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《浙江大学》 2003年
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草莓体外培养再生机理及遗传转化的研究

田敏  
【摘要】: 植物组织培养技术是植物体细胞遗传学的基础,对理论基础研究和植物基因工程以及农作物品种改良等都有重大的意义。离体诱导和培养愈伤组织具有多种用途。一方面可研究植物生长发育及分化的机制、遗传变异规律;另一方面可作为植物基因工程的受体材料,生产有价值的药用蛋白质。本研究建立了一套完整的草莓愈伤组织再生体系,探讨其分化的生理生化基础,以及小鼠EGF基因克隆及其植物转基因研究,主要结果如下。 一、草莓体外再生体系的建立 采用不同的植物生长调节物质(生长素和细胞分裂素)的浓度及其组合以及不同的光照条件对草莓的多种外植体,如叶片、叶柄、根段、芽尖等,进行愈伤组织的诱导,产生了3类在外形、颜色、质地、生长速率、分化能力等方面具有明显差异的愈伤组织,即松软、湿润、灰白色的Ⅰ型,颗粒状、紧实呈浅黄色的Ⅱ型和绿色致密的Ⅲ型。Ⅰ型愈伤组织生长快,但分化率低,并能在一定条件下转变为Ⅲ型。Ⅲ型具有较高的分化能力。并且通过对它们分化过程的观察发现,其形态建成的方式是直接的器官发生,而不是通过体细胞胚的发生再生植株。 同时,研究了激素、外植体、光照条件等因素对草莓体外培养的影响,发现产生的愈伤组织的形态主要与培养基中的激素种类和光照条件有关,而与外植体来源无明显相关性。 二、愈伤组织分化的生理生化基础分析 主要研究了不同类型愈伤组织及其分化过程中和继代培养中的糖类、蛋白质及活性氧和抗氧化酶活性的变化。 (1)Ⅰ型愈伤组织含有较高的可溶性糖,而Ⅱ型和Ⅲ型则具有相对较高的蔗糖含量。愈伤组织器官发生过程中,可溶性糖和蔗糖含量均呈现下降趋势。继代过程中可溶性总糖含量无明显变化,蔗糖含量在培养15周后迅速下降。三类愈伤组织蛋白质含量差异显著,Ⅱ型和Ⅲ型中的含量约是Ⅰ型中的6倍。分化过程中蛋白质含量逐渐上升,SDS-PAGE表明芽分化和根分化的愈伤组织中蛋白质合成量显著增强;继代培养中Ⅱ和Ⅲ型愈伤中蛋白质含量有平缓下降趋势,Ⅰ型愈伤组织中则下降较快。同时,在继代培养过程中,愈伤组织的形态发生能力下降,Ⅰ型愈伤组织逐渐失去再生能力。这些实验结果表明,愈伤组织的再生能力与可溶性糖的含量无关,而与蔗糖、蛋白质的含量有明显相关性。 浙大学博士学位论文 (2)三类愈伤组织在活性氧代谢方面表现出极大的差别。n和川型初生愈伤组织H刃2 的含量分别是I型的5倍和9倍,02甲的释放速率是3倍和4倍,并且具有较高的抗氧化酶 (soD,cAT、PoD)活性,特别是500的活性,在初生n型愈伤组织是高达990 u n-lg一1 Fw,而在I型中只有36 uh一19一1 Fw。在愈伤组织分化过程中,HZoZ的水平先升高后下降, O:甲释放速率一直下降,SOD活性的变化趋势同HZq一致,CAT活性一直下降而PoD先 降后升。培养基中添加外源HZO:能在一定程度上提高愈伤组织的再生率,而SOD的抑制剂 DDC则使再生率下降。 另外,在18周的继代培养中,也观察到所有类型愈伤组织中HZO:含量缓慢上升,q一 释放速率较快增长,尤其是在I型中,培养18周后其速率已明显高于n型和川型.同步检 测抗氧化酶活性,发现其活性呈现降低趋势,特别是I型愈伤组织在培养12周时已测不到 SOD的活性。这说明内源HZOZ在愈伤组织的分化中起着重要作用,并且一定水平的外源 H202能促进植物细胞的再分化。并推测,继代培养中活性氧与抗氧化酶之间的不平衡所造 成的氧化胁迫对细胞正常的代谢、生长和发育产生破坏性的影响,与其分化能力的降低存在 着直接的相关性。 综上所述,对于草毒愈伤组织的再生,活性氧可能起着双重作用。一方面,一定浓度的 活性氧对愈伤组织的再生起促进作用,甚至是启动再生过程所必须的:另一方面,培养中高 水平的活性氧可能又会对细胞造成氧化胁迫,从而抑制愈伤组织的再生潜能。 三、小鼠EGF基因克隆及其植物转基因研究 从小鼠肾组织中提取总RNA,用君G尸基因的下游引物将其反转录为cDNA第一链,利 用RT一PcR的方法克隆到长约1 7obP的编码成熟EGF蛋白质的基因序列,并将其构建到克 隆载体pUC18中,序列分析表明所得到的片段与文献报道的小鼠百G尸基因序列完全一致。 构建了百G尸基因的植物表达载体:pCAMBIA一EGF和pBI 121一EGF。通过农杆菌转化法得到 了转基因烟草再生植株,转基因草毒的研究仍在进行中。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S668.4

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵忠良,路凡,陈南春,柴玉波,陈苏民;人表皮生长因子在大肠杆菌中的融合表达与活性分析[J];第四军医大学学报;1997年05期
2 王明国;表皮生长因子受体[J];国外医学(分子生物学分册);2002年02期
3 黄秉仁;表皮生长因子应用简介[J];基础医学与临床;1991年01期
4 赵密珍,余桂红,钱亚明,吴伟民,李小刚;我国草莓新品种选育进展[J];江苏农业科学;2002年06期
5 范青源,戴方平,谢 毅,应 康,林 卿,陈玉林;人表皮生长因子基因的克隆及其真核表达载体的构建[J];军事医学科学院院刊;1999年03期
6 崔凯荣,任红旭,邢更妹,王亚馥;枸杞组织培养中抗氧化酶活性与体细胞胚发生相关性的研究[J];兰州大学学报;1998年03期
7 沈革志,张建军,殷丽青,王新其,陈全庆,范昆华;根癌农杆菌介导Ds转座因子的水稻遗传转化[J];上海农业学报;1998年04期
8 屈姝存,刘选明,周朴华,卢向阳,罗泽民;百合鳞片细胞形态发生中生理生化特性研究[J];生命科学研究;1998年04期
9 范思哲;草莓 水果皇后[J];食品与生活;2002年02期
10 黄秉仁,蔡良琬,廖洪涛,唐申秀,周海涛;人工合成表皮生长因子基因在甲基营养型酵母中的高效表达[J];中国生物化学与分子生物学报;1998年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 魏秀俭;玉米自交系耐旱性的模糊隶属函数法分析[J];山东农业科学;2005年02期
2 刘香玲,王玉珍,罗景兰;水稻成熟胚愈伤组织的诱导和分化因素的研究[J];山东农业科学;2005年05期
3 孙立茹;刘月学;孟楠;杜安楠;李贺;张志宏;;野生草莓EMC离体快繁和叶片再生的研究[J];山东农业科学;2009年04期
4 王志勇;;外源NO对高温强光胁迫下小麦叶片光合机构的保护作用[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年05期
5 方志红;董宽虎;;Na_2SO_4胁迫对碱蒿叶绿素、甜菜红素和O_2~-产生速率的影响[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年09期
6 朱世东,斐孝伯,张志伟;香椿种子衰老机理[J];安徽农业科学;1999年01期
7 向太和,倪大虎,张盘娣,吴家道,杨剑波,贾士荣;抗菌肽Shiva A基因导入杂交水稻恢复系明恢63的初步研究[J];安徽农业科学;1999年06期
8 高丽萍,夏涛,张鹤英;钙对猕猴桃果肉切片衰老的延缓作用[J];安徽农业科学;2000年06期
9 李晓兵,吴爽;稻瘟病抗性的生理生化机制[J];安徽农业科学;2002年04期
10 傅晓艺,刘桂茹,杨学举;植物病害中的信号传导[J];安徽农业科学;2005年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 郭勇;张西正;魏严;张永红;;新生大鼠心肌细胞的体外培养和工程化心肌组织的初步构建[A];第八届全国生物力学学术会议论文集[C];2006年
2 马慧;赵开军;徐正进;;含芥菜几丁质酶基因的双元表达载体的构建[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
3 刘建新;;外源一氧化氮供体SNP对盐胁迫下多年生黑麦草幼苗根生长抑制和氧化损伤的缓解效应[A];第十届中国科协年会论文集(三)[C];2008年
4 夏宜平;高晓辰;;试论百合等球根花卉的商品种球国产化问题[A];中国花卉科技进展——第二届全国花卉科技信息交流会论文集[C];2001年
5 汪良驹;刘友良;马凯;王金中;刘小宁;;NaCl处理对无花果愈伤组织细胞过氧化系统的影响[A];中国科协第3届青年学术年会园艺学卫星会议暨中国园艺学会第2届青年学术讨论会论文集[C];1998年
6 李兆亮;原永兵;刘成连;曹宗巽;;角斑病菌对黄瓜叶片水杨酸和抗氧化剂酶系的诱导作用[A];中国科协第3届青年学术年会园艺学卫星会议暨中国园艺学会第2届青年学术讨论会论文集[C];1998年
7 曹慧;兰彦平;刘会超;王孝威;王中英;;土壤水分胁迫对短枝型苹果幼叶活性氧代谢的影响[A];中国园艺学会第四届青年学术讨论会论文集[C];2000年
8 尹淑萍;金万梅;袁维风;崔铁军;;草莓品种“丰香”和“哈尼”高频再生体系的建立及遗传转化的研究[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
9 冯立娟;付莹;侯广军;韦节华;张连忠;;草莓生物技术育种研究进展[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
10 尚爱芹;赵梁军;田颖川;;根癌农杆菌介导的粗枝大叶黄杨遗传转化影响因素研究[A];2007年中国园艺学会观赏园艺专业委员会年会论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 殷慧群;猪诱导性多潜能干细胞的建立[D];安徽农业大学;2010年
2 种培芳;荒漠植物红砂、白刺和沙拐枣抗旱指标及抗旱性综合评价研究[D];甘肃农业大学;2010年
3 任舒文;几种海洋特征寡糖—胶原蛋白复配物对紫外辐射损伤的保护作用及机制研究[D];中国海洋大学;2010年
4 田娜;农杆菌介导的猕猴桃遗传转化及AtNHX1转化植株抗盐性分析;拟南芥At4G12490基因对逆境的抗性功能研究[D];西北大学;2010年
5 王爱芳;干旱胁迫下白皮松苗木电阻抗及生理指标的比较研究[D];河北农业大学;2010年
6 姜天甲;主要食用菌采后品质劣变机理及调控技术研究[D];浙江大学;2010年
7 陆燕元;干旱胁迫及复水过程中转Cu/Zn SOD和APX基因甘薯生理生化响应机制研究[D];西北农林科技大学;2010年
8 齐力旺;华北落叶松体细胞胚胎发生与遗传转化系统建立的研究[D];中国林业科学研究院;2000年
9 易自力;外源基因转化南荻和籼稻的研究[D];湖南农业大学;2000年
10 蒋建雄;苎麻的分子育种研究[D];湖南农业大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张庆福;枳精氨酸脱羧酶基因(PtADC)转化烟草提高抗脱水研究[D];华中农业大学;2010年
2 乔芬;柑橘衰退病和碎叶病新型脱毒方法的研究[D];华中农业大学;2010年
3 王俊;林荫银莲花离体快繁体系的优化及其有效成分的研究[D];华中农业大学;2010年
4 李晓东;茶树体细胞胚发生的影响因素及超微结构和几种内含物质变化的研究[D];山东农业大学;2010年
5 刘建民;“复瓣玫瑰红”蔷薇的快繁技术研究[D];山东农业大学;2010年
6 孙彦丽;类囊体膜磷脂酰甘油不饱和度对番茄耐盐性的影响[D];山东农业大学;2010年
7 吴耀领;抗旱型与丰产型小麦品种对干旱高温胁迫的响应[D];山东农业大学;2010年
8 王秋芳;高能电子束和臭氧对巨峰葡萄贮藏品质的影响[D];山东农业大学;2010年
9 强丽;辣根过氧化物酶与一氧化氮作用机理及其在一氧化氮测定中的应用[D];山东农业大学;2010年
10 林桂玉;菊花超微弱发光及生理生化代谢的研究[D];山东农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵忠良,陈南春,李飙,陈苏民;人表皮生长因子基因化学及酶促合成与克隆[J];第四军医大学学报;1991年03期
2 崔澂,唐定台,宋艳茹,连汉平;植物形成愈伤组织的激素调节与核酸及氨基酸代谢的关系[J];中国科学(B辑 化学 生物学 农学 医学 地学);1984年10期
3 刘玉乐,王晋芳,邱并生,赵淑珍,田波;人乙肝病毒表面抗原基因在转基因烟草中的表达[J];中国科学(B辑 化学 生命科学 地学);1993年03期
4 黄秉仁;表皮生长因子应用简介[J];基础医学与临床;1991年01期
5 谭石慈,邢达;生物超微弱发光图象的观测[J];科学通报;1997年06期
6 张志宏,景士西,王关林,吴禄平,方宏筠;苹果品种新乔纳金离体再生体系的建立(简报)[J];农业生物技术学报;1997年03期
7 柴清,黄秉仁;甲醇酵母表达体系[J];生命的化学(中国生物化学会通讯);1997年04期
8 李霞,陈杭,李晓东,钟辉,曹诚,马清钧;疟疾多抗原表位基因表达载体的构建及其在烟草中的表达[J];生物工程进展;1999年04期
9 毕玉蓉,梁厚果;烟草愈伤组织分化和芽原基形成期间呼吸代谢途径的改变[J];实验生物学报;1987年02期
10 谭保才,文江祁,梁厚果;绿豆子叶切段形成愈伤组织过程中蛋白质代谢的变化(简报)[J];实验生物学报;1993年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李卫东,周春江,葛会波;草莓现代生物技术育种研究进展[J];河北农业大学学报;2000年01期
2 洪燕萍,林顺权;草莓离体培养研究进展[J];福建农业学报;1999年02期
3 杨振英,薛光荣,李玉华;草莓无病毒栽培增产效果显著[J];山西果树;1994年04期
4 焦定双;淡季水果之星——草莓[J];江西农业科技;1988年11期
5 项云田,董福运;农家女栽草莓年收百万元[J];吉林农业;1994年10期
6 李丽萍;控制草莓腐烂法[J];农村新技术;1994年07期
7 杨树本;草莓宜于秋植[J];河南农业;1994年04期
8 王瑜,岩秀丽,徐光华;日光温室草莓促成栽培[J];蔬菜;1994年05期
9 杨文斌;棉花可以套草莓[J];农家顾问;1996年10期
10 贺宇红;日本草莓市场分析[J];世界热带农业信息;1998年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 雷家军;谭昌华;邓明琴;;植物生长调节剂在草莓上的应用研究[A];草莓研究进展(三)[C];2009年
2 盛红萍;申屠年;赵成章;;草莓的组织培养和大量繁殖[A];植物组织培养与脱毒快繁技术——全国植物组培、脱毒快繁及工厂化生产技术学术研讨会论文集[C];2001年
3 杨玉红;康宗利;邹德乙;王春枝;;腐植酸复合肥对草莓增产作用的几种生理效应[A];第二届全国绿色环保肥料新技术新产品交流会会议交流文集[C];2002年
4 孙瑞芬;李天然;;草莓组培快繁及叶片诱导植株再生的研究[A];2003年内蒙古自治区自然科学学术年会优秀论文集[C];2003年
5 魏学贵;;草莓塑料大棚促成栽培优质丰产综合配套技术[A];中国园艺学会第九届学术年会论文集[C];2001年
6 孔樟良;;强化草莓食用安全 提升产业持续发展[A];“杭州市农产品质量安全与品牌建设论坛”论文集[C];2008年
7 陈满平;;我有一个绿色的畅想——献给2012年第七届世界草莓大会[A];草莓研究进展(三)[C];2009年
8 韩群营;黄明生;董方友;;草莓褐斑病的发生与防治[A];实施科技兴农战略促进农村经济发展学术交流论文集[C];2004年
9 乔勇进;王海宏;方强;;壳聚糖涂膜对草莓常温保鲜的研究[A];2008园艺学进展(第八辑)——中国园艺学会第八届青年学术讨论会暨现代园艺论坛论文集[C];2008年
10 蒋桂华;谢鸣;张慧琴;孙崇波;;“千禧”草莓新品种引种试验初报[A];浙江省园艺学会第九届年会论文集[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 潘国义;草莓住“鸟巢” 身价节节高[N];成都日报;2008年
2 李耀中 记者 潘国义;马来西亚订走50吨双流冬草莓[N];成都日报;2008年
3 本报通讯员 刘凤珍 高秀光 本报特派记者 帅勇;句容 草莓别样红[N];南京日报;2009年
4 本报记者 刘家琴 实习生 李水;全国800精品草莓昌平“打擂”[N];农民日报;2009年
5 辛丰;春季草莓如何管理[N];瓜果蔬菜报.农业信息周刊;2009年
6 ;昌平努力打造现代草莓产业基地[N];北京日报;2009年
7 李延涛;天津:红草莓“采”出甜头来[N];中国特产报;2009年
8 胡玉忠 高淑芹;春季草莓施肥技术[N];农资导报;2009年
9 赵玉龙 本报记者 刘立杉;二道岭的草莓招人稀罕[N];辽宁日报;2009年
10 YMG记者 滕新书 实习生 王嫣;烟台草莓能否再现辉煌?[N];烟台日报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 田敏;草莓体外培养再生机理及遗传转化的研究[D];浙江大学;2003年
2 王俊丽;LEA3蛋白基因对草莓的遗传转化研究[D];河北农业大学;2002年
3 吴顺;籼稻成熟胚再生体系的建立及反义waxy基因转化籼稻的研究[D];湖南农业大学;2005年
4 伍碧华;小麦离体培养的营养器官与花器官发育研究[D];四川农业大学;2003年
5 钟原;紫斑牡丹分生结节的诱导与培养[D];北京林业大学;2011年
6 宋建英;邓恩桉微体快繁技术和耐寒性的研究[D];南京林业大学;2008年
7 张学英;草莓(Fragaria ananassa Duch.)原生质体培养及植株再生研究[D];河北农业大学;2004年
8 何铁剑;菠萝组织与细胞培养及其诱导产酶研究[D];华南理工大学;1994年
9 朱向涛;凤丹体胚发生及愈伤组织诱导芽分化研究[D];中国林业科学研究院;2010年
10 陈超;红掌愈伤组织和再生团块的发育及四倍体诱导[D];南京农业大学;2011年
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1 曾球;草莓离体培养研究[D];湖南农业大学;2003年
2 张洁;草莓(Fragaria ananassa Duch.)悬浮细胞培养与植株再生的研究[D];河北农业大学;2002年
3 李燕;草莓叶柄离体培养内源激素变化与植株形态发生关系的研究[D];四川农业大学;2004年
4 高敏;草莓(Fragaria ananassa)和桃(Prunus persica)采后衰老过程中乙烯与活性氧的变化及其与钙信使关系的研究[D];西北农林科技大学;2002年
5 袁维风;草莓离体再生及根癌农杆菌介导CBF1基因遗传转化的研究[D];安徽农业大学;2004年
6 时翠平;草莓属植物细胞学研究[D];河北农业大学;2001年
7 郭英燕;草莓~(15)N吸收利用特性及氮对果实成熟生理进程的影响[D];山东农业大学;2003年
8 贺红霞;乙肝表面抗原基因植物表达载体的构建及草莓再生体系建立[D];吉林农业大学;2003年
9 张颖君;草莓属(Fragaria)植物亲缘关系的RAPD研究[D];河北农业大学;2003年
10 郑丽锦;NaCl胁迫下草莓(Fragaria ananassa Duch.)生理生化特性研究[D];河北农业大学;2003年
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