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《浙江大学》 2003年
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胶原—壳聚糖人工皮肤替代物的初步研究

陆新  
【摘要】: 背景资料 皮肤的烧伤,创伤,慢性溃疡,肿瘤切除等多种因素都可以造成皮肤的全层损伤。如何修复创面,促进创面愈合,及改善愈后的功能和外观是外科领域的基本问题。皮肤组织工程的兴起为创面治疗揭开了崭新的一页。1975年Reinwald和Green在体外成功地培养了人皮肤角朊细胞膜片;1981年,O'Connour首次成功地将培养的自体表皮膜片(cultured epithelial autograft,CEA)应用于治疗烧伤创面。虽然CEA的使用拯救了许多生命,但它提供的只是表皮部分,移植存活率不稳定,愈后功能和外观得不到改善。真皮成份在促进创面愈合及改善愈后上起着重要的作用。经过多年的努力,在真皮替代物上的研究已取得了很大的成绩。目前,真皮替代物主要有三种类型:1.脱细胞异体真皮。2.合成的生物可降解材料。3.由交联的动物胶原基质构成。国外的人工皮肤产品,价格均十分昂贵,一块7.5cm直径的Apligraf为975$,50cm~2的Epicel 790$(即CEA),120cm~2Integra 1000$,而国内在研制胶原多孔膜加其它生物相容性材料再种植入真皮成纤维细胞构成活性人工真皮的研究还很少见,更没有形成商品。胶原和壳聚糖制取比较容易,所需成本不高,两者混合有一定机械强度,可用于构建人工皮肤。我们研究浙大自行研制的胶原壳聚糖多孔膜的细胞毒性并在多孔膜种植人皮肤成纤维细胞,初步形成了活性人工真皮替代物。完全意义上的组织工程化皮肤应当包括表皮和真皮,创面最终的愈合仍然要靠表皮覆盖。为此,我们进行了皮肤角朊细胞的培养,并在胶原壳聚糖平面膜上种植人皮肤角朊细胞构成了以可降解人工膜为载体的人表皮膜片作为表皮替代物,结合活性人工真皮替代 浙江大学硕士学位论文 物,有望应用于创面修复。这在自主开发人工皮肤的研究上有很大的意义。 目的 初步构建胶原-壳聚糖人工皮肤替代物,并从构建材料的细胞毒性和耐 酶消化能力,人工真皮替代物上成纤维细胞的增殖和活性情况及冻存的可能 性等多方面进行研究,为将其进一步应用于创面修复作准备。 材料和方法 胶原-壳聚糖多孔及平面膜由浙江大学高分子材料和工程学系提供。 一.皮肤细胞培养 1.人真皮成纤维细胞厂bS)的培养 取包皮环切术获得的皮肤以组织块培养法得到人真皮成纤维细胞并传 代培养,以5叫 代细胞为工作细胞。 2.胎儿皮肤角阮细胞的培养(KC) 取胎龄5个月后的引产胎儿背部皮肤,以酶消化法得到角肮细胞,培养 角肮细胞并传代培养。 二.胶原-壳聚糖多孔膜浸出液细胞毒性的研究 将胶原壳聚糖多孔膜浸提液用于培养FbS,空白对照为含10%小牛血清 的 DMEM培养液。培养 1、3、5天时以 MTT法测定光吸收值(OD),按下列公 式计算相对增殖率 (Ralativ growth rate,RGR)。RGR=(实验组光吸收值 /对照组光吸收值)X 100%然后按 ISO/TC194文件评定细胞毒性。 三.胶原-壳聚糖人工真皮替代物的构建 干热交联的胶原-壳聚糖多孔膜置 96 yL板,按 10~。m‘种植 Fbs,D地M 作培养基(高糖,含10%新生牛血清及双抗100u加厂置37t,5%CO。孵箱内 培养,每 2~3天换液一次。种植后 6天,17天作石腊切片,观察 FbS在膜 上形成的组织学结构。 四.吸光值(OD)与细胞数的关系 调整 Fbs密度至 ZX 10‘/ml,在 96孔板上按梯度稀释至 SX 10’/孔,2.5 X10’/了L,1.25X10’/了L,6.25X10‘子L,3.13X10‘/yL,1.56X10’/于L,7.8 2 浙江大学硕士学位论文 X 10’/孔,作 3 复孔。MTT法测定光吸收值(OD)。记录结果,并用 Excel 软件处理,得到细胞数与OD的回归方程。 五.人工真皮替代物上FbS增殖及活性情况 5.IFbS的增殖情况 将 Fbs种植在多孔膜,密度约在 3 X 10丫cm’,以 96孔培养板为对照。 每 3天换液。种植当天及 1、3、5、7、17天分别测定 OD值。利用四.所述 回归方程可得到细胞数,细胞数取对数值,将上述种植于多孔膜及培养孔中 的细胞增殖情况以半对数图表示进行比较。 5.ZL-2磷酸维生素C增加人工真皮替代物细胞活力情况 按 6.l方法种植 FbS并加人 L-2磷酸维生素 C,终浓度 50 P M。种植后 1、3、5、7、17天测定 OD值。与 FbS种植在多孔膜(不加 L-2磷酸维生素 C)比较。 5.3人工真皮替代物 Fb S分泌细胞因子情况 种植细胞3天时换液,再培养1 天,取上清,用抗体夹心ELISA法测 定人工真皮上清液几 -6,IL-8,以 DMEM+10%小牛血清作对照进行比较。 六.冻存人工真皮替代物的初步试验 FbS种植于 96孔板上的多孔膜后 5天,将其加入含 DMEM培养液 + 20% 新生牛血清+ 10%DMSOI.sml的冻存管中,置石棉泡沫盒后,移人一80C冰 箱中。分别于3大,14天时取出20管,37C水浴复温。于复苏后1、3、5、 12天,用 MTT法测定 OD值。 七.干热交联多孔膜与未交联的多孔膜体外降解情况
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R318.1

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 万冬;医用壳聚糖基海绵支架的制备与研究[D];武汉大学;2005年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 陈耀富,印木泉,贺清玉;可吸收止血敷料的细胞毒性和致突性研究[J];第二军医大学学报;1997年02期
2 杨晓芳,奚廷斐;生物材料生物相容性评价研究进展[J];生物医学工程学杂志;2001年01期
3 肖仕初,夏照帆,杨珺,张素珍;成纤维细胞-无细胞真皮替代物的生物学活性及移植实验[J];中华烧伤杂志;2001年04期
4 宁丽,薛淼,黄海宁,孙皎,李亦文,顾国珍,钱云芳,孟爱英,李昌本,赵寿元;皮肤再生膜的生物相容性系列研究[J];中国修复重建外科杂志;2000年01期
5 刘晋宇,侯立中,颜炜群,杨同书;组织工程化人工复合皮肤的构建[J];中国修复重建外科杂志;2001年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 方林森,余又新;表皮干细胞研究进展[J];蚌埠医学院学报;2005年02期
2 田嘉军,郑华,陈敦春,王定国;生物衍生组织工程骨支架材料生物学评价[J];北京生物医学工程;2003年04期
3 刘慧玲,王栋,章金刚;胶原蛋白在临床医学中的应用[J];北京生物医学工程;2005年03期
4 王喜云;王远亮;;生物材料的生物学评价方法研究进展[J];北京生物医学工程;2007年01期
5 赵雄;曹晓涵;马玉媛;吕茂民;尹惠琼;刘明;章金刚;;纤维蛋白止血敷料的生物相容性研究[J];中国输血杂志;2010年04期
6 蔡兴东;周庆红;王中宁;曾社平;徐立勤;王敏;;不同厚度新鲜猪皮片在深度烧伤创面应用比较[J];白求恩军医学院学报;2007年06期
7 黄琪;阮孜炜;李东旭;;磷酸钙骨水泥的生物学性能[J];材料导报;2005年07期
8 左保齐,吴徵宇,严春,沙香玉;甲醇、乙醇凝固剂对再生丝素纤维性能的影响[J];材料科学与工程学报;2004年06期
9 叶勇;张剑韵;黄龙全;;丝素膜表面接枝肝素分子的反应条件与体外抗凝血作用[J];蚕业科学;2007年01期
10 陈春花;朱良均;邹凤竹;;丝素/壳聚糖共混膜性能测定及制备配方探讨[J];蚕业科学;2007年01期
中国重要会议论文全文数据库 前4条
1 王碧;王坤余;张廷有;但卫华;;胶原蛋白-葡甘聚糖-壳聚糖(CKCS)共混膜的生物相容性研究[A];第五届中国功能材料及其应用学术会议论文集Ⅱ[C];2004年
2 冯光珍;;人皮肤组织工程的实验研究与临床初步应用[A];2002年烧伤年会论文汇编[C];2002年
3 章培标;侯宜;侯立中;周余来;杨同书;颜炜群;曲福军;;胶原凝胶法同步构建组织工程复合人工皮肤[A];“振兴吉林老工业基地——科技工作者的历史责任”吉林省第三届科学技术学术年会论文集(下)[C];2004年
4 周余来;乔锋利;章培标;侯立中;颜炜群;杨同书;;红外热像扫描技术在组织工程皮肤移植修复中的应用[A];“加入WTO和科学技术与吉林经济发展——机遇·挑战·责任”吉林省第二届科学技术学术年会论文集(下)[C];2002年
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1 郭瑞;基因活性真皮替代物的构建及其用于皮肤再生的研究[D];浙江大学;2010年
2 王林;缓释肾上腺髓质素支架材料的制备、表征及体外生物活性评价[D];吉林大学;2011年
3 董莹;钛支架人工角膜生物相容性的临床和实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
4 陈欢;阳离子聚合物介导的基因输送在复合组织再生修复中的应用及免疫效应研究[D];南京大学;2011年
5 曹玉萍;体外化学物质致敏性检测模型和组织工程皮肤真菌感染模型的构建[D];北京协和医学院;2011年
6 代震宇;纳米羟基磷灰石/聚氨基酸复合材料的制备与应用研究[D];重庆医科大学;2011年
7 戴程隆;用于局部快速止血和骨修复的可降解介孔硅基干凝胶设计制备与性能研究[D];华东理工大学;2011年
8 文锐;抗凝改性血液净化滤器膜构建及性能研究[D];中南大学;2010年
9 胡欣;齿科修复用钛—锆—铌—锡合金研制及临床应用研究[D];天津医科大学;2011年
10 彭谦;新型多孔磷酸钙陶瓷支架构建及其体内培育大尺寸活体骨修复体[D];西南交通大学;2010年
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1 王海涛;生物镁合金的生物相容性研究[D];郑州大学;2010年
2 马群;壳聚糖基角膜内皮组织工程载体支架的制备及性能评价[D];中国海洋大学;2010年
3 韩蓉;聚丙烯缝合线的生物安全性评价[D];苏州大学;2010年
4 徐威;龙血生肌膏对大鼠失神经支配创面愈合过程中表皮干细胞分化影响的实验研究[D];浙江中医药大学;2010年
5 王爱新;固化液对(TTCP+MCPM+β-TCP)系骨水泥理化性质的影响[D];河南师范大学;2010年
6 薛正翔;基于RGD-蛛丝蛋白复合纳米纤维构建小直径血管支架的研究[D];福建师范大学;2010年
7 尹刚;壳聚糖止血粉止血作用的实验研究[D];第二军医大学;2011年
8 李坤杰;体内外构建毛囊的探索研究[D];昆明医学院;2011年
9 吴景景;牙周组织工程用玉米醇溶蛋白多孔支架的制备及性能研究[D];河北医科大学;2011年
10 黄波涛;5-氟尿嘧啶-Fe/Fe_3O_4磁性脂质体的制备、表征及体外抑瘤作用研究[D];南京医科大学;2011年
【同被引文献】
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1 王志华,李青燕,王书俊;新型多孔多胺化交联壳聚糖对镉(Ⅱ)吸附性能的研究[J];北京化工大学学报(自然科学版);2003年02期
2 冷波,全学军,周跃钢,谭怀琴;聚乳酸研究的现状及发展方向[J];重庆工学院学报;2003年02期
3 郑连英;甲壳低聚糖的研究进展[J];材料科学与工程;1999年03期
4 朱堂友,伍津津,胡浪,李文维,贺萍,杨宏珍,张民众,徐春蓉;壳多糖-胶原-糖胺聚糖凝胶人工皮肤的制备[J];重庆医学;2002年10期
5 孙慎侠,范钦信,韩振武,吴恩海;溶菌酶降解壳聚糖的实验研究[J];大连大学学报;2002年06期
6 周红星;骨组织工程中种子细胞和材料的粘附[J];第三军医大学学报;2003年02期
7 赵建华,蒋祖言,王远亮;聚乳酸的合成及其毒性实验研究[J];第三军医大学学报;1996年03期
8 赵东锷,刘维永,汪钢,俞世强;胶原膜、聚乳酸聚乙醇酸膜和聚β羟基丁酯的生物相容性[J];第四军医大学学报;2002年18期
9 胡瑛,杜予民,刘慧;壳聚糖抗菌性与分子量和环境介质相关性研究[J];分析科学学报;2003年04期
10 董炎明,李志强,郭榕;一种新的液晶高分子──丁酸壳聚糖的合成与表征[J];高等学校化学学报;1998年01期
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1 秦雄;聚氨酯—胶原壳聚糖复合人工食管重建犬颈段食管的实验研究[D];第二军医大学;2002年
2 朱惠光;聚乳酸组织工程材料的细胞相容性表面设计研究[D];浙江大学;2003年
3 王树森;新型神经组织工程材料的制备及其在周围神经和脊髓损伤修复中的应用[D];第四军医大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 王勉;邻苯二甲酰化壳聚糖的液晶行为研究[D];厦门大学;2001年
2 苏丽萍;壳聚糖多孔膜的制备及其作为生物因子盖髓载体的初步研究[D];第四军医大学;2004年
3 梁伟;神经组织工程修复支架材料的制备及其相关基础研究[D];第四军医大学;2004年
4 潘政军;聚乙烯醇—胶原聚合物构建组织工程前交叉韧带的初步研究[D];暨南大学;2004年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
1 张彩霞;;应用细胞培养法对复合树脂充填材料的毒性研究[J];口腔医学;1982年01期
2 奚廷斐;医疗器械生物学评价(二)[J];中国医疗器械信息;1999年04期
3 奚廷斐;医疗器械生物学评价(三)[J];中国医疗器械信息;1999年05期
4 奚廷斐;医疗器械生物学评价[J];中国医疗器械信息;1999年03期
5 吕晓迎;牙科材料细胞毒性评定的新方法(MTT试验)[J];中华口腔医学杂志;1995年06期
6 马刚,杨同书,颜炜群,张林,侯立中;复合培养人工皮肤的制备[J];中华皮肤科杂志;1998年02期
7 苏波;赵雪莲;张仕敏;张素贞;葛绳德;;表皮细胞培养与移植研究——表皮细胞分离技术[J];中华整形烧伤外科杂志;1996年02期
8 王旭,王甲汉,吴军,赵阳兵,赵雄飞;复合皮的制作与临床应用[J];中国修复重建外科杂志;1997年02期
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1 孙坚,李明珠,徐军;壳聚糖膜的降解性及生物反应性研究[J];同济大学学报(医学版);2002年03期
2 王爱勤,薛佐良,赵生敏,曹农,贾宝全;医用壳聚糖膜的制备与性能研究[J];北京生物医学工程;1996年01期
3 张卫国,吕德成,姜长明,吴春明,汤欣,孙立众;壳聚糖膜预防屈肌腱粘连的临床应用研究[J];医师进修杂志;2001年02期
4 杨丕山,庄昭霞,孙钦峰,李振玉;壳聚糖膜促进牙周骨再生的实验研究[J];山东医科大学学报;1998年03期
5 卢霞;应国清;应雪肖;;壳聚糖在药物缓释中的应用[J];药物生物技术;2006年03期
6 黄凌;许零;翟茂林;;甲壳素及其衍生物在生物修复材料中的应用研究[J];中华损伤与修复杂志(电子版);2007年06期
7 李志宏;武继民;关静;黄姝杰;李瑞欣;郭勇;张西正;;壳聚糖共混改性对胶原蛋白GTR膜性能的影响[J];医用生物力学;2009年S1期
8 孙钦峰,庄昭霞,杨丕山,曹宗顺,卢凤琦,李振玉;壳聚糖膜促进牙周新附着的实验研究[J];山东医科大学学报;1998年04期
9 方华丰,周宜开,袁津玮,任恕;壳聚糖作为敏感膜材料的研究[J];同济医科大学学报;2000年03期
10 侯巍;冯世庆;孔晓红;张辉;陈家童;王沛;李晖;郭世绂;;转基因雪旺细胞与壳聚糖的相容性[J];中华实验外科杂志;2006年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘传刚;高林;;两种类型增塑剂对壳聚糖膜性能的影响[A];第七届中国功能材料及其应用学术会议论文集(第5分册)[C];2010年
2 吴昊;姚珍;;壳聚糖玻璃化转变温度的测定研究[A];“国际化学年在中国”——中国化学会第三届全国热分析动力学与热动力学学术会议暨江苏省第三届热分析技术研讨会论文集[C];2011年
3 郑静;杨俊玲;;壳聚糖液晶的制备及表征[A];“力恒杯”第11届功能性纺织品、纳米技术应用及低碳纺织研讨会论文集[C];2011年
4 吴俊红;王家俊;孙辉;许寅;郭丽;刘亚平;;增塑剂对壳聚糖/羟丙基甲基纤维素共混膜的改性研究[A];第十三届全国包装工程学术会议论文集[C];2010年
5 田京辉;徐建斌;王玮;钱佩佩;曹凯;李晓曼;;吡拉西坦体外透膜释放的研究[A];中国成人医药教育论坛[2010(3)][C];2010年
6 刘伯基;沙宪政;;植入式葡萄糖传感器膜材料组织相容性研究——壳聚糖与Nafion植入的比较[A];中国生物医学工程学会成立30周年纪念大会暨2010中国生物医学工程学会学术大会报告论文[C];2010年
7 贺庆;敖强;公衍道;张秀芳;;不同脱酸方法对壳聚糖膜纳米拓扑结构及细胞相容性的影响[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
8 陶希芹;王明力;袁志;王丽娟;;纳米TiO_2—壳聚糖复合膜的功能特性与应用研究[A];2009年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会论文集[C];2009年
9 杜望溯;;壳聚糖应用于拔牙术的探索[A];中华口腔医学会全科口腔医学专业委员会第一次学术年会会议论文集[C];2009年
10 张林;杨立邦;隋淑英;董朝红;路平;;抗菌纤维素/壳聚糖衍生物复合共混膜的制备及性能研究[A];“亚伯”杯2011年第五届全国纺织印染助剂学术交流会论文集[C];2011年
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1 聂柳慧 韩永生;用壳聚糖膜作保鲜包装材料的研究[N];中国包装报;2011年
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1 钟辉;壳聚糖增强重组腺病毒转导效率及口服免疫效果初步研究[D];北京协和医学院;2009年
2 俞丹;壳聚糖对金属钯的吸附机理研究及在电磁屏蔽用导电织物制备中的应用[D];东华大学;2011年
3 刘也卓;壳聚糖改性及壳聚糖基膜色谱材料的设计与开发[D];复旦大学;2012年
4 李友良;基于碱性溶剂体系制备壳聚糖新材料的研究[D];浙江大学;2012年
5 方健;壳聚糖基膜材料的制备、性能与结构表征[D];北京林业大学;2013年
6 冯永巍;壳聚糖的化学改性及其衍生物的抑菌活性研究[D];江南大学;2011年
7 程沁园;壳聚糖止血活性及其生物安全性评价研究[D];江南大学;2013年
8 刘鹏;淀粉/聚乳酸/壳聚糖共混抗菌材料制备中若干基础科学问题的研究[D];华南理工大学;2010年
9 林军;诱导型复合壳聚糖骨引导膜的生物学性能评价[D];浙江大学;2011年
10 王丽岩;壳聚糖基活性包装膜的性能及其在食品贮藏中应用的研究[D];吉林大学;2013年
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1 魏现航;壳聚糖在印染废水处理中的应用[D];青岛大学;2010年
2 赵振拴;壳聚糖膜预防膝关节术后粘连的实验研究[D];河北医科大学;2002年
3 李浩;N-琥珀酰壳聚糖的制备及其应用研究[D];浙江大学;2011年
4 涂智峰;壳聚糖透明质酸复合物止血粉在鼻腔止血应用的可行性研究[D];暨南大学;2010年
5 鄂玮;海藻酸钠—壳聚糖生物膜在引导骨再生中的实验研究[D];大连医科大学;2010年
6 赵朋;关节软骨修复用壳聚糖-PEG水凝胶的制备及其性能研究[D];武汉理工大学;2010年
7 卢娟;壳聚糖基药物缓释材料的制备及性能研究[D];西南大学;2011年
8 李爱珍;明胶—壳聚糖可食性复合膜的制备与应用研究[D];山东轻工业学院;2010年
9 吴清华;TGF-β3基因转染MSCs复合壳聚糖的组织工程支架构建的实验研究[D];重庆医科大学;2011年
10 李洁;非穿透性滤过手术联合壳聚糖膜植入的动物实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年
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