收藏本站
《浙江大学》 2004年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

油菜高效再生体系的创建及农杆菌介导法基因转化研究

唐桂香  
【摘要】: 油菜是世界上主要的油料作物,长久以来,育种家对此类作物进行了广泛的品种改良,但常规育种方法常局限于种质资源的匮乏。植物基因工程技术在农业上的应用为有效改良油料作物提供了新的途径。但从整体上看,油菜遗传转化的效率均不太高,基因转移成功的材料仅局限在个别品种上。本论文主要以甘蓝型油菜无菌苗子叶和下胚轴为材料,较系统地研究了甘蓝型油菜子叶和下胚轴外植体高效再生的影响因素、农杆菌介导法甘蓝型油菜转化体系的研究,试验结果如下。 1.甘蓝型油菜不同子叶外植体的再生以完整子叶-子叶柄外植体再生能力比半子叶-子叶柄外植体再生能力强;子叶外植体高效再生体系为:以MS为基本培养基,4~5d苗龄子叶外植体先在含2,4-D1mg/L的MS培养基上预培养3d诱导产生愈伤组织,再转接到含有BA3 mg/L、NAA0.15mg/L和10mg/LAgS_2O_3的分化培养基(添加蔗糖30g/L,琼脂7.5g/L,pH5.8)上诱导芽的分化,子叶外植体的芽再生频率达96.7%。在此再生体系培养基上,子叶外植体接种后第二天就开始膨大,并在切口处产生愈伤组织,到预培养3d、分化培养7d后,切口处尤其是子叶柄连接处为坚实、致密的愈伤组织所包围,可见芽的再生,部分外植体产生不定根。分化培养25d外植体培养结束。 2.不同基因型子叶外植体再生能力不同,以甘蓝型油菜(Brassica napus)N1品种子叶外植体芽再生频率最高(83.6%),其次为埃塞俄比亚芥(B.carinata)品种C1(76.7%),白菜型油菜(B.rapa)R5品种表现为较低的再生能力(10%),但有较高的再生外植体数目(5.64~1.33)。不同芸薹属油菜间子叶外植体的再生以芥菜型油菜(B.juncea)最高,甘蓝(B.oleracea)和白菜型油菜(B.rapa)因含AA染色体,再生较难;甘蓝型油菜(B.napus)和埃塞俄比亚芥(B.carinata)介于两者之间。 3.在芸薹属油料作物中子叶外植体较易再生,但不易转化,而下胚轴外植体利于农杆菌介导的转化。在本试验中下胚轴外植体高效再生体系为:以MS为基本培养基,4~5d苗龄的上端下胚轴外植体先在含2,4-D1.5mg/L的MS培养基上预培养7d诱导产生愈伤组织,再转接到含有BA4 mg/L、NAA0.1mg/L和10mg/L AgS_2O_3的分化培养基(添加蔗糖30g/L,琼脂7.5g/L,pH5.8)上诱导芽的分化,下胚轴外植体的芽再生频率为96.7%。 4.不同基因型在不同培养上下胚轴外植体芽的再生频率变化较大,可以从甘蓝型油菜N3 品种最高70.0%(BA3mg/L、NAAo.xmg几培养基)至N4、N6品种在BA4mg/L、NAAo.zm叭 培养基上没有芽的再生。基因型和培养基与下胚轴外植体芽的再生呈显著性差异,不同培养基、 不同基因型是决定下胚轴外植体芽再生的主要因素。 5.甘蓝型油菜不同类型外植体再生能力不同。花序梗、子叶、一下胚轴和真叶柄四种外植体, 以子叶外植体芽再生频率最高(56.7%),花序梗再生能力最低(仅为10乃%),其次为下胚轴 (33.3%)和真叶柄(23.3%);真叶柄具有最高的再生外植体数目(3.23),其次为花序梗(3 .00) 和子叶(l .57)。利用无菌苗子叶作为外植体具有诸多优点,外植体来源多且不受季节限制,另 外也可减少外植体的污染程度。 6.通过对根癌农杆菌转化多种因素的比较和探索,建立了农杆菌介导的转化体系。以甘 蓝型油菜Nl品种无菌苗完整子叶一子叶柄外植体,预培养2d,经农杆菌EHA 105(含有质粒 pDW151)感染10一15min共培养48h,在含卡那霉素(Kan)一smg/L抗性不!I梭节青霉素(ear) 50om叭培养基上筛选得到转化体,在现有品种上转化频率为2.5%。转化体经PcR检测外源 基因己整合到甘蓝型油菜基因组中,转化植株的大田试验有待于进一步研究。此外,用下胚轴 外植体作为转化受体时未筛选到转化体。这与现有的研究报道不尽一致,也有待于进一步研究。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S565.4

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 ;油菜复种大豆[J];新农业;1980年03期
2 杨经泽,徐润芳,徐育松,田任久;不同盐分对油菜种子发芽的影响研究初报[J];中国油料作物学报;1984年04期
3 刘昌智,涂运昌,周道运,伍昌胜;油菜氮磷钾肥经济施用量[J];中国油料作物学报;1987年04期
4 张勤争,郎献华,奚海福,朱学群,刘银花;油菜对~(35)SO_4~(2-)吸收和种子中硫代萄萄糖苷的累积[J];核农学报;1991年01期
5 徐林,李义之;日本油菜王种植技术[J];种子;1994年04期
6 徐志刚,王明波,孙成,王刚,王振涛,李重国;油菜垄作栽培示范效果[J];现代化农业;1994年05期
7 杨振武;棉花与油菜套种栽培技术[J];作物研究;1994年02期
8 张宇文;油菜套种播期的确定方法[J];农业科技通讯;1995年12期
9 张瑶书;油菜育苗移栽好处多[J];安徽农业;1995年09期
10 沈岳清;多效唑在农业上的应用技术——第四讲 多效唑在油料作物上的应用技术[J];上海农业科技;1995年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 田保明;;中国油菜遗传改良[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
2 李昱;王飞;林新坚;;几种磷肥对油菜的肥效表现[A];第八届全国青年土壤暨第三届全国青年植物营养与肥料科学工作者学术讨论会论文集[C];2002年
3 鲁剑巍;陈防;刘冬碧;万运帆;许幼生;;长江流域油菜施钾技术研究[A];青年学者论土壤与植物营养科学——第七届全国青年土壤暨第二届全国青年植物营养科学工作者学术讨论会论文集[C];2000年
4 张涛;孙万仓;;芸芥与油菜远缘杂交研究进展[A];21世纪作物科技与生产发展学术讨论会论文集[C];2002年
5 于澄宇;胡胜武;张春红;俞延军;;油菜化学杀雄剂研究I:EXP对油菜的杀雄效果[A];’2003中国作物学会学术年会文集[C];2003年
6 傅廷栋;;油菜品种改良的现状与展望[A];2004’中国作物学会学术年会文集[C];2004年
7 孙新;杨志敏;徐朗莱;;镉诱导油菜叶片氧化胁迫及与硫有关化合物的积累[A];中国植物生理学会全国学术年会暨成立40周年庆祝大会学术论文摘要汇编[C];2003年
8 何永坤;高阳华;;重庆地区油菜气候适应性研究[A];新世纪气象科技创新与大气科学发展——中国气象学会2003年年会“农业气象与生态环境”分会论文集[C];2003年
9 李玮;姜蔚;赵惠贤;胡胜武;;用EST-SSR和RAPD标记分析世界不同地区油菜材料的遗传多样性[A];中国作物学会50周年庆祝会暨2011年学术年会论文集[C];2011年
10 冷锁虎;凌启鸿;朱耕如;;油菜高产群体质量[A];中国青年农业科学学术年报[C];2002年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 陈再高;雪后油菜苗的管理[N];安庆日报;2005年
2 孝感市农业局高级农艺师 余宏章;不可忽视油菜缺磷问题[N];湖北科技报;2002年
3 田文秋;油菜缺硼的诊断及补救[N];江苏科技报;2004年
4 郭子平;湖北农民种植油菜人均增收40元[N];粮油市场报;2004年
5 彬县农业局 李存善;油菜的播种[N];陕西科技报;2001年
6 宜君县农技中心 薛晓玲;早动手抓好油菜春管[N];陕西科技报;2004年
7 李大刚;防止油菜早衰[N];西藏日报;2004年
8 单长华;婺源冬种“花海”10万亩[N];上饶日报;2008年
9 涂同明;湖北“十一五”油菜综合机械化水平将达30%[N];中国农机化导报;2008年
10 曹涤环;迟播油菜加强冬管[N];江苏农业科技报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 唐桂香;油菜高效再生体系的创建及农杆菌介导法基因转化研究[D];浙江大学;2004年
2 Muhammad Shahbaz Naeem;5-氨基乙酰丙酸对盐害胁迫下油菜植株形态、生理及细胞亚显微结构的调控机制研究[D];浙江大学;2010年
3 齐绍武;油菜(Brassica napus)品种(系)与菌核菌(Sclerotinia Sclertiorum)相互作用机理及遗传研究[D];湖南农业大学;2002年
4 孙新;镉诱导油菜氧化胁迫及硫在缓解镉毒害中的分子机理[D];南京农业大学;2003年
5 李方球;油菜(Brassica napus)品种(系)与菌核菌(Sclerotinia sclerotiorum)相互作用机理研究[D];湖南农业大学;2001年
6 王冰山;Germin基因的克隆和人溶菌酶基因的合成及其在烟草和油菜中的表达[D];中国农业科学院;2000年
7 张治礼;内源细胞分裂素调控油菜叶片衰老进程的研究[D];华南热带农业大学;2002年
8 于秋菊;油菜质膜水孔蛋白BnPIP1基因的功能分析及其上游调控区的研究[D];东北农业大学;2002年
9 潘刚;高效甘蓝型油菜遗传转化体系的建立及细胞周期基因的花粉特异表达分析[D];华中农业大学;2004年
10 张椿雨;芸薹属作物与Moricandia nitens间甘氨酸脱羧酶P亚基基因的比较分析[D];华中农业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 彭正萍;油菜施用腐植酸复合肥的综合效应与机理研究[D];河北农业大学;2001年
2 官梅;~(12)C重离子束辐照对油菜(B.napus)的影响[D];湖南农业大学;2005年
3 杨毅;基于Windows CE的油菜栽培专家咨询系统的开发[D];四川农业大学;2003年
4 杨粉团;植物生长调节剂对油菜产量和品质影响的研究[D];华中农业大学;2005年
5 赵懿;油菜光合功能衰退研究[D];中国农业科学院;2006年
6 茹淑华;积累镉油菜吸收累积镉的特征和机制[D];中国农业大学;2004年
7 李得宙;双低油菜高产栽培生理基础的研究[D];内蒙古农业大学;2005年
8 朱凤羽;硫缺乏对油菜芥子油苷含量的影响[D];东北林业大学;2008年
9 唐瑶;油菜花后源库关系研究[D];扬州大学;2005年
10 范宝磊;新型化学杀雄剂WP和YB诱导油菜雄性不育机理初探[D];华中农业大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026