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《浙江大学》 2004年
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抗Vitronectin兔单克隆抗体的制备与初步鉴定

蔡宁  
【摘要】:单克隆抗体的研究已经被广泛地应用于免疫分析、疾病诊断、疫苗生产、基因改造和药物开发等方面,成为生命科学领域中最活跃的部分。通过杂交瘤(hybridoma)技术制备单克隆抗体通常以小鼠为材料来进行。而家兔的抗体有更强的亲合力和更高的特异性,人们一直以来对兔类单克隆抗体有很大的需求。 vitronectin是一类存在于血液和一些组织中的多功能粘附糖蛋白。体内vltronectin水平的变化与凝血、免疫相关疾病等多种生理和病理过程密切相关。 本研究采用一种新的“融合伴侣”(fusion partner):兔骨髓瘤样细胞株240E,与免疫了纯化的人粘附蛋白Vitronectin的兔脾脏融合,产生兔-兔杂交瘤细胞,经克隆化后筛选获得33株特异性分泌抗Vitronectin单克隆抗体的兔类杂交瘤细胞株。并初步鉴定了部分细胞株的抗体特性。实验主要内容包括: (1)240E细胞的培养 根据生长曲线的绘制,调整240E细胞生长状况,获得适合融合的240E细胞。 (2)动物免疫 用合适的方法免疫动物,获得高滴度的多抗血清和高度活化的脾脏细胞用于融合。 (3)细胞融合及筛选 使用PEG介导240E细胞与免疫的兔脾细胞融合,获得HAT抗性的杂交瘤细胞,经ELISA和Western Blot筛选,获得抗vitronectin的阳性克隆。 (4)杂交瘤细胞的克隆化 使用有限稀释法进行克隆化,经ELISA和Western blot再次筛选,获得单克隆。 浙江大学硕士学位论文 抗Vitmnectin兔单克隆抗体的制备及初步鉴定 (5)杂交瘤细胞的初步鉴定 包括240E细胞和杂交瘤细胞染色体分析、免疫组织化学鉴定、蛋白交叉反 应、不同表位鉴定、传代稳定性和腹水诱生。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S852.4

【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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