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血红素氧合酶在正常妊娠及妊高征胎盘组织中的表达及其抗损伤作用的研究

程国梅  
【摘要】: 妊娠高血压综合征(妊高征)是妊娠期特发的疾病,其主要特征是母体高血压、蛋白尿、子宫胎盘灌流不足及广泛的血管内皮损伤,严重威胁母婴安全与健康,是孕产妇和围产儿死亡的主要原因之一。目前为止确切的发病机制仍然不清。研究显示妊高征存在脂质过氧化增多、胎盘局部缺氧和细胞因子分泌失调等,而体内代偿功能不足。妊高征患者血中TNF-α的浓度较正常妊娠孕妇明显升高,并且发生在临床症状出现以前。血红素氧合酶(HO)不仅能降解血红素产生一氧化碳(CO)、胆绿素和铁,还具有调节神经传递、降低血管紧张度、抑制炎症反应、抗脂质过氧化、抗血小板的聚集等作用,保护组织细胞免受损伤。本文探讨HO的两种同功酶诱导型(HO-1)和组织型(HO-2)在正常妊娠和妊高征孕妇胎盘组织中的表达和活性;以及HO对TNF-α导致的胎盘组织损伤的保护作用,初步确定HO与妊高征发病的相互关系。 第一部分 HO在正常妊娠早孕绒毛和晚孕胎盘中的表达及组织定位 方法:选择正常妊娠早孕组和晚孕组孕妇各20例,采用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测绒毛和胎盘组织中HO-1mRNA及HO-2mRNA的表达;并采用免疫组化方法进行蛋白定位和半定量分析。 结果:正常妊娠胎盘组织中HO-1mRNA表达弱,早孕组的表达水平为0.31± 浙江大学博士生毕业论文 0.19,与晚孕组0.28士0.14相比差异无显著性(尸0.05);而HO一Zn1RNA的表达强, 其在晚孕组的表达水平为1.12士0.58,明显高于早孕组0.70士0.48(尸0.05)。免疫 组化显示HO一1主要位于绒毛间质细胞和胎盘滋养细胞,其在胎盘细胞中的表达早 孕组与晚孕组间差异均无显著性(P0.05)。HO一2主要定位于胎盘滋养细胞及血管 内皮细胞,绒毛间质染色较弱;其在血管内皮细胞中的表达晚孕组明显高于早孕组 (P0.05):而在胎盘滋养细胞及间质细胞中的表达,两组间差异无显著性(P0.05)。 第二部分妊娠高血压综合征患者胎盘组织中HO的表达及酶活性分析 方法:采用Rl,一PCR和免疫印迹法对30例妊高征患者(妊高征组)及30例正 常晚孕妇女(对照组)胎盘组织中的HO一1和HO一2基因和蛋白进行定性及半定量 分析:以胆红素生成量作为HO活性的指标,采用双波长分光光度法测定两组胎盘 组织中的HO活性。 结果:(1)对照组HO一l及HO一2 mRNA的相对表达量为0.46士0.30和0.87士 0.28;妊高征组分别为0.34士0.18和0.88士0.57,两组间差异无显著性。(2)对照组 HO一1及HO一2蛋白相对表达量分别为0.70士0.42和0.83士0.41,二者相比差异无显 著性。妊高征组HO一1蛋白的表达量为0.60士0.41,与对照组相比差异无显著性: 妊高征组HO一2蛋白的表达量0.59士0.25,较对照组明显降低,差异有显著性 (P0,01)。其中,轻度妊高征的表达量为0.43士0.23与对照组间差异无显著性; 而中、重度妊高征分别为0.52士0.21和0.52士0.23,有显著性差异。(3)妊高征组HO 的活性为0.30士0.24 nlnol/mg’h,与对照组0.50士0.28 nrn0Fmg.h相比,差异有显 著性(尸0.01);HO活性与HO一2蛋白表达结果相一致。 第三部分HO对肿瘤坏死因子一Q诱导的胎盘组织损伤的保护作用的研究 方法:采用胎盘组织块培养(n二6)的方法,以乳酸脱氢酶(LDH)释放至培 养基质中的量作为毒性指数,免疫印迹分析了解HO的诱导表达对肿瘤坏死因子- Q(TNFa)引起的胎盘组织细胞损伤的保护效应。共分为7组即(l)对照组,加入 浙江大学博士生毕业论文 oMEM液;(2)Hemin组,加入5协M Hemin;(3)TNFa组,加入TNFa,终浓度 为50ng/ml;(4)Hemin+TNFa组,在绒毛组织块与5 p M Hemin培养Zhr后加入 mF a 50ng/ml;(5)snPp组,加入20 p M SnPp;(6)SnPp+TNFa,在绒毛组织块 与20 p M Snpp培养Zhr后加入TNF a song/ml:(7)SnPp+Hemin+TNFa,SnPP 培养lhr后加入Hemin,Zhr后再加入TNF 0 50n留ml。胎盘组织块在上述条件下培 养过夜14一16hr。 结果:(l)组织块加入TNF。细胞毒指数明显增加(尸0 .05),加入TNF Q Zhr 前先加入血红素共培养细胞毒指数明显降低(尸0.05),单独血红素和SnPP对细胞 毒指数无明显影响(PO.05)。在SnPP存在时,血红素对TNFa导致的损伤的保护 作用被完全阻断,其细胞毒指数与TNFQ组间差异无显著性(P0.OS)。(2)免疫 印迹分析显示,在TNFa存在时,加入血红素引起HO一1的表达上调:相反与对照 组和血红素组相比,TNFa本身导致HO一1的表达下调。HO一2的表达无明显变化。 结论: 1正常妊娠胎盘中HO一1 mRNA的表达弱于HO一ZmRNA。HO一1的转录水平 孕期无明显变化,而HO一2随孕周增加转录增强。 2 HO一1和HO一2在胎盘组织中的定位不同,它们共同参与了胎盘血管的发育 和功能的调控。 3妊高征孕妇胎盘组织中HO的转录水平无明显变化,但HO一2蛋白翻译受 阻,HO总的活性下降。HO可能在妊高征胎盘灌注不足及胎盘组织损伤的病理生理 中起重要作用。 4酶活性水平与HO一2蛋白的表达水平相一致,而与HO一1?


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