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《浙江大学》 2003年
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肝豆状核变性基因外显子突变研究

叶盛  
【摘要】: 肝豆状核变性(hepatolenticuler degeneration,HLD)又称Wilson病,是铜代谢障碍导致铜在体内过量沉积所引起的疾病,发病率为1/10万至1/30万,是儿科较常见的遗传代谢病。本病为多系统累及疾病,临床表现多样,所以早期诊断较困难,易致误诊漏诊,导致治疗失败。目前的研究表明基因诊断将是实现早期诊断的较好方法,对HLD基因突变特点的研究将为基因诊断方法的建立确定理论基础。 目前已明确HLD基因定位于13q14.3,cDNA序列长4398bp,含有21个外显子及20个内含子,外显子长度从77bp-1234bp,大多为200bp左右。编码1465个氨基酸。其蛋白产物为一铜转运P型ATP酶。此酶主要有三个功能区:①金属离子结合区(metal binding site domain),位于N端,有6个与特定金属结合的氨基酸保守序列,长约30个氨基酸左右。②P型ATP酶功能区(也称高度保守区),包括磷酸酶活性区、磷酸化区,此区含有ATP酶磷酸化底物天冬氨酸残基及ATP结合区。③跨膜区(也称疏水区),包括6个跨膜螺旋区和1个双亲媒性区,间插于整个多肽链中。 浙江大学博土学位论文 截止目前,己有225种基因突变类型被发现,其中错义、同义 或无义突变为144种类型,49种小缺失,12种小插入,3种调节基 因突变,l种插入和缺失同时存在的突变,2种复杂重整突变以及门 种剪接突变和 3种大片段缺失。国外学者的研究确定 14号外显子 1069 密码子为白色人种 HLD患者高频突变点,其突变方式为 HI 069Q.对 黄色人种HLD患者的初步研究表明其与白色人种外显子突变特点有 明显差异,但目前缺乏对黄色人种患者 HLD基因 ZI个外显子的全面 测序筛查,对此基因的突变形式、频度尚未有统一结论。这在理论上 很大程度制约了HLD基因诊断方法的建立。 本研究对 HLD基因 ZI个外显子进行全面性测序筛查,探索浙 江省汉族患者HLD基因突变数据,为HLD基因诊断方法的建立提供 理论论据,为 HLD临床早期诊断作一初朱探索。 第一部分HLD基因外显子突变筛查 目的 探索HLD基因外显子突变类型、分布、频度 方法 从30例浙江省汉族HLD确诊患者外周血中酚氯仿法制备DNA,针 对刀个外显子设计引物,PCR扩增各外显子,琼脂糖水平电泳后在 紫外灯下割取目的条带回收PCR产物,Sanger双脱氧链终止法测定 DNA序列。 结果 4 浙江大学博士学位论文 一、突变数目:共发现12种突变,其中5种为新突变,7种为己有 报道突变。 二、突变类型:单碱基错配11种,小缺失1种。其中错义突变8种, 同义突变2种,调节基因突变2种。 三、突变位置卜新发现突变): exon:*.123.119delCGCCG exon:-75A>C exon 2:”287A>Q D96G exon 2:巧88C>入D196E exonZ:”1216ThQ 5406A e-con3:*1366G>C,V456L exon 8 :二爿OC>Q u70L exon 8:2333G>T R778L exon 10:2495A>Q K832R exon 2975C>工*992L exon:3的SC>工S门665 exon巫7:3 646G>A,V1216 MM 四、突变频率:1216 T>T>G 26.7%,1366G>C 23.3%,2310C>G*8.3%, 2333G>T 28.3%,2*SA>G 25*%,2975C>T 26.7%,其余均为 散发突变,突变率(5%. 结论 一、-123-119dCICGCCG;287A>Q D96G;588C>A,D196E;1216T>Q 5 浙江大学博士学位论文 *06A;1366G>C,*456L为e D新发现的突变类型。 二、浙江省汉族 HLD 患者热点突变区为 121 6T>Q 5406A; 1366G>C,V456*Z 2310C>Q*770*2 2333*>T*778*2 2495*>Q *832R;2975C>丁”92L.而exon 14的3207C>A,H1069Q未 发现有突变:这与白色人种患者突变规律有很大差异。 三、浙江省汉族HLD基因外显于突变以点突变为主,偶见小缺失。 第二部分IILD基因外显子突变型与临床表型关系 目的 探索eD基因外显子突变与临床表型关系 方法 收集 3 0例浙江省汉族 HLD确诊患者临床资料(性别;发病年龄;临 床分型人 将其与6个突变热点中的5个错义突变位点相比较。 结果 一、30例患者中,男15例,女15例。发病年龄4~14岁,平均8.96 士 1.87岁。肝型 18例,神经型 8例,其它型 4例。 h、5个错义突变位点的突变患者与无突变患者临床表型差异无统计 学意义。 结论 未发现基因外显子突变类型与临床表型有相关性。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R742.4

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【参考文献】
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