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《浙江大学》 2005年
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人工分子伴侣体系辅助溶菌酶复性的研究

程晓玲  
【摘要】:如何对包含体蛋白进行正确的体外折叠,以期能够获得高浓度、高收率的活 性蛋白产品是蛋白质工业化应用的瓶颈。为此本文对模型蛋白溶菌酶进行了研 究。 首先考察了盐酸胍、DTT、变性时间对变性过程中自由巯基数、残余活力及 稀释复性率三个参数的影响。当溶菌酶浓度为15mg/mL时得出变性条件是6M盐 酸胍,5mM DTT, 在36℃及100 rpm摇床中60min能够彻底还原变性,且复性效 果最好。复性液中DTT的存在对复性效果没有影响。 接着研究了去污剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和β-环糊精(β-CD)的 人工分子伴侣体系对变性-还原溶菌酶的氧化复性效果。相继考察了各种因素对 复性率的影响。结果发现,溶菌酶最佳的复性操作条件为:pH值8. 1,半胱氨酸 作二硫键重排剂,浓度为1-2mM,CTAB与β-CD的最佳的复性浓度分别为0. 6- 1. 2mM和30mg/1. 5mL。此外复性率随酶浓度的升高有所降低。 最后,在β环糊精的基础上合成了固态环糊精β-CDP,其大小在50-200μm 之间,呈无色透明状。β-CDP对溶菌酶的复性效果由于受到固液传质的影响,对 于溶菌酶浓度为50pμg/mL时只达到40%的复性率,但重复利用率较好。为人工分 子伴侣的固定化研究和复性应用打下了基础。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:O629.73

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 贾长虹;卢育红;;人工伴侣条件下谷胱甘肽浓度对溶菌酶复性的影响[J];青岛大学学报(工程技术版);2007年02期
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
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4 史晋辉;蛋白质复性[J];生命的化学;2000年06期
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6 方元超,梅丛笑,尹宁;溶菌酶及其应用前景[J];中国食品添加剂;1999年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李维静;;酶的食品保健作用综述[J];安徽农学通报;2007年10期
2 张志娟;王素英;林媛;;PEG/磷酸盐双水相体系萃取青霉TS67胞外活性蛋白的研究[J];安徽农业科学;2009年17期
3 常凯;马亮;;溶菌酶提取工艺及其在山核桃乳中的应用研究[J];安徽农业科学;2009年30期
4 张潭;边六交;王世祥;郑晓晖;;荧光相图法研究变性蛋白溶菌酶在脲和盐酸胍溶液中的复性过程[J];安徽农业科学;2010年19期
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6 张岚;;马齿苋多糖运动功能饮料抗运动性疲劳及提高运动耐力的作用[J];安徽农业科学;2011年07期
7 黄慧福;;魔芋胶生产中HACCP的应用研究[J];安徽农业科学;2011年07期
8 黄慧福;;魔芋精粉生产中HACCP的应用研究[J];安徽农业科学;2011年13期
9 吴少辉;彭芳;高鹏飞;巫秀美;何苗;张成桂;刘光明;;膜超滤分离美洲大蠊抗肿瘤活性部位小分子肽的研究[J];安徽农业科学;2012年04期
10 徐新颜,徐家萍,徐静斐,吉鑫松,袁中一;丝素蛋白葡萄糖氧化酶膜的储存稳定性[J];安徽农业科学;1997年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
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2 刘浩强;乌春华;;鸡蛋溶菌酶在婴幼儿配方奶粉中的应用[A];中国奶业协会年会论文集2009(下册)[C];2009年
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4 方希修;王冬梅;管军军;乐国伟;;超滤/DEAE离子交换层析法分离纯化IgY的研究[A];2009山东饲料科学技术交流大会论文集[C];2009年
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6 李德发;马曦;孙鹏;;大豆抗原蛋白研究进展[A];动物营养研究进展——中国畜牧兽医学会动物营养学分会第八届全国代表大学暨第十届学术研讨会论文集[C];2008年
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8 林杰;游明乐;;“血脂通”有效成分与调节血脂功能的临床试验[A];首届海峡两岸食(药)用菌学术研讨会论文集[C];2005年
9 关怡新;姚善泾;;重组蛋白的体外复性技术研究进展[A];浙江省化工学会成立五十周年庆祝大会暨第二届省(市)际化学化工科技发展研讨会论文集[C];2001年
10 余献国;余子婴;李靖;;生命科学进展中膜科学技术的机遇及发展前景[A];第五届全国医药行业膜分离技术应用研讨会论文集[C];2012年
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6 蔡昌群;共振光散射光谱探针在DNA杂交及多态性检测中的研究与应用[D];湘潭大学;2011年
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6 刘操;猪附红细胞体对仔猪非特异性免疫功能的影响及免疫调节剂的筛选[D];山东农业大学;2010年
7 兰任;基于并行混合粒子群算法的蛋白质结构预测[D];大连理工大学;2010年
8 刘晓红;ISSR辅助杏鲍菇常规杂交育种研究[D];安徽农业大学;2010年
9 陈文辉;含环糊精端基嵌段聚合物的合成及其自组装研究[D];湘潭大学;2010年
10 解秋菊;真姬菇液体发酵海带废渣及其产物的生物活性分析[D];中国海洋大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 董晓燕,史晋辉,孙彦;人工伴侣和盐酸胍促进溶菌酶复性的协同效应[J];化工学报;2002年06期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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5 何炳林,赵晓斌;新型β-环糊精固载化高分子合成研究(Ⅱ)[J];高等学校化学学报;1992年11期
6 苏小笛,刘六战,沈含熙;水溶性β-环糊精交联聚合物对双客体芳香席夫碱的荧光识别作用研究[J];高等学校化学学报;1997年08期
7 毛陆原,朱敏,黄雪梅,沈含熙,李荣;包合铁卟啉的环糊精聚合物作为过氧化物朊酶模型物的研究[J];高等学校化学学报;1997年10期
8 陈永明,何炳林;胺修饰β-环糊精交联树脂的制备及吸附性能[J];高等学校化学学报;1996年07期
9 韩树波,朱敏,袁倬斌;以β-环糊精聚合物的超分子包结物为固定化介质的安培型过氧化氢传感器的研究[J];高等学校化学学报;1999年07期
10 刘琼,范晓东;具有分子包合功能的聚氨酯-β-环糊精新型交联体的研究[J];功能高分子学报;2001年03期
【相似文献】
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1 程晓玲;柴红;;人工分子伴侣复性体系辅助溶菌酶复性的研究[J];现代化工;2005年S1期
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1 张秦铭;人工分子伴侣—离子交换色谱法辅助还原变性蛋白质的复性[D];西北大学;2008年
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>西北大学
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>张秦铭
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