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《浙江大学》 2003年
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仔猪抗菌肽PR-39基因表达随日龄的变化及不同锌源对其表达的影响

林文学  
【摘要】: 本课题先以1、14、28、42、56日龄的仔猪为试验对象,以RT-PCR法为检测手段,研究不同日龄仔猪抗菌肽PR-39基因表达的变化规律。根据已报道的猪抗菌肽PR-39和看家基因β-肌动蛋白(β-actin)基因序列,分别设计PR-39和β-actin的引物,探讨了PCR体系中适宜的MgCl_2浓度、循环次数以及两对引物间竞争情况。试验揭示MgCl_2适宜的浓度为2.5 mmol/L,循环次数为29。根据两对引物之间的杂交配对,分别进行了扩增。构建了优化的RT-PCR法,用于仔猪抗菌肽PR-39基因mRNA表达量的测定。 试验结果发现,仔猪断奶后PR-39 mRNA表达量有较大的变化。仔猪刚出生时PR-39相对于β-actin的mRNA表达量平均为0.45,14日龄时上升为0.74,28日龄时上升为0.88,42日龄时(断奶后7天)下降为0.22,56日龄时上升到2.30。 挑选96头36日龄杜长嘉断奶仔猪,分成处理1(对照组)、处理2、处理3、处理4四个组(每个组设3个重复,每个重复8头猪,公母各半)。基础日粮相同(消化能13.25 MJ/Kg,粗蛋白18.5%), 处理1日粮中不添加任何锌源,处理2、3、4分别饲喂以硫酸锌、氧化锌和纳米氧化锌的形式添加100 mg/kg、3000 mg/kg、100 mg/kg锌的饲粮。预试期为7天,饲养正试期为15天。试验猪充分喂料(日喂四次),自由饮水。15天后按体重相近的要求,从每组各选3头,共12头,屠宰,取左腿股骨骨髓,从骨髓组织中提取总RNA,反转录成cDNA保存。采用已构建的优化RT-PCR法,适当调整循环数的参数,检测各处理组样品中PR-39相对于β-actin的mRNA表达量。 饲养试验结果表明:与对照组相比,处理3(添加3000 mg/kg Zn的ZnO组)日增重提高了36.45%(P=0.01);处理2(添加100 mg/kg Zn的ZnSO_4组)和处理4(添加100 mg/kg Zn的纳米ZnO组)分别提高了10.62%(P=0.06)和21.42%(P=0.05)。处理3料重比比对照组降低了25.74%(P<0.01),统计结 2003年浙江大学硕士学位论文 果差异极显著,处理2和4分别降低了18.57%(P0 .05)和22.79%(P0 .05)。 mRNA定量结果显示:抗菌肤PR一39 mRNA表达量与对照组相比,处理3 提高了378.26%(P0.01),效果极显著;处理2、处理4分别提高了38.4%和 23.91%,但统计结果差异不显著。 上述结果提示:(l)断奶前仔猪抗菌肤PR一39 mRNA表达量呈逐渐增加趋 势,断奶后其表达量比断奶前显著下降,表明断奶对仔猪PR一39 mRNA表达有 较大影响,断奶后仔猪免疫力下降,腹泻率、死亡率高可能与抗菌肚表达下降 有关。(2)在仔猪日粮中,以不同锌源(ZnSO4、ZnO、纳米ZnO)补充锌均能 提高PR一39 mRNA的表达量,其中高剂量Zno组(3000m叭9 zn)显著提高 了仔猪PR一39 mRNA表达。提示锌可能直接参与了抗菌肤PR-39基因表达的调 控,且高剂量ZnO组(3000m叭9 Zn)所具有明显抗腹泻效果可能与其极显著 提高断奶仔猪抗菌肤PR-39基因表达有关。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S828

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【引证文献】
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