收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

骨髓间充质干细胞体外向表皮样上皮细胞分化可能性的探索

赖平平  
【摘要】: 皮肤移植是治疗深度烧伤和其他皮肤缺损的关键手段。现在皮肤移植所需的皮源主要有自体皮、同种异体皮、异种皮及人工皮。自体皮来源于患者自身,移植后无排异反应,可永久成活,是最理想的皮肤移植材料。但对大面积烧伤患者来说,自体皮常常不足。另外对于其他需植皮的病人来说,供皮区的疼痛和瘢痕也是难于接受。异体(种)皮体因其免疫原性只能用作创面的临时覆盖物,而且携带病毒传播疾病的可能性使得应用越来越谨慎。人工皮肤研究很早,一直徘徊在临时覆盖物的阶段。近几年组织工程的兴起又激发了人们的研究兴趣,尤其是干细胞的发现和分子生物学的进步,使得皮肤组织工程种子细胞的问题有了解决希望。干细胞领域中位于中游能够比较方便得到的骨髓间充质干细胞(MSCs)又特别引人注目。 MSCs是一种具有多向分化潜能的细胞,在特定的条件下可向成骨细胞、成软骨细胞、肌腱、脂肪细胞、骨髓基质细胞、血管内皮细胞及神经细胞样细胞分化。间充质干细胞存在于多种组织中,如骨髓、骨膜、胸腺、皮肤、脂肪和肌肉等。其中,骨髓MSC易于分离纯化,在体外具有极强的增殖能力,抽去少量的骨髓即可满足细胞治疗的需要,是目前组织工程和创伤愈合研究中常用的细胞。自20世纪70年代中期Friendenstein等建立了骨髓MSC分离培养方法以来,人们对MSC 浙江大学硕士研究生学位论文 的特征和多向分化性进行了深入的研究。人骨髓MSC的分离方法有多种,如梯度 离心后根据MSC的贴壁性进行纯化、利用细胞的表面标志进行负性富集和正性富 集以及比较先进快速的免疫磁珠法等。目前普遍采用的培养方法是对 Fri edenstein建立的方法的改进。培养体系中加入多种生长因子如血小板源性生 长因子(PDGF)和表皮生长因子(EGF)等,获得的细胞似乎有更强的分化能力。 近年来的研究表明成人骨髓细胞还能在体内分化为其他多种组织中成熟的非造血 细胞,如肝、肾、肺、皮肤、胃肠道的上皮细胞,心脏和骨骼肌的肌细胞。 虽然目前有较多关于MSC多向分化性的研究,但多数研究是在动物体内和人 体内的实验,对于MSC的体外分化的研究也主要集中在向骨、软骨、脂肪和神经 细胞的分化,而对向上皮细胞分化的研究未见报道。本研究根据MSC具有多向分 化的潜能及己在体内证明MSC能向各种组织的上皮细胞分化的报道,来探索MSC 在体外向表皮样上皮细胞分化的可能性 研究目的 体外分离、培养、扩增人骨髓间充质干细胞,用特殊的诱导培养基培养后, 检测其是否表达表皮样上皮细胞标记物,探索骨髓间充质干细胞在体外向表皮 样上皮细胞分化的可能性,为今后的研究奠定基础。 材料和方法 取浙江大学医学院附属第一医院和第二医院检查无造血系统恶性疾病的成 人骨髓标本共n例。按改良的Fri endenstein建立的方法,分离骨髓标本,取 单个核细胞培养传代。待细胞增殖至3.6x1)(12个75Cm2的塑料培养瓶), 分三组(M‘,、Ml、M:组)每组各4瓶,分别用三种不同的培养基(M(。、M,、M:)培养。 M‘,组用常规培养基培养,即L一DMEM+10%FBS+100U/ml青链霉素双抗(简称M。); Ml组在常规培养基基础上添加20ng/m1EGF、loug/mllnsuzin、sug/ml RetinoiC Aeid、16.65ug/ml Cae12(简称MJ);MZ组在M,组培养基的基础上添加Zong/ml FGFs(简称MZ)。各组中,部分细胞用75 Cm,的塑料培养瓶培养,部分接种于 浙江大学硕士研究生学位论文 培养皿中的玻璃片上培养。待细胞增殖至90%以上汇合时,用消化液 (0 .25%TryPsin:0 .02%EDTA=l:3)消化收集每组细胞,行流式细胞分析检测上 皮细胞标记物P63、广谱细胞角蛋白(Pan一eytokeratin,pan一CK)、细胞角蛋白 19(Cytokeratin19,CK19)和上皮特异性抗原(Epithelia Speeifie Antigen,ESA) 的表达情况。玻璃片上的细胞用来做免疫组化,检测上述四种标记物。 结果 一MSCS的分离培养和扩增 Percoll分离液(l .073g/ml)分离得到的单个核细胞24小时后贴壁,细胞呈 圆形,48一72小时后呈纺锤形、梭形、多角形,增殖缓慢,原代培养约14一20天 左右可达到80一90%融合。传代细胞24小时内完全贴壁,1:2传代时,4一5天达 到90%以上汇合:1:3传代时,5一7天内达到90%汇合。 二.上皮细胞标记物的免疫组化结果 ESA Pan一CK CK19 P63 M。组:阴性阴性阴性阴性 MI组:弱阳性阴性阳性阳性 M:组:阳性弱阳性阳性强阳性 三.上皮细胞标记物的流式分析结果 ESA,Pan一CK,CK19和P63的阳性表达率(%) ESA Pan一CK CK19 P63 M(,组9 .74 10.74 4.99 5.89 M.组7 .43 1 1 .14 9.01 15.52 M,组12.10 12.83 9.68 8.28 结论: 1.MSC在特殊的培养条件下有向表皮样上皮细胞分化的可能性。 2.P63可作为上皮祖细胞和表皮细胞的标记物。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 贾本让,张钦,孙正义,吴萌;骨髓间充质干细胞体外定向软骨细胞分化的研究[J];实用骨科杂志;2004年05期
2 韩永生,褚俊,翟志敏;骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的研究进展[J];国外医学.内科学分册;2004年11期
3 艾国平,粟永萍,程天民;骨髓间充质干细胞的应用研究进展[J];中华创伤杂志;2002年09期
4 秦宏敏,李强,马怀忠,胥毅,龚维成;骨髓间充质干细胞实验室分离的方法[J];中国临床康复;2005年06期
5 李万同,王飏,刘晓燕;兔骨髓间充质干细胞分离方法的比较[J];中国实用美容整形外科杂志;2004年04期
6 温冠媚,李浩威,肖庆忠,陈振光,张秀明,李艳,那晓东,项鹏,李树浓;胎肝条件培养液体外诱导人骨髓间充质干细胞定向分化为造血细胞的研究[J];中国病理生理杂志;2005年01期
7 赵基栋,钱寒光,苗宗宁,祝建中;干细胞复合纳米晶羟基磷灰石胶原修复骨缺损的研究[J];实用临床医药杂志;2005年01期
8 黄定强,梁传余,王力红,刘世喜,李胜富;兔骨髓间充质干细胞诱导分化为软骨组织的实验研究[J];临床耳鼻咽喉科杂志;2005年04期
9 傅新巧,张苏明;骨髓间充质干细胞与基因治疗应用[J];卒中与神经疾病;2003年06期
10 吕昌伟,胡蕴玉,白健萍;多样本骨髓间充质干细胞分离培养方法的量化比较[J];中国临床康复;2003年11期
11 陈焱,梁平,陈耀凯,王宇明,冉崇福,陈理国;人胚胎骨髓间充质干细胞在大鼠体内分化为肝细胞的研究[J];西南国防医药;2005年01期
12 曹军,金岩,郑崇勋;猴骨髓间充质干细胞的分离及原代培养特性的研究[J];西南国防医药;2003年03期
13 许贞书,刘拥军,吕璐璐,韩之波,王彤,陈志哲,韩忠朝;小鼠骨髓间充质干细胞生物学特性和体外诱导分化[J];基础医学与临床;2005年02期
14 张培训,姜保国,何湘君,赵富强,魏光如,傅中国,张殿英,张宏波;骨髓间充质干细胞向雪旺细胞分化的体内外实验研究[J];中华手外科杂志;2004年04期
15 王汉群,姜任武,刘录山,龙剑虹,温瑞玲;骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定及生物学特性研究[J];南华大学学报(医学版);2004年04期
16 谢模英,张苏明;骨髓间充质干细胞移植与成肌分化[J];咸宁学院学报(医学版);2004年03期
17 曹丰,贾国良,牛丽丽,张鹏,焦文仓,王冬梅,李艳华,裴雪涛;移植时机对骨髓间充质干细胞修复梗死心肌的影响[J];第四军医大学学报;2005年01期
18 朱灏,许建中,周强,王序全,赵敏,秦辉,单建林;不同年龄段人骨髓间充质干细胞体外生长特点[J];中国医师杂志;2004年10期
19 廖文,刘淑红,张玉富,刘慧哲,李章华,赵永歧,范文红,夏仁云,罗永湘,范明;自体骨髓间充质干细胞促进大鼠坐骨神经缺损修复的实验研究[J];华中科技大学学报(医学版);2004年04期
20 李建勇;骨髓间充质干细胞生物学特性及在造血干细胞移植中的应用[J];江苏医药;2004年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王化文;张玉峰;;骶前间隙表皮样巨大囊肿1例[A];中西医结合肛肠病研究新进展[C];2000年
2 毛峰;;脂肪干细胞向神经元的诱导分化[A];湖北省暨武汉市病理生理学会第十四届学术年会论文汇编[C];2008年
3 王尊彦;;生长因子——划时代食用干细胞产品[A];美丽人生 和谐世界——中华医学会第七次全国医学美学与美容学术年会、中华医学会医学美学与美容学分会20周年庆典暨第三届两岸四地美容医学学术论坛论文汇编[C];2010年
4 吴齐全;周君梅;张胜利;马晓荣;高同斌;谢华;陈方;;人羊水来源干细胞向血管内皮细胞分化的实验研究[A];中华医学会第八次全国小儿外科学术会论文集[C];2010年
5 陈志胜;陈胜锋;王丙云;刘林;;小鼠孤雌胚胎干细胞建系方法与效率[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
6 刘祖梅;韩毅;杜心灵;胡燕;金满文;;成年小鼠心脏干细胞的分离、培养鉴定和离子通道特性[A];2008心血管药理学术研讨会论文汇编[C];2008年
7 余细勇;;干细胞向心肌细胞分化的表观调控研究[A];第七届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2009年
8 郭坤元;佘妙荣;牛新清;胡亮杉;贺艳杰;曲佳;邓兰;涂三芳;;白血病干细胞的同种异体免疫抵抗和调节[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
9 王国平;段亚琦;;干细胞与心肌梗死后的修复——机遇和挑战[A];中华医学会病理学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
10 李蓝;;皮肤恶性肿瘤中潜在的肿瘤干细胞[A];中华医学会第14次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 方利君;骨髓间充质干细胞转化为皮肤组织的实验研究[D];中国医科大学;2004年
2 王建伟;供体源性骨髓间充质干细胞调节非协调性异种肝脏移植免疫排斥反应的实验研究[D];浙江大学;2004年
3 张杰;骨髓间充质干细胞分化为视网膜结构及其在重度视网膜损伤中的治疗作用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
4 苏立;在体与离体心肌诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化及其机制研究[D];重庆医科大学;2004年
5 艾国平;骨髓间充质干细胞促进合并局部放射损伤创伤愈合作用的实验研究[D];第三军医大学;2001年
6 郭常安;TGF-β_1基因修饰软骨细胞和骨髓间充质干细胞构建新型组织工程软骨种子细胞[D];复旦大学;2003年
7 孙大铭;TGF-β类生长因子基因的克隆表达及在基因治疗中的应用[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
8 王宁;大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性、体外神经元方向分化及静脉移植治疗大鼠脑损伤的实验研究[D];天津医科大学;2003年
9 张德强;骨髓间充质干细胞组织工程学生物特性及其单克隆抗体制备的实验研究[D];苏州大学;2003年
10 路艳蒙;BMP12诱导骨髓间充质干细胞分化为腱细胞[D];第一军医大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赖平平;骨髓间充质干细胞体外向表皮样上皮细胞分化可能性的探索[D];浙江大学;2004年
2 杨嘉宁;小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及体外定向诱导分化为神经元样细胞[D];中国医科大学;2003年
3 刘朝阳;骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经细胞[D];中国医科大学;2003年
4 夏鲲;诱导大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞分化[D];中国医科大学;2004年
5 岑航辉;骨髓间充质干细胞的培养与鉴定[D];浙江大学;2002年
6 吕铁伟;骨髓间充质干细胞体内诱导分化为心肌细胞的实验研究[D];重庆医科大学;2003年
7 杨自权;自体骨髓间充质干细胞移植修复兔关节软骨损伤的实验研究[D];山西医科大学;2003年
8 徐洪璋;骨髓间充质干细胞的相关研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
9 李云玲;视黄酸对成人和大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的作用[D];重庆医科大学;2002年
10 李长岭;同种异体骨髓间充质干细胞移植修复新西兰白兔心肌梗死区域的研究[D];浙江大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 章静波;干细胞——生命科学的一个主攻热点[N];光明日报;2000年
2 通讯员 王其玲 记者 罗坚梅;干细胞,燃起人类绝处逢生新希望[N];杭州日报;2005年
3 本报记者 吴洁;思考干细胞——研究、临床应用与产业化[N];科技日报;2001年
4 记者  朱定;国家干细胞工程中心建设进展迟缓[N];湖南日报;2006年
5 本报记者 聂翠蓉;抓住致癌的真正元凶[N];科技日报;2006年
6 记者 毛黎;美找到获取干细胞的又一新来源[N];科技日报;2006年
7 任勇见习记者 姜凝;我国首家干细胞慈善基金会成立[N];天津日报;2007年
8 钱铮;卵巢荚膜干细胞首次被分离[N];医药经济报;2007年
9 本报记者 天明;Geron公司永失所“爱”[N];中国高新技术产业导报;2001年
10 北京和讯 张明星;干细胞——最大的生命科学概念[N];中国有色金属报;2001年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978