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《浙江大学》 2004年
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杭白菊总黄酮的血管作用及其机制的研究

金红峰  
【摘要】: 背景 高血压和冠状动脉粥样硬化性心脏病是现代人群的多发病,它们病因复杂,治疗周期长。血管平滑肌细胞在高血压与冠状动脉粥样硬化性心脏病的病理变化中扮演着十分重要的角色。血管平滑肌细胞的过度增殖是高血压和动脉粥样硬化的主要环节之一。也是经皮冠状动脉腔内血管成形术后再狭窄发生的关键因素。另一方面,血管平滑肌的持续收缩可能是高血压患者病程进展、继而发生并发症的重要影响因素。因此,如何利用药物有效地控制血压、抑制血管平滑肌的增殖成为近年来心血管领域研究的热点。 杭白菊(Dendranthema morifolium (Ramat.) Tzvel.)又称甘菊,是我国传统的栽培药用植物和浙江省八大名药材“浙八味”之一。药物分析表明,杭白菊内含菊甙、嘌呤、氨基酸、黄酮类及多种维生素和微量元素。经现代中医药理学证明,杭白菊有清热、平肝、明目功能。根据报道,菊花对冠心病和高血压有治疗作用,对在体心脏有明显的扩张冠脉、增加冠脉流量、提高心肌耗氧量的作用,并减慢心率,影响心肌收缩力。本实 浙江大学硕士学位论文 验室以前的研究表明,杭白菊提取物可以增加大鼠心脏的收缩力和冠脉流量,并且能对 抗由缺血/复灌引起的心脏收缩力卜降和冠脉流量的下降。近年来发现,黄酮类化合物对 心脑缺血损伤、肝损伤、心律失常等具有保护作用。我们推测,杭白菊中的黄酮类化合 物可能对血管平滑肌细胞也具有相似的保护作用。因此,本研究在浙江大学药学院采用 新工艺制备的基础上,在大鼠离体主动脉灌流模型上对杭白菊总黄酮【total navones rrom由n价an动em。mor如zium(R amat.)几vel.e二枷娜u,FDM]的血管作用及其机制进 行了探讨,在体外培养血管平滑肌细胞模型上观察了FDM对血管平滑肌细胞增殖的影 响,以较全面的了解FDM的血管效应,为进一步研究以血管为靶点的中药成分(包括 杭白菊)作用机制以及可能的临床应用打下基础。 目的 在大鼠离体主动脉灌流模型研究杭白菊总黄酮(FDM)对血管的舒张作用并探讨其 机制。 研究杭白菊总黄酮对血管平滑肌细胞增殖的作用,观察杭自菊总黄酮对胰岛素诱导 的大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖的影响 方法 大鼠主动脉灌流实验 大鼠断头处死后,迅速取出胸主动脉,小心去除附在胸主动脉外的脂肪及结缔组织, 剪成约3~长的血管环。在部分实验中,用小镊子轻轻摩擦血管内壁以破坏血管内皮。 将血管环悬挂在含有10ml的K一H液浴槽中,温度37oc,持续通入95%02巧%co:的 混合气体。记录血管环张力变化。 浙江大学硕士学位论文 2平滑肌细胞原代和传代培养 1)原代培养 大鼠颈椎脱臼致死,固定于鼠板(用大头针),分离胸腹主动脉并放入盛有Hax水,s 液的细胞培养皿中,转入无菌室;去除血凝块和血管外膜层,放入另一盛有Hallk,S液 的细胞培养皿中,剪去血管外的小分支,放入含10%胎牛血清的DMEM中,以去除血 管内皮,入另一含10%胎牛血清的DMEM中,剪碎血管组织至1 xl~,组织块转入 玻璃培养瓶中,均匀贴壁,6天左右换液。 2)传代培养 细胞长至融合后,加0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA消化液消化细胞,用吸管反复 抽吸打散细胞,离心:1500 xs分钟,加D一Hank’s液洗一次,再加10ml DMEM培养液, 用吸管抽吸吹打分散细胞,分装于2个培养瓶。在倒置显微镜下可见圆形细胞。放入细 胞培养箱中培养。 3噬哇蓝(MTT)比色法测定细胞增殖 取原代培养的5一6代的血管平滑肌细胞,接种于%孔培养板内,培养24小时, 改成无血清培养基培养24小时。测量前4小时每孔加入5 mg/ml的嘎哇蓝 (3一(4,5一dimethylthiazol一2一yl)2,5一diPhenyltetrazolium bromide,MTT)15林l,4小时后,吸 取培养液,每孔加入DMSOloo川,摇匀10分钟。用酶标仪在波长57onm的波长下, 钡l吸光度。 结果 、FDM对PE预收缩的主动脉环张力的影响 浙江大学硕士学位论文 当PE引起大鼠胸主动脉环的收缩达最大幅度后,累积性增加FDM的浓度(sxlo一,一 5x10一,g/L),发现FDM对内皮完整和去内皮的血管环均有舒张作用,且呈浓度依赖性。 2、FDM对KCI预收缩的主动脉环张力的影响 当KCI(6 x 10一Zmol/L)引起大鼠胸主动脉环的收缩达最大幅度后,累积性增加FDM 的浓度(5 xlo一,一5 x 10一,留L),发现FDM对内皮完整和去内皮的血管环均有舒张作用, 且呈浓度依赖性。 3、FDM对CaCI:量效曲线的影响 在无钙K一H溶液中,随着eael:的浓度(2.sxlo一4molzL一sxlo一,molzL)增加,预先 用Kcl(6xlo一Zmol/L)去极化的血管环呈浓度依赖性收缩。而用FDM(5欠10一“g/L)预 处理lomin,可使caCI:量效曲线下移,最大反应降低。 4、FDM对PE在无caZ+液中的收缩幅度的影响 在无c犷+溶液中,PE(10一“mol/L)可以诱导血管环的短暂收缩。FDM(5义10一29几) 预处理10 min,可以明显降低PE诱导的血管环的收缩幅度,FDM处理组PE引起的血 管收缩幅度的比值明显低于对照组(P0.01)。 5、咖啡因对FDM释放内钙的影响 在无c扩+溶液中,咖啡因(2x10一,mol/L)可以诱导血管环的短暂收缩。FDM(5火10一2 g/L)预处
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R285

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