收藏本站
《浙江大学》 2004年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

小鼠ES细胞的定向诱导分化与建系实验研究

章淑芳  
【摘要】: 近年来,胚胎干细胞(ES cells)以其具有全能性、可操作性和可塑性等诸多优点,已经成为医学和生命科学领域研究的热点之一。研究者们试图用ES细胞建立糖尿病、老年型痴呆、帕金森氏症等遗传疾病转基因动物模型。在这些研究中,最关键的是ES细胞的来源和定向诱导分化问题。进行一系列研究必须要有足够的ES细胞,特别是建立转基因动物模型,需要10代以内的ES细胞;而用作细胞治疗研究也必须解决其他分化细胞的影响问题。 在我们的实验中,以小鼠ES—D3细胞系为对象,通过细胞培养大量增殖未分化细胞,再用两种方法进行ES细胞向神经细胞的诱导分化实验。首先从胚体(EBs)本身探讨ES细胞内部调控诱导分化的机制,用悬浮培养、悬滴培养、悬浮转悬滴培养的方法培养出不同时间的EBs,再加以RA处理,观察比较EBs对ES细胞神经分化的影响;在此基础上,用不同浓度的RA处理EBs,分析诱导剂RA对ES细胞神经分化的影响。结果表明,用10~(-6)M的RA处理悬滴培养3d转悬浮培养1d的EBs 4d,能得到较高的神经分化比例。 同时,为以后开展转基因动物模型的研究,我们还进行了小鼠ES细胞建系的部分工作。以ICR小鼠和昆明小鼠为实验对象,采用超数排卵的方法获得小鼠胚胎,培养在用丝裂霉素C处理过的ICR小鼠和昆明小鼠MEF细胞饲养层上,选取适当时间离散增殖的ICM和类ES细胞集落,分析了在小鼠ES细胞建系过程中,饲养层细胞、消化液及不同品系来源的胚胎的影响。从实验结果来看,ICR小鼠和昆明小鼠两种来源的饲养层细胞对胚胎贴壁、ICM增殖无影响,消化液作用影响明显,以0.125%trypsin+0.02%EDTA消化10~15min为宜。以上结果表明:ICR小鼠比昆明小鼠更易进行ES细胞的建系工作。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R329.2

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 尚克刚,胡新立;小鼠囊胚的不同遗传背景对形成ES细胞集落的影响[J];北京大学学报(自然科学版);1993年02期
2 尚克刚,胡新立,李子玉,王学庆,刘爱民,孟国良,童英;饲养层对维持新建ES细胞系的影响[J];北京大学学报(自然科学版);1994年04期
3 童英,刘爱民,尚克刚,刘林;兔ES样细胞系的建立及其特性分析[J];北京大学学报(自然科学版);1997年04期
4 安立龙,季维智,效梅,窦忠英;哺乳动物胚胎干细胞分离与克隆方法研究进展[J];草食家畜;2000年03期
5 窦忠英,华进联;胚胎干细胞的研究与应用[J];动物医学进展;2001年01期
6 高健刚,何维,李秀玲,丛笑倩,姚鑫;癌基因EJ-ras在小鼠胚胎干细胞(ES-5)中的表达及其对ES-5细胞一些特征的影响[J];Developmental & Reproductive Biology;1996年02期
7 孟国良,汤富酬,尚克刚,薛友纺;高效建立129/ter、C57BL/6J小鼠胚胎干细胞系的方法学探讨[J];生物工程学报;2002年06期
8 许新,严缘昌,丛笑倩;小鼠原生殖细胞体外培养及其应用研究[J];生命科学;1999年03期
9 孟国良,尚克刚;小鼠胚胎原代细胞制作方法的改进[J];生物技术;1997年02期
10 徐洁,丛笑倩,姚鑫;维生素A酸和双丁酰基环腺苷单磷酸对小鼠胚胎干细胞的诱导分化[J];实验生物学报;1991年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 常万存,窦忠英,仲跻峰,宋杰,刘文浩,张蓉;胚胎干细胞研究进展与应用价值[J];山东农业科学;1999年05期
2 李三华;曹斌云;牟玉莲;张莉;冯书堂;;BRL-CM在昆白小鼠胚胎干细胞分离培养中的应用[J];安徽农业科学;2006年13期
3 王轶敏;王新庄;李金辉;李义书;冯勋伟;;不同培养系统和传代方法对昆明白小鼠原始生殖细胞分离培养的影响[J];安徽农业科学;2008年12期
4 杨素芳;崔奎青;陈华海;韦精卫;韦兰锋;石德顺;;兔皮肤成纤维细胞的体外培养和NESTED-PCR支原体污染检测[J];安徽农业科学;2008年13期
5 刘萍;王海飞;汪劲能;陆艳凤;赵西彪;丁家桐;;Kiss-1基因在猪初情期下丘脑-垂体-卵巢轴中的定位研究[J];安徽农业科学;2008年15期
6 董社琴;李冰雯;;对节白蜡愈伤组织诱导的研究[J];安徽农业科学;2008年26期
7 王怡;管鹏飞;薛整风;成勇;;利用SRY基因鉴定山羊胎儿成纤维细胞的性别[J];安徽农业科学;2009年16期
8 毕琳;李键;王中乾;;小鼠乳腺上皮细胞体外原代培养方法研究进展[J];安徽农业科学;2010年07期
9 周德存;;人幼儿心肌细胞体外培养的实验研究[J];安徽医学;2009年01期
10 朱晓峰,张荣华,彭柯萍;益骨胶囊含药血清对体外培养成骨细胞分泌IGF-Ⅰ的影响[J];安徽中医学院学报;2003年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王治国;袁耀明;;乳腺上皮细胞体外培养的研究进展[A];第三届中国奶牛发展大会论文集[C];2008年
2 郭勇;张西正;魏严;张永红;;新生大鼠心肌细胞的体外培养和工程化心肌组织的初步构建[A];第八届全国生物力学学术会议论文集[C];2006年
3 徐小明;窦忠英;华进联;葛秀国;;免疫外科法分离克隆BALB/c小鼠胚胎干细胞[A];中国实验动物学会第六届学术年会论文集[C];2004年
4 金立方;李吉霞;包华琼;王新庄;;昆明白小鼠胚胎干细胞分离与克隆[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
5 桑润滋;韩建永;孙国杰;金东航;王志刚;李俊杰;;影响山羊胚胎干细胞分离克隆效果的因素研究[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
6 王林美;范琦;张波;叶博;赵振军;李树英;;柞蚕蛹卵巢原代细胞培养方法的研究[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(3)[C];2009年
7 赵康峰;郭宝岚;张少平;孔建;治洪;刘景兰;张月;李毅民;;脑星型胶质细胞改进培养法[A];中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会第六届全国学术会议、中国毒理学会遗传毒理专业委员会第五届全国学术会议、广东省预防医学会卫生毒理专业委员会学术会议、广东省环境诱变剂学会学术会议论文汇编[C];2008年
8 程树军;杜淑娟;邹志飞;;ESC与PHBV体外构建新型化妆品检测用皮肤的初步研究[A];2006年中国化妆品学术研讨会论文集[C];2006年
9 王春生;杜文敬;原璐;安铁洙;;绵羊高硫角蛋白启动子(B2C)表达活性研究[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2008年
10 梁洋;王春生;原璐;安铁洙;;转pK2.10-拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞系的建立[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 殷慧群;猪诱导性多潜能干细胞的建立[D];安徽农业大学;2010年
2 邵凌健;槐糖脂补料发酵及抗真菌、抗肿瘤活性的研究[D];山东大学;2010年
3 林源吉;K562及其耐药株K562/A02细胞膜蛋白与耐药机理的研究[D];浙江大学;2010年
4 杜瑞平;t10,c12-CLA对猪皮下和背最长肌脂肪沉积的差异性调控机理研究[D];内蒙古农业大学;2010年
5 李东杰;人脐带间充质干细胞促进创面愈合及体外诱导分化为表皮样细胞的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
6 袁烁;化瘀消癥杀胚法对输卵管妊娠影响的临床与实验研究[D];广州中医药大学;2011年
7 梁洋;蜘蛛拖丝蛋白基因Spidroin1嵌合体小鼠的研究[D];东北林业大学;2011年
8 江伟;VitA在缺氧缺血脑损伤中的作用及机制研究[D];重庆医科大学;2011年
9 赵丽;三种重金属单抗的制备与抗体基因序列分析及其免疫检测方法的建立[D];内蒙古农业大学;2011年
10 迟春萍;人铜锌超氧化物歧化酶在毕赤酵母中高表达及其中试工艺研究[D];吉林农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 田振华;伴与不伴脂肪细胞共培养状态下IL-6对人单核/巨噬细胞增殖和功能的影响[D];南京医科大学;2009年
2 宋晓娣;笋用竹的组织培养研究[D];中南林业科技大学;2009年
3 刘建民;“复瓣玫瑰红”蔷薇的快繁技术研究[D];山东农业大学;2010年
4 何淑玲;红芪高产配套栽培技术试验研究[D];甘肃农业大学;2010年
5 王云丹;阳和汤体外对成骨细胞的增殖作用及对破骨细胞的分化影响[D];湖南中医药大学;2010年
6 李永忠;壮骨镇痛胶囊含药和血浆对共育体系中破骨细胞活性及凋亡的影响的实验研究[D];湖南中医药大学;2010年
7 鲍腾飞;铁皮石斛组织快繁及生物反应器培养研究[D];浙江农林大学;2010年
8 郭雪阳;两种星鲽组织细胞系的建立及三丁基氧化锡对其毒性作用的研究[D];中国海洋大学;2010年
9 李文峰;大菱鲆(Scophthalmus maximus)体细胞培养及其在病毒研究中的应用[D];中国海洋大学;2010年
10 敏云馨;藏獒三种组织成纤维细胞系的构建及生物学研究[D];西北民族大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 尚克刚,胡新立;小鼠囊胚的不同遗传背景对形成ES细胞集落的影响[J];北京大学学报(自然科学版);1993年02期
2 胡新立,尚克刚;6个小鼠ES细胞系的建立和鉴定[J];北京大学学报(自然科学版);1996年02期
3 童英,邹冀中,尚克刚;用大鼠心肌条件培养基建立来源于C57BL/6J小鼠的ES细胞系[J];北京大学学报(自然科学版);2000年04期
4 尚克刚,胡新立,李子玉,王学庆,刘爱民,孟国良,童英;饲养层对维持新建ES细胞系的影响[J];北京大学学报(自然科学版);1994年04期
5 韩嵘,柴桂萱,尚克刚;大鼠心肌条件培养基对形成小鼠ES细胞集落的影响[J];北京大学学报(自然科学版);1997年02期
6 孟国良,尚克刚;小鼠胚胎原代细胞制作方法的改进[J];生物技术;1997年02期
7 陈汉源,朱季美,丛笑倩;人体肝癌细胞染色体的组型分析和G-分带研究[J];实验生物学报;1978年02期
8 丛笑倩,姚(金王玉);小鼠胚胎干细胞(ES-8501细胞)建系过程的核型及特性分析[J];实验生物学报;1987年02期
9 施渭康,丛笑倩,姚■;小鼠早期胚胎发育期间TGF-β_1免疫组织化学定位[J];实验生物学报;1990年04期
10 徐洁,丛笑倩,姚鑫;维生素A酸和双丁酰基环腺苷单磷酸对小鼠胚胎干细胞的诱导分化[J];实验生物学报;1991年04期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 秦洁,肖小珺,李碧春;胚胎干细胞的生物学特性及其应用研究[J];动物科学与动物医学;2003年01期
2 张玉兰,孙玉英,金连弘;人胚胎干细胞研究进展[J];国外医学.遗传学分册;2000年04期
3 施渭康;胚胎性干细胞定向诱导分化——新崛起的细胞工程[J];细胞生物学杂志;2000年04期
4 张怡;胚胎干细胞研究进展[J];生物医学工程学杂志;2002年02期
5 马勇江,杨学义,窦忠英;胚胎干细胞诱导分化研究进展[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2003年03期
6 王志勇,刘发央,王立虎,尚占环;ICR小鼠胚胎干细胞的分离、培养及鉴定[J];甘肃农业大学学报;2004年04期
7 ;将人的体细胞移植到牛卵中培育出人ES细胞[J];生物技术通报;1999年02期
8 杨桦,傅继梁;表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞系的生物学特性[J];第二军医大学学报;2001年04期
9 吕魏,李坚;胚胎干细胞的培养特性[J];中国计划生育学杂志;2002年02期
10 黄汉军;哺乳动物胚胎干细胞研究进展[J];甘肃农业大学学报;2003年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨桦;戴建新;傅继梁;孙树汉;;表达GFP的ES细胞株的构建及其组织嵌合特性研究[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
2 李芳菲;王亚平;;胚胎干细胞自我更新的分子机制[A];中国解剖学会第八届组织学与胚胎学专业青年研讨会论文集[C];2004年
3 何晓青;胡安斌;蔡继业;赵涛;梁志红;;小鼠ES细胞体外发育的EB表面超微结构的AFM观察[A];2003年纳米和表面科学与技术全国会议论文摘要集[C];2003年
4 孟瑛;黄绍良;闵军;郭中敏;张绪超;;定向诱导ES细胞为肝脏细胞及其凝血因子表达格局分析[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
5 程树军;李海标;;非人灵长类胚胎干细胞研究进展[A];中国实验动物学会第六届学术年会论文集[C];2004年
6 庄淑珍;董武子;窦忠英;;Nanog—维持ES细胞多能性的关键因子[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
7 黄雅娟;柏学进;李建栋;程明;;牛ntES细胞核在MetaphaseⅡ去核卵中重排及其核移植融合卵的发育[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
8 邹洪;马伟;丁澄;金玫蕾;;基因剔除小鼠制作过程中相关技术的建立[A];动物学专辑——上海市动物学会2001年年会论文集[C];2001年
9 杨晓;孙彦洵;周江;黄培堂;黄翠芬;徐晓玲;李翠玲;J.Cotay;陈林;邓初夏;;Smad5双等位基因剔除ES细胞的建立及其初步研究[A];第六届动物遗传学讨论会论文集[C];2002年
10 华进联;徐小明;杨玉艾;刘雨潇;李松;窦忠英;;人类胚胎生殖细胞的分离培养[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 毛磊;美国选定伙伴[N];新华每日电讯;2002年
2 ;江苏索普 爱建系怎么办[N];证券日报;2003年
3 特约记者 梁君健 学习记者 肖佳平;环境系庆祝建系20周年[N];新清华;2004年
4 郑丹阳;连锁要先建系统[N];中国商报;2001年
5 董砚龙;爱建系陷入谣言漩涡[N];中华工商时报;2004年
6 记者 张可春 通讯员 杨春茂 刘侠;胜利油建系统组建责任公司[N];中国石化报;2001年
7 朱金福 刘影;爱建系泥足深陷谁将为刘顺新后遗症买单[N];中国经营报;2004年
8 董立巍 常金光;铁建系统公安工作会议在京召开[N];中国铁道建筑报;2003年
9 姚尚建;智力团体的打造[N];中国化工报;2004年
10 王亭杰;化工系庆祝建系60周年[N];新清华;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 周欣;分离615小鼠ES细胞集落及诱导ES细胞定向分化为神经细胞的实验研究[D];中国医科大学;2002年
2 宋晓平;小鼠胚胎干细胞定向诱导分化成骨细胞研究[D];西北农林科技大学;2003年
3 何志颖;规范化基因剔除小鼠技术体系的研究[D];第二军医大学;2006年
4 郑敬民;基于重组酶作用的小鼠ES细胞HPRT基因位点转基因定点整合系统研究[D];第二军医大学;2001年
5 杨奇;Aroclor 1254对3种成纤维细胞的毒性及绵羊ES细胞的分离[D];西北农林科技大学;2003年
6 郭志林;小鼠、兔和牛胚胎干细胞分离培养及其向神经样细胞的分化[D];西北农林科技大学;2008年
7 蒙超衡;小鼠胚胎干细胞培养及神经分化的研究[D];广西大学;2004年
8 朱丹雁;淫羊藿苷诱导小鼠胚胎干细胞定向分化为心肌细胞作用及其调控研究[D];浙江大学;2005年
9 王春霞;1.sla/lp基因敲除鼠模型的建立 2.sla/lp启动子的鉴定及其特点[D];山东大学;2007年
10 孙丽;C/EBPβ抑制恶性细胞增殖以及在ES细胞分化过程中的功能研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 章淑芳;小鼠ES细胞的定向诱导分化与建系实验研究[D];浙江大学;2004年
2 华进联;源于原始生殖细胞的人、小鼠ES细胞的分离克隆[D];西北农林科技大学;2001年
3 王志勇;小鼠胚胎干细胞分离、培养及鉴定研究[D];甘肃农业大学;2004年
4 杨娜娜;小鼠白血病抑制因子基因的克隆、表达及维持鸡胚胎干细胞未分化状态的研究[D];山东农业大学;2005年
5 杨君杰;小鼠睾丸支持细胞诱导小鼠胚胎干细胞向生殖细胞分化的实验研究[D];第二军医大学;2006年
6 孙亚东;小鼠胚胎干细胞体外诱导分化为成骨细胞研究[D];西北农林科技大学;2006年
7 杨荣荣;ES小鼠和ES细胞中H19基因甲基化状态[D];河北农业大学;2009年
8 温晓辉;遗传背景对小鼠四倍体胚胎发育的影响[D];河北农业大学;2008年
9 赵惠卿;低氧对胚胎干细胞体外增殖和分化的影响[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
10 安静;鸡胚胎干细胞的分离、培养及鉴定[D];山东农业大学;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026