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《浙江大学》 2004年
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利用启动子陷阱技术(Promoter trapping)构建稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)突变体库

刘小红  
【摘要】: 稻瘟病是水稻上重要的病害之一,其病原为子囊菌Magnaporthe grisea。了解M.grisea的致病机理不仅有利于稻瘟病的防治,而且作为研究植物病原真菌与寄主互作的理想模式系统,对于了解其它真菌的致病机理也有重要意义。致病相关基因的克隆和分析是达到这一目标的有效途径。突变体的获得及表型分析是鉴定致病相关基因的有效策略。 获得突变体的方法很多,如限制性内切酶介导的转化,农杆菌介导的转化,转座子标签技术等。然而,这些方法不能研究以下基因:在实验室条件下功能上多余的基因;在多个水平上都有作用的基因;低水平表达的重要基因。启动子陷阱的方法,并不需要产生可见的功能缺陷,只需根据报告基因的表达就可将转化子筛选出来,然后通过启动子陷阱载体上的已知序列克隆目的基因。本研究,将启动子陷阱的技术应用于稻瘟病菌,通过构建启动子陷阱载体,利用限制性内切酶介导转化,建立的突变体库。研究结果如下: 1.构建了启动子陷阱载体pEGFP-HPH和pCB1003-EGFP,均具有具有潮霉素抗性基因和无启动子的eGFP基因; 2.建立了稻瘟病菌遗传转化体系,转化效率达到40-60个突变体/微克DNA; 3.获得突变体1077株,通过荧光显微镜检测,489株突变体荧光表达,eGFP基因表达率45.4%;生长速度明显比野生型减慢的突变体3株;菌落白色的突变体9株;产孢减少的有35株;致病性有所降低的菌株18株;随机挑取8株突变体进行Southern杂交分析,可以杂交到强弱不同的信号。 实验数据表明,启动子陷阱技术具有良好的前景,通过这种方法,我们可以得到许多在形态、代谢、致病性等各个方面有变化的突变体。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S435.11

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