收藏本站
《浙江大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

胚胎干细胞的分离培养及定向分化研究

郭箭  
【摘要】: 自1981年首个胚胎干细胞建系以来,世界各国的科学家纷纷投身到该研究领域。1998年,美国的两个科学家小组分别从人体外受精发育而成的囊胚内细胞团和5~9周龄流产的胚胎原始生殖嵴中,成功获得了人类胚胎干细胞系和人类生殖嵴干细胞系。干细胞的发现为研究细胞分化、动物发育、建立相关研究模型、阐明基因功能等开辟了广阔的空间。本实验也在人类胚胎生殖嵴干细胞、小鼠胚胎干细胞的分离培养,以及小鼠胚胎干细胞的定向分化等方面进行了研究。 实验一是有关人类胚胎生殖嵴干细胞的分离培养。从4—8周的流产胎儿的原始生殖嵴部位分离到原始生殖细胞,经过机械和化学方法的解离后培养于事先用丝裂霉素处理过的小鼠胚胎成纤维细胞或人胚胎成纤维细胞饲养层上,培养基中添加了LIF,bFGEF,Foskolin等细胞因子,此后大约每7天左右传代一次。在实验中,几个适龄的胚胎的原代培养物中都出现了鸟巢状的EG细胞集落,维持时间最长的一个胚胎细胞株在传代培养了9代之后仍然可以观察到EG细胞集落。碱性磷酸酶(AKP)活性检测结果证实了这些细胞集落确实具有原始生殖嵴干细胞的特性。 实验二是关于小鼠胚胎干细胞的分离培养。从怀孕3.5天的小鼠子宫中取出发育至囊胚期的受精卵,培养于事先用丝裂霉素处理过的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上。囊胚一般在48小时后贴壁并脱去透明带,由囊胚中的内细胞团增殖形成一个胚胎干细胞球,待其生长至一定程度后对其进行酶解传代,在传代后的细胞中重新生成ES集落形态的细胞集落,在集落生长至一定程度后再进行传代,此后大约每5—7天传代一次。其间对此类细胞集落的AKP检测证实了其胚胎干细胞特性。本实验中的小鼠胚胎ES细胞再传至第九代后逐渐消失。 实验三首先建立了一个小鼠胚胎干细胞定向分化成心肌细胞的实验平台,然后采用了3种心肌疾病相关的药物:黄芑生脉饮、1,6二磷酸果糖和HG(代号),在此定向分化的实验平台上进行了一系列浓度的药物筛选,实验采用视黄酸和DMSO的混合诱导剂作为阳性对照。其中药物HG在适当的浓度下对胚胎干细胞定向发育成心肌细胞表现出强烈的诱导作用(43.3%)。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:Q813

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 胡新立,尚克刚;6个小鼠ES细胞系的建立和鉴定[J];北京大学学报(自然科学版);1996年02期
2 孟国良,汤富酬,滕路,尚克刚;小鼠胚胎干细胞(ES细胞)建系和维持过程中的问题及对策[J];遗传;2001年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 余树民;徐小明;华进联;窦忠英;;小鼠胚胎干细胞建系技术研究进展[J];动物学杂志;2006年01期
2 张殿君;刘一;付长峰;宿晓云;王芳;李相军;;新生大鼠脊髓源性神经干细胞的分离培养及分化鉴定[J];吉林大学学报(医学版);2009年02期
3 秦茂林,蔡文琴,姚忠祥;昆明种系小鼠胚胎干细胞的分离培养及特性鉴定[J];第三军医大学学报;2001年09期
4 时伟红,安志兴,董婉维,秦英,王碌增,王太一;由体外受精囊胚获得ICR小鼠ES细胞[J];动物医学进展;2002年04期
5 陈胜锋;王丙云;计慧琴;陈志胜;刘雪芬;;鸡胚胎干细胞的分离、培养与鉴定的初步研究[J];佛山科学技术学院学报(自然科学版);2006年04期
6 邹清雁,张宜俊,孔祥平,张淑莲,郑曲波,肖荣,罗峰;大鼠肝干细胞的分离培养[J];实用肝脏病杂志;2000年04期
7 张仁礼,李海标;胚胎干细胞向表皮样干细胞分化体外条件的研究[J];解剖学研究;2001年03期
8 王志勇,刘发央,王立虎,尚占环;ICR小鼠胚胎干细胞的分离、培养及鉴定[J];甘肃农业大学学报;2004年04期
9 蒙超衡,黎宗强,梁明振;胚胎干细胞的培养体系综述[J];广西科学;2002年04期
10 杨丽芬;王清华;韩芬霞;项智锋;张晓建;王天友;常新耀;;影响山羊类胚胎干细胞分离克隆的因素分析[J];黑龙江畜牧兽医;2007年04期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 桑润滋;韩建永;孙国杰;金东航;王志刚;李俊杰;;影响山羊胚胎干细胞分离克隆效果的因素研究[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 梁洋;蜘蛛拖丝蛋白基因Spidroin1嵌合体小鼠的研究[D];东北林业大学;2011年
2 王彤;胚胎干细胞的分离培养和诱导分化为神经细胞的实验研究[D];中国医科大学;2005年
3 李府;血管内皮生长因子促进小鼠胚胎干细胞的造血分化[D];山东大学;2004年
4 鹿群;卵母细胞激活技术与胚胎干细胞分离、培养[D];山东大学;2005年
5 刘星霞;胚胎干细胞ES-D_3诱导分化为胰岛素分泌细胞及其对糖尿病鼠降糖作用的研究[D];山东大学;2005年
6 代荣晓;神经营养因子3对神经干细胞移植治疗脑外伤保护作用的研究[D];四川大学;2005年
7 邓红;视黄酸对新生大鼠纹状体神经干细胞诱导分化作用及其机制的研究[D];第一军医大学;2005年
8 黄奔;水牛胚胎生殖样细胞分离培养及相关研究[D];广西大学;2007年
9 余树民;小鼠胚胎干细胞建系的研究[D];西北农林科技大学;2007年
10 刘岚;胚胎干细胞的分离培养与定向分化研究[D];中国农业科学院;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 任林强;神经干细胞对胶质瘤细胞趋向性的实验研究[D];泸州医学院;2011年
2 张曼玲;猪单倍体孤雌胚胎和体外受精胚胎干细胞培养的研究[D];内蒙古大学;2011年
3 程静波;早衰小鼠P1型(SAMP1)胚胎干细胞的建系研究[D];浙江理工大学;2011年
4 周振明;兔胚胎干细胞的分离与克隆[D];河北农业大学;2001年
5 华进联;源于原始生殖细胞的人、小鼠ES细胞的分离克隆[D];西北农林科技大学;2001年
6 谢松涛;人胚胎原生殖细胞的分离培养[D];第四军医大学;2002年
7 冯智;小鼠胚胎性干细胞体外培养[D];第四军医大学;2002年
8 安静;鸡胚胎干细胞的分离、培养及鉴定[D];山东农业大学;2002年
9 郝小静;鸡胚原始生殖细胞的分离与培养[D];山东农业大学;2003年
10 刘立新;猪胚胎干细胞(EG)嵌合体制作研究[D];中国农业科学院;2003年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 胡新立,尚克刚;6个小鼠ES细胞系的建立和鉴定[J];北京大学学报(自然科学版);1996年02期
2 童英,邹冀中,尚克刚;用大鼠心肌条件培养基建立来源于C57BL/6J小鼠的ES细胞系[J];北京大学学报(自然科学版);2000年04期
3 尚克刚,胡新立,李子玉,王学庆,刘爱民,孟国良,童英;饲养层对维持新建ES细胞系的影响[J];北京大学学报(自然科学版);1994年04期
4 韩嵘,柴桂萱,尚克刚;大鼠心肌条件培养基对形成小鼠ES细胞集落的影响[J];北京大学学报(自然科学版);1997年02期
5 柴桂萱,韩嵘,尚克刚;C57 BL/6J小鼠ES细胞系的建立及其特性分析[J];细胞生物学杂志;1996年03期
6 尚克刚,李子玉,吴鹤龄;建立小鼠胚胎多能干细胞系(ES细胞系)的几个主要影响因素[J];遗传学报;1992年06期
7 韩嵘,陈伟胜,童英,尚克刚,孟令国;两个可进入种系的ES细胞系的建立[J];遗传学报;1999年03期
8 童英,韩嵘,郑玉兰,苏平,尚克刚;具高效种系嵌合能力的C57BL/6J小鼠ES细胞系的建立[J];遗传学报;1999年05期
9 刘爱民,尚克刚;小鼠胚胎干细胞hprt基因的定位致变[J];遗传;1994年05期
10 冼美薇,吴白燕,胡新立,尚克刚,吴鹤龄;通过显微注射法构建ES细胞(MESPU 13)嵌合小鼠[J];遗传;1996年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 何志旭,黄绍良;干细胞研究引导新革命[J];中国处方药;2003年01期
2 郭玉山 ,赵长根;德国允许开展胚胎干细胞研究[J];全球科技经济瞭望;2002年06期
3 孙绍光;干细胞研究的新进展[J];动物医学进展;2004年02期
4 王正国;干细胞研究进展[J];中华创伤杂志;2002年08期
5 徐令,黄绍良,李树浓,周灿权,乔春平,张敏芳;人的类胚胎干细胞的分离和培养[J];中山医科大学学报;1998年01期
6 胡显文,陈昭烈,黄培堂;人胚胎干细胞的研究[J];生物技术通讯;2000年02期
7 梁华刚;给干细胞两个生命[J];中国科技信息;2003年01期
8 李天东,陈桂芳;胚胎干细胞和成体干细胞应用前景与问题的比较[J];中国现代医学杂志;2004年17期
9 黄秀榕,祁明信;干细胞研究的最新进展[J];福建中医学院学报;2002年01期
10 周雅琳;干细胞的研究进展[J];动物科学与动物医学;2002年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 崔正言;;干细胞研究的新进展与应用前景[A];山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会论文汇编[C];2001年
2 徐小明;窦忠英;华进联;葛秀国;;免疫外科法分离克隆BALB/c小鼠胚胎干细胞[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
3 秦茂林;蔡文琴;张吉强;李成仁;李巍;;雌二醇对胚胎干细胞神经定向分化诱导的影响[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年
4 印惠珺;;胚胎干细胞——人类的新希望[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
5 陆永良;姚行;戴利成;邵健忠;张铭;张念慈;郭箭;劳涛涛;项黎新;赵小立;杜英;;人和小鼠胚胎干细胞培养与体外定向诱导心肌细胞分化研究[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年
6 蒋晖;瞿东滨;金大地;鞠躬;;新型神经营养因子TAT-BDNF促进胚胎干细胞的神经元性分化[A];第一届全国脊髓损伤治疗与康复研讨会暨中国康复医学会脊柱脊髓损伤专业委员会脊髓损伤与康复学组成立会论文汇编[C];2009年
7 于洲;徐海滨;;应用胚胎干细胞实验模型体系对异硫氰酸盐发育毒性的研究[A];2010年全国药物毒理学学术会议论文集[C];2010年
8 刘平;关云谦;邹春林;张愚;陈彪;刘焯霖;;胚胎干细胞在体内外诱导分化成为多巴胺能神经的初步研究[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
9 隋婧;姜方旭;施秉银;;胚胎干细胞定向分化为胰岛祖细胞的基因表达谱分析[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
10 胡敏华;区颖蕾;李莉;郭欣政;张守全;;胚胎干细胞饲养层的优化及影响内细胞团贴壁率的探讨[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 曹淑芬;用胚胎干细胞生成骨骼[N];中国中医药报;2001年
2 本报记者 王代同;胚胎干细胞:福兮 祸兮[N];科技日报;2001年
3 倪永华;胚胎干细胞克隆之争烽烟再起[N];科技日报;2004年
4 张树庸 赵贵英;干细胞研究的突破[N];人民日报;2009年
5 记者 刘霞;英用胚胎干细胞制造出红血球[N];科技日报;2010年
6 王洋;胚胎干细胞是“人”吗?[N];医药经济报;2002年
7 孙国根;复旦大学成功提取首个大鼠胚胎干细胞[N];中国医药报;2009年
8 本报首席记者 任荃;第二颗“全能种子”会不会抢先“发芽”[N];文汇报;2009年
9 刘霞;美用胚胎干细胞制造出血小板[N];科技日报;2011年
10 本报记者 白毅;胚胎干细胞让人欢喜让人忧[N];中国医药报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 谭舟;MK和GM-CSFRα在胚胎干细胞中的表达与功能研究[D];浙江大学;2010年
2 李相运;小鼠胚胎干细胞多能性研究[D];西北农林科技大学;2001年
3 谌兵来;小鼠胚胎干细胞建系新方法及TFAG促进鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的初步研究[D];中南大学;2003年
4 苏中渊;胚胎干细胞来源的间充质干细胞归巢及胚胎干细胞表面分子的研究[D];浙江大学;2010年
5 廖宏庆;人类不同原核数目受精卵中筛选正常优质胚胎的策略研究[D];中南大学;2010年
6 白春玲;牛孤雌多倍体胚胎与克隆多倍体胚胎的研究[D];内蒙古大学;2011年
7 曲文玉;人胚胎干细胞的分离、培养及建系[D];中国医科大学;2006年
8 姚嘉宜;胚胎干细胞重新编程肿瘤细胞的研究[D];第二军医大学;2008年
9 吴旋;基因工程化胚胎干细胞用于AD治疗的基础实验研究[D];第三军医大学;2001年
10 赵惠萍;骨髓内皮细胞条件培养液诱导胚胎干细胞向造血细胞分化[D];中南大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙国杰;山羊类胚胎干细胞的分离、克隆[D];河北农业大学;2002年
2 蔡斌;体外诱导胚胎干细胞为神经细胞模型的建立及相关因子的实验研究[D];第二军医大学;2001年
3 吕一帆;胚胎干细胞在内膜损伤小鼠宫腔内移植的实验研究[D];福建医科大学;2010年
4 周文平;小鼠三种胚胎干细胞表观相关基因的分析[D];河南大学;2011年
5 姜静宜;胚胎干细胞中外源性IbeB靶蛋白的筛选及验证[D];中国医科大学;2010年
6 顾文佳;诱导胚胎干细胞向神经细胞分化的研究[D];中国医科大学;2004年
7 郭箭;胚胎干细胞的分离培养及定向分化研究[D];浙江大学;2003年
8 刘愿;小鼠球形精子受精胚胎制备及培养方法的改进[D];山东师范大学;2011年
9 秦茂林;小鼠胚胎干细胞的分离、鉴定和神经定向诱导分化[D];第三军医大学;2001年
10 吕志一;小鼠2细胞胚胎基因表达谱研究[D];西北农林科技大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026