变相关基因hMMS2和CROC-1功能的初步研究[D];浙江大学;2001年
6 王谷亮;DNA聚合酶β在烷化剂MNNG引起的非定标性突变中的作用[D];浙江大学;2002年
7 帅培强;TK基因突变试验—三种人类淋巴母细胞的比较及两类突变集落形成的机理研究[D];四川大学;2005年
8 敖琳;小鼠毒理基因芯片在化学促癌研究中的初步应用[D];第三军医大学;2005年
9 吴美萍;哺乳细胞暴露于化学致癌剂MNNG的候选生物标记物的筛选和鉴定[D];浙江大学;2005年
10 刘更;1.低浓度MNNG激活内质网应激及其对EGFR通路的影响 2.内质网应激参与低浓度DNA加成性损伤剂诱发的细胞应答反应[D];浙江大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 林玲;丁草胺对三种无尾两栖类蝌蚪毒理学效应的研究[D];福建师范大学;2010年
2 孟鹏鹏;低浓度MNNG诱导GES-1细胞过程中Shh信号通路的动态观察[D];山西医科大学;2011年
3 吴东艳;安徽沿江两个富营养化浅水湖泊克氏原螯虾遗传毒性的季节变化[D];安徽大学;2011年
4 罗月球;DNA聚合酶κ和DNA聚合酶η在烷化剂MNNG引起的非定标突变中的作用[D];浙江大学;2003年
5 李增刚;氟吗啉诱导V79和CHL细胞基因突变和染色体畸变研究[D];中国医科大学;2003年
6 刘天婵;低剂量MNNG诱导共表达的蛋白基因启动子区的转录因子结合部位分析[D];浙江大学;2004年
7 陈小青;二硫化碳接触工人遗传毒性研究及其机制探讨[D];武汉大学;2004年
8 张玲;苯暴露诱导体外培养大鼠骨髓细胞凋亡及基因差异表达的研究[D];武汉大学;2004年
9 张新旺;β-胡萝卜素对MMC致小鼠骨髓细胞遗传损伤抑制作用的研究[D];山西医科大学;2004年
10 程仕伟;甲螨生物标志物在土壤农药污染检测中的应用[D];山东师范大学;2004年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 孙雪敏,余应年,张小山,陈星若;转录和翻译抑制对哺乳类细胞非定标性突变形成的影响[J];癌变.畸变.突变;1996年05期
2 鲁靖,余应年,谢海洋;N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍诱发的vero细胞蛋白酪氨酸磷酸化改变[J];中国药理学与毒理学杂志;2000年01期
3 胡文蔚,余应年,张小山,董海涛;N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍引起vero细胞基因表达改变及有关cDNA片段的初步鉴定[J];中国药理学与毒理学杂志;1998年01期
4 孙雪敏,余应年,陈星若;甲基硝基亚硝胍处理的vero细胞中磷酸化蛋白的差异显示[J];中国病理生理杂志;1999年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈斌;毕志刚;;中波紫外线辐射前、后角质形成细胞蛋白质组双向电泳图谱的差异分析[J];临床皮肤科杂志;2006年04期
2 常俊丽;杨广笑;何光源;;蛋白质组学应用研究进展[J];生物技术;2006年05期
3 陈佳佳;;蛋白质组学技术在农作物研究中的应用进展[J];安徽农业科学;2010年36期
4 张根连;范术丽;宋美珍;庞朝友;喻树迅;;植物蛋白质组学技术研究进展[J];生物技术通报;2011年07期
5 刘东;;蛋白质组学及其研究进展[J];中山大学研究生学刊(自然科学、医学版);2007年04期
6 丁鸿;邱东萍;;蛋白质组学研究技术综述[J];江西农业学报;2008年08期
7 王一鸣;陶晶;郭晓奎;姚玉峰;;蛋白质组学在结核分枝杆菌研究中的应用[J];微生物学通报;2009年02期
8 李利文;周建美;邹定全;冉珂;李李;徐军美;;缺血后处理兔心肌蛋白质组学双向凝胶电泳分析的初步研究[J];中国生物工程杂志;2010年07期
9 黄振烈;越飞;杨杏芬;黄建勋;李来玉;黄汉林;;人外周静脉血血清蛋白质双向凝胶电泳条件优化[J];中国职业医学;2007年05期
10 黄丽俊,王建华;蛋白质组研究技术及其进展[J];生物学通报;2005年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黄振烈;越飞;杨杏芬;梁丽燕;黄建勋;李来玉;黄汉林;;三氯乙烯药疹样皮炎病例血清差异蛋白质组学研究[A];中国毒理学会放射毒理专业委员会第七次、中国毒理学会免疫毒理专业委员会第五次、中国环境诱变剂学会致突专业委员会第二次、中国环境诱变剂学会致畸专业委员会第二次、中国环境诱变剂学会致癌专业委员会第二次全国学术会议论文汇编[C];2008年
2 仇晓燕;刘宁;刘淑莹;刘志强;;肿瘤细胞耐药机制的蛋白质组学研究[A];中国蛋白质组学第三届学术大会论文摘要[C];2005年
3 赵旭宏;田野;靳胜;王文营;张曼;;尿液蛋白质组学分析前列腺增生[A];全国临床免疫检验研讨会暨第六届全国临床免疫学术会议论文汇编[C];2009年
4 秦慧;刘挺;杨金亮;黄欣;杨寒朔;阚兵;魏于全;;维甲酸耐药细胞与敏感细胞的差异蛋白质表达谱分析[A];中国蛋白质组学第三届学术大会论文摘要[C];2005年
5 吴明军;赵迎泽;毕杨;黄佳祎;冯涛;;HBx腺病毒转导L02细胞的比较蛋白质组学研究[A];第九届西南三省一市生物化学与分子生物学学术交流会论文集[C];2008年
6 黄振烈;越飞;杨杏芬;梁丽燕;黄建勋;李来玉;黄汉林;;职业性三氯乙烯药疹样皮炎病例血清差异蛋白质组学研究[A];中国毒理学会第五次全国学术大会论文集[C];2009年
7 任锋;王媛媛;丁美;赵军;张晶;陈煜;段钟平;;慢性重型肝炎肝衰竭患者血清差异蛋白质组学初步研究[A];第一届全国疑难重型肝病大会、第四届全国人工肝及血液净化学术年会论文集[C];2008年
8 吴正治;张晓丽;王济国;贾秀琴;张永锋;杨敏;;舌苔蛋白质组的分离鉴定与生物信息学分析[A];中国中西医结合学会诊断专业委员会2009’年会论文集[C];2009年
9 章晓鹏;肖志强;李萃;李建玲;余艳辉;欧阳咏梅;冯雪萍;张鹏飞;陈主初;;分析喉癌相关基因(LCRG1)抑瘤作用相关的磷酸化蛋白质[A];中国蛋白质组学第三届学术大会论文摘要[C];2005年
10 曾希;苏琦;易岚;唐海林;廖爱军;解娜;刘亮;;血清蛋白质组分析方法筛选人胃癌相关抗原[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 吴月辉;蛋白质组学在美逐步形成市场[N];新华每日电讯;2001年
2 ;抓紧蛋白质组学的研究[N];中国医药报;2002年
3 黎明;科学新宠——蛋白质组学[N];医药经济报;2001年
4 前线;蛋白质组学产业正逐渐形成[N];中国经营报;2001年
5 麦国荣;蛋白质组学[N];中国医药报;2001年
6 王雪飞 吴志军;首建人类器官蛋白质组“蓝图”[N];健康报;2006年
7 特约记者 郝成涛 记者 于春光;为肿瘤疾病的防治研究开辟新途径[N];解放军报;2009年
8 本报特约记者 吴志军 郝成涛;为科学攀登搭建精神高地[N];解放军报;2010年
9 阳光;中科院大连化物所为蛋白质组学研究提供新方法[N];中国医药报;2007年
10 潘文;提高基础及应用研究水平[N];中国医药报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 金静华;低浓度烷化剂诱发的细胞应答反应的蛋白质组学研究[D];浙江大学;2003年
2 王谷亮;DNA聚合酶β在烷化剂MNNG引起的非定标性突变中的作用[D];浙江大学;2002年
3 江晓华;多烯紫杉醇对人肝癌细胞系HepG2蛋白质组影响的体外实验研究[D];中南大学;2006年
4 黄志勇;食管癌比较蛋白质组学初步研究[D];第一军医大学;2007年
5 边学;甲状腺乳头状癌组织与正常腺体组织蛋白质的差异表达分析[D];中国协和医科大学;2007年
6 张晓丽;几种舌苔蛋白组学初步研究[D];湖北中医学院;2008年
7 刘骥;脓毒症患者血小板蛋白质组学的研究[D];第二军医大学;2009年
8 李明;人结肠上皮衰老机制的蛋白质组学研究[D];中南大学;2007年
9 卢占军;感染马立克氏病病毒SPF鸡法氏囊蛋白质组学研究[D];扬州大学;2009年
10 吴美萍;哺乳细胞暴露于化学致癌剂MNNG的候选生物标记物的筛选和鉴定[D];浙江大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 兰国伟;结核分枝杆菌北京家族多重耐药菌株CCDC5180、药物敏感菌株CCDC5079与BCG的蛋白质组学初步研究[D];石河子大学;2007年
2 张松江;急性力竭运动大鼠腓肠肌的蛋白质与蛋白质组差异性表达的研究[D];湖南师范大学;2006年
3 白雪;大肠癌发生与肝转移蛋白质组表达差异及其意义的研究[D];第三军医大学;2005年
4 李微微;子宫内膜癌蛋白质组的差异表达分析及意义[D];中国医科大学;2007年
5 赵平平;多发性硬化患者血清差异蛋白质组学研究[D];河北医科大学;2008年
6 李培;吉兰—巴雷综合征患者免疫球蛋白治疗前后血清的比较蛋白质组学研究[D];河北医科大学;2009年
7 曹洪祥;甜菜M14品系花器官特异表达蛋白质的研究[D];黑龙江大学;2009年
8 曾希;血清蛋白质组学分析方法初步筛选人胃癌相关抗原[D];南华大学;2006年
9 谈旭翡;1IZ2_A蛋白在慢性乙型肝炎进展中的初步研究[D];浙江大学;2010年
10 杜于茜;自发性高血压大鼠肾脏组织双向电泳的建立与分析以及氯沙坦对其的影响[D];浙江大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026