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《浙江大学》 2003年
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IGF-Ⅱ促小鼠成骨样细胞增殖及对细胞一氧化氮合酶基因表达的影响

孙伟莲  
【摘要】: 牙周病是各国人群中常见的牙周组织疾病,我国成人中牙周病发病率高达73%。各类牙周病中,以牙周炎较为常见。牙周袋形成和牙槽骨吸收是牙周炎最主要的临床体症和病理改变。由于牙槽骨吸收是牙周炎患者牙齿松动甚至丧失的直接原因,因此阻断牙槽骨吸收、牙槽骨生物修复是目前牙周炎治疗中的研究热点。 众所周知,成骨细胞(osteoblast,OB)是骨形成过程中的主要功能细胞。大量研究结果表明,一氧化氮(nitric oxide,NO)是参与细胞增殖和分化的重要信使分子。NO介导细胞因子、机械应力、激素等对骨细胞的刺激效应,参与体内、外的骨组织改建。适宜的低浓度的NO能促进成骨,而高浓度NO则可对细胞产生毒性,抑制成骨。已有研究资料证实,病变牙周组织局部NO水平的增高,可影响牙槽骨吸收和牙槽骨的修复重建。因此,降低牙周组织NO水平,从而抑制NO的毒性作用,有助于提高牙周炎的疗效。 胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF)是多种细胞分泌的多肽类生长因子,可分为IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ。文献报道,IGFs具有多种复杂的生物学功能。IGF-Ⅱ除了能促进细胞增殖和分化外,还能延长细胞存活时间。IGF-Ⅱ能调节细胞NO水平,并具有细胞特异性,因而对不同细胞NO水平的调节作用有差异,甚至相反。如IGF-Ⅱ能促进大鼠L6E9肌细胞诱导型一氧化氮合酶 浙江大学硕士学位论文 中文翁歹 Onducible itric oxide Sylthase,iNOS)的表达,使 NO水平升高;但抑制大鼠 血管平滑肌细胞和小鼠胰岛细胞oOS的表达,结果使NO水平降低,体现为 抗NO细胞毒性、抗细胞凋亡作用。 然而,有关IGFll对成骨细胞NO水平的调节作用及其机制,尚未见国内 外文献报道。我们研究IGFll对小鼠成骨细胞株MC3T3* 的增殖、存活效应 及对NO水平的调节作用,以期为IGFll在阻断牙槽骨吸收及生物修复牙槽骨 中的应用提供科学依据。 目的 探讨IGFll对小鼠成骨细胞的增殖和存活效应、NO水平的调节作 用、iNOS和内皮型 NOSkndothelial nitric oxide Synthase,eNOS)mRNA转录 水平的影响,以初步了解IGFll促成骨细胞增殖的分子机制。 方法 选用小鼠成骨细胞株MC3T3E 为IGF-11效应检测的细胞模型。在 不同浓度、不同时间*F-11作用MC3T3-EI细胞后,用噎哩蓝(MTT)比色法 检测促细胞增殖及细胞活性的效应;用酶化学法检测细胞培养液上清中NO浓 度;应用半定量反转录聚合酶链式反应hCVCfSC tfgnSCflpt1Oll polyffiCrAsC Chslfl reaction,RTPCR)检测细胞 iNOS和 eNOS mRNA水平。 结果 l.IGFJ 对MC3T3E 细胞增殖的浓度及时间效应 MTT法通过检测OD49。吸光值来反映细胞增殖程度,OD490吸光值大小与细 胞数量成良好的正向线性关系。 细胞培养 8 h时,各 IGFJ组和对照组细胞之间的 OD490值均无显著性差异 (F=0.992,P>0*5)。培养 24 h时:10 fig/mL和 100 fig/mL IGF-11组细胞的 OD49。 值均高于对照组(q=4.9262,P<0*5;q-7*839,P<0*1),100 "g/mL IGF-11组细 胞的 OD。。值也明显较 inglmL组为高(q-5.2326,P<0刀1\但 lug/mL IGFll 组和对照组、lug/inL和 10 "g/thL IGF-11组、10 hL和 100 "g/ffiL IGF-11组 之间的OD49。值无显著性差异(P>0刀5入 细胞培养 48 h时,10 "g/ffiL IGFJ组与对照组、100 "g/thL IGFll组与对照 组* 与 10 "g/ffiL IGF二组J0 "g/mL与 100ng/mLIGF二组之间的 OD们。 值差异均有显著性(仟8.4933,ZO.4883,5.538O,11.9949,P<O*1),但In 咖L 2 浙江大学硕土学位论文 中文狰要 IGF-11组和对照组之间的 OD49。值无显著性差异(P>0刀5)。 细胞培养 72 h时,对照组与 inghL、10 "g/thL、100 "g/thL IGFJ组之间, lug/niL与10ng/thL以及10ng/inL与100ng/ffiLIGFll组之间的OD4to值均有 显著性差异…叫.745413*756,3o.4548,8.9102,16.7992,P<O.01)。 上述结果提示,IGF-11能明显促进MC3T3E 细胞增殖,并具有显著的时 间-剂量依赖性。 2.IGF-11对MC3T3-EI存活的影响 培养 96 h时,镜下对照组和 lug/mL IGFll组的细胞数量较 72 h时明显减 少,部分细胞的细胞膜皱缩,细胞突起变细、变短,细胞间隙增大,部分细胞 脱落;10 "g/thL IGF-11组细胞数量无明显变化,但可见部分细胞间隙增大;100 "g/mL IGFll组细胞数仍有一定程度的增加,细胞接触更为紧密。 MTT法检测结果表明:培养96 h时,对照组J IGFll组细胞的OD490 值均明显较培养 72 h时为低(t4.2876,尸<0.of;t=2.2669,P<0刀5),10 "g/ffiL IGFll组则与培养 72 h时无明显差异(t=0.0761,P>0*5),100 "g/ttiL IGF-11组 甚至明显高于培养 72 h时的 OD49。值(po3.1686 P<0刀 1X此与形态学观察结果 相似。 上述结果提示,表明 100 "g/mL IGF
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R781.4

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