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《浙江大学》 2004年
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三氧化二砷诱导骨髓瘤细胞株凋亡及其机制的研究

梁赟  
【摘要】: 背景 多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是B淋巴细胞的恶性肿瘤,发病率居血液系统恶性肿瘤第二位。虽然大剂量化疗联合自体干细胞移植较传统化疗有更好的治疗效果,但是鲜有患者能够达到持续的长期缓解,浆细胞凋亡受阻在其发病及对化疗药物耐药机制中起了决定性作用。三氧化二砷(As_2O_3)已成功地用于急性早幼粒细胞白血病(APL)的治疗,越来越多的证据表明砷剂的抗肿瘤作用并不仅限于白血病,As_2O_3治疗各类恶性肿瘤已成为近几年肿瘤研究的热点。砷剂治疗APL的机制主要是诱导分化和促进白血病细胞凋亡,但这不能完全解释它对其它肿瘤细胞的作用,其具体机制有待进一步的阐明。核因子κB(nuclear factor-κ 「浙江大学医学院硕士学位论文J B,NF一KB)包括一个转录因子家族,参与炎症反应、免疫应答、细胞增殖分化及 细胞凋亡的转录调控,NF一B活性的失调能引起包括肿瘤和炎症在内的多种人类 疾病。多种实体瘤细胞中都可观察到有NF一B的持续激活,在人骨髓瘤细胞株和 骨髓瘤患者骨髓单个核细胞中也发现有NF一B活性异常升高,以抗凋亡及维持细 胞增殖。本研究观察As203对MM细胞株KM3、RpM工8226细胞的作用,探讨砷剂细 胞毒作用机制。 材料和方法 人骨髓瘤细胞株KM3和RPM工8226由浙江大学医学院血液病研究所提供。实验 设定细胞培养中加入不同浓度的AsZO3为实验组,细胞培养中不加ASZO3为空白对 照组,不加As203和特异性一抗为阴性对照组。根据预实验结果及文献报道,设定 实验中AsZO3的浓度梯度为O,0.5,1,2,5,10和20 umol/1,检测时间点选择在 培养后24小时。 通过绘制生长曲线观察砷剂在体外对KM3和RPM工8226细胞的增殖抑制作用, 以MTT法测定不同浓度砷剂对细胞的抑制率并求得其24小时的半数抑制浓度 (IC5o)。用流式细胞术(flow eytometry,FCM)测定砷剂对细胞的诱导凋亡作用 及细胞周期分析,同时测定细胞浆内工KB一a蛋白的变化。用间接免疫荧光法进一 步观察砷剂作用前后工KB一蛋白改变及定位,并用Western印记法检测两种细胞 胞核内P65蛋白的表达。 结果 研究结果表明AsZ飞对2种人骨髓瘤细胞株KM3和RPM工8226均有增殖抑制作 用,并且都呈剂量依赖性,KM3和即M工8226的24小时的半数生长抑制浓度IC50 值分别为9.61 umol/1及8.01 umol/l。FCM结果表明0.5~20 umol/1的AsZO3作 用24小时后上述2种细胞株凋亡率均有不同程度的增高,砷剂浓度在10 umOI/1时 己出现明显的凋亡,浓度增至20 umol/1时KM3和RPM18226的凋亡率分别达到了 r浙江大学医学院硕士学位论文J 41.ISryo和65.25%。砷剂作用KM3后分析细胞周期变化,GZ/M期细胞比例由13.74% 升至41.72%,S期细胞比例则由35.H%降至23.96%。 FCM间接荧光法结果表明AsZO3作用骨髓瘤细胞后胞浆中1 KB一a蛋白阳性表 达率明显减少,KM3由对照组的76.68士3.71%减少到10 umol/1时的51.57士4.20 %(尸(0.01),RPMI8226由对照组的79.72士3.56%减少到10 umol/1时的 34. 08士3.70%(P0.01),且此降解作用呈剂量依赖性。用间接免疫荧光法观察空 白对照组的骨髓瘤细胞,细胞内工KB一a在荧光显微镜下呈现明亮的黄绿色荧光, 多呈环状分布于整个胞浆中,10 umol/1的As203诱导细胞后,胞浆中荧光强度明 显减弱。Western印迹法显示2种细胞均有NF一KB的持续活性表达,AS203作用 后呈剂量相关性蛋白表达降低。 结 论 AS203对人骨髓瘤细胞株KM3和RPM工8226均有增殖抑制和诱导凋亡作用,且 在本实验浓度范围内呈剂量依赖性。其机制和抑制骨髓瘤细胞NF一KB活性、下调 NF一B基因产物表达有关。砷剂同时影响细胞周期,使GZ/M期转换延长从而抑制 细胞增殖。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R733.3

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 张和君;郭仁;;三例人骨髓瘤细胞株的建立[J];细胞生物学杂志;1988年02期
2 陈玉宝,傅卫军,侯健,丁思奇,王东星,袁振刚,孔宪涛;三氧化二砷对骨髓瘤细胞周期及其调节蛋白表达的影响[J];中华血液学杂志;2003年04期
3 肖冬梅,孙关林,邬维礼,苏卉,李佳,戴勤勇,陈竺,王振义;As_2O_3诱导K562细胞凋亡过程中酪氨酸蛋白激酶活性的变化[J];中华血液学杂志;1998年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 单保恩,郭兰涛,董青,马洪;Syk对三氧化二砷诱导脑瘤细胞周期阻滞的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年06期
2 苏卉,孙关林,赖忠彬,邬维礼,肖冬梅,熊树民;氧化砷对K526细胞增殖和凋亡的作用及其机制的初步研究[J];白血病;2000年05期
3 张旗,宋振岚;三氧化二砷联合化疗治疗难治性多发性骨髓瘤21例[J];白血病.淋巴瘤;2005年03期
4 陈智超;李秋柏;吕建;邵菁;游泳;仲照东;黎纬明;邹萍;;三氧化二砷联合甲磺酸伊马替尼、咖啡因对K562白血病细胞的协同作用[J];白血病.淋巴瘤;2007年03期
5 许晓军,郭子文,何慧清,林淑华,任志娟,古涛华,邱大发;包含三氧化二砷方案治疗多发性骨髓瘤疗效分析[J];国际医药卫生导报;2005年18期
6 李霞;砷剂抗癌作用机制研究进展[J];国外医学.输血及血液学分册;2002年02期
7 孟秋,王京华,凌丽,张志南,邹淑华;亚砷酸隔日静注治疗急性早幼粒细胞白血病[J];航空航天医药;2004年04期
8 周秀杰;周郁鸿;;三氧化二砷(As_2O_3)治疗多发性骨髓瘤机理的研究进展[J];中医学报;2010年06期
9 傅爱林;沈文香;罗青松;;三氧化二砷联合沙利度胺加地塞米松治疗难治性、复发性多发性骨髓瘤19例疗效分析[J];湖南中医药大学学报;2010年10期
10 马洪兵;邓承祺;;三氧化二砷治疗多发性骨髓瘤作用机制研究进展[J];华西医学;2006年04期
中国博士学位论文全文数据库 前8条
1 徐世文;三氧化二砷抗鸡MD肿瘤效应及其机理的研究[D];东北农业大学;2001年
2 孟建波;多发性骨髓瘤中血管新生及血管内皮细胞生长因子表达和三氧化二砷的抗血管新生作用[D];河北医科大学;2004年
3 李海燕;祛毒化瘀法治疗慢性粒细胞白血病的临床与实验研究[D];广州中医药大学;2005年
4 许民;法尼基转移酶抑制剂靶向治疗髓系白血病的作用及机制研究[D];山西医科大学;2006年
5 王述民;三氧化二砷诱导肺癌A549细胞凋亡及其机制的实验研究[D];第四军医大学;2000年
6 高力;人脐血源基质细胞对骨髓瘤KM3细胞增殖和凋亡的影响及机制探讨[D];第三军医大学;2009年
7 邵晓雁;As_2O_3对U266细胞DKK-1表达、hFOB1.19细胞分化的影响及MM患者DKK-1水平与临床关系的研究[D];南京中医药大学;2010年
8 于立博;新疆鹰嘴豆中金属硫蛋白对铅毒性作用的干预研究[D];新疆医科大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张亚楠;Trolox增强三氧化二砷对HL-60细胞毒性作用的研究[D];西北师范大学;2010年
2 许飞;多发性骨髓瘤预后因素的临床研究[D];宁夏医科大学;2011年
3 聂林;三氧化二砷对恶性淋巴瘤细胞凋亡的研究[D];暨南大学;2000年
4 支雅军;木黄酮、三氧化二砷单独及联合应用对慢性粒细胞白血病细胞增殖的实验与临床研究[D];苏州大学;2001年
5 张波;多发性骨髓瘤细胞系CZ-1的建立和骨髓瘤细胞免疫球蛋白重链基因可变区的研究[D];第二军医大学;2002年
6 臧运华;灌胃“益气养阴方”大鼠的血清诱导白血病K562细胞凋亡的实验研究[D];山东中医药大学;2003年
7 李金龙;三氧化二砷及STI571诱导K562细胞凋亡过程中caspase-3, Bcl-X_L蛋白水平的变化[D];郑州大学;2003年
8 高大;抗白灵抗白血病作用的研究[D];大连医科大学;2003年
9 赵雍;朱砂、雄黄与安宫牛黄丸脑缺血损伤保护作用的相关性考察[D];北京中医药大学;2003年
10 李宗锋;三氧化二砷联合顺铂抗人骨肉瘤细胞株MG-63的试验研究[D];河北医科大学;2005年
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2 曲士强;ABCG2在人多发性骨髓瘤细胞株中的表达及甲基化调控的研究[D];苏州大学;2009年
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