收藏本站
《浙江大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人工分子伴侣体系辅助溶菌酶复性的研究

程晓玲  
【摘要】:如何对包含体蛋白进行正确的体外折叠,以期能够获得高浓度、高收率的活 性蛋白产品是蛋白质工业化应用的瓶颈。为此本文对模型蛋白溶菌酶进行了研 究。 首先考察了盐酸胍、DTT、变性时间对变性过程中自由巯基数、残余活力及 稀释复性率三个参数的影响。当溶菌酶浓度为15mg/mL时得出变性条件是6M盐 酸胍,5mM DTT, 在36℃及100 rpm摇床中60min能够彻底还原变性,且复性效 果最好。复性液中DTT的存在对复性效果没有影响。 接着研究了去污剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和β-环糊精(β-CD)的 人工分子伴侣体系对变性-还原溶菌酶的氧化复性效果。相继考察了各种因素对 复性率的影响。结果发现,溶菌酶最佳的复性操作条件为:pH值8. 1,半胱氨酸 作二硫键重排剂,浓度为1-2mM,CTAB与β-CD的最佳的复性浓度分别为0. 6- 1. 2mM和30mg/1. 5mL。此外复性率随酶浓度的升高有所降低。 最后,在β环糊精的基础上合成了固态环糊精β-CDP,其大小在50-200μm 之间,呈无色透明状。β-CDP对溶菌酶的复性效果由于受到固液传质的影响,对 于溶菌酶浓度为50pμg/mL时只达到40%的复性率,但重复利用率较好。为人工分 子伴侣的固定化研究和复性应用打下了基础。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:O629.73

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 姜晓琳;陆杰;顾瑾;;溶菌酶在聚电解质溶液中溶解度的测定及关联[J];应用化工;2011年07期
2 陈萍;赵玮;李琳;胡松青;;水溶性葡聚糖亲和-超滤载体对溶菌酶吸附分离特性的研究[J];食品工业科技;2011年08期
3 杨辉;闫守泉;赖祯冬;林祖端;梁海秋;朱萍;;产溶菌酶白色链霉菌的筛选及鉴定[J];现代食品科技;2011年08期
4 李向荣;;盐酸胍和尿素诱导溶菌酶变性的微量热研究[J];化学通报;2011年09期
5 王珺;吴晓;霍乃蕊;;牛初乳中免疫因子研究进展——以长江中下游油菜和水稻种子生产商为例[J];天津农业科学;2011年03期
6 徐为;姚爱华;艾凡荣;王德平;黄文旵;;多孔羟基磷灰石微球的药物缓释性能[J];材料研究学报;2011年04期
7 徐义邦;孙向英;杨传孝;;碲化镉量子点自组装膜的构建及其对溶菌酶的界面传感[J];分析化学;2011年09期
8 陈伟;贾原媛;郑伟;李小明;周俊;杨麒;罗琨;;胞外多聚物对酶催化污泥厌氧水解的影响研究[J];环境科学;2011年08期
9 万印华;陈向荣;马光辉;苏志国;崔占峰;;超滤分离蛋白质过程快速优化新技术及其应用[J];膜科学与技术;2011年03期
10 范雪荣;王强;王平;袁久刚;;可用于纺织工业清洁生产的新型酶制剂(续一)[J];针织工业;2011年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李剑;王志珍;;分子伴侣GroEL与D-3-磷酸甘油醛脱氢酶折叠中间体的“半位”结合模式[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(上册)[C];1999年
2 杨芳;项瑾;杜芬;梁毅;;pH诱导溶菌酶及其同源蛋白去折叠研究[A];湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编[C];2004年
3 曾丽玲;周筠梅;;C-domain对Trigger Factor体内分子伴侣作用的影响[A];第七届全国酶学学术讨论会论文摘要集[C];2004年
4 于振行;汤洪敏;高丹;潘继承;周海梦;;SDS对精氨酸激酶的变性作用及人工分子伴侣帮助下的复活[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年
5 王志珍;;巯基蛋白质氧化还原酶的折叠酶活性与其二聚化作用[A];第一届全国脑与认知科学学术研讨会论文集[C];2005年
6 郭锡久;阮兴朝;苏德永;赵碧华;江世芬;;复发性口疮与血清微量元素及溶菌酶含量关系探讨的实验研究[A];FDI、CSA临床口腔进展学术会议论文汇编[C];1999年
7 李震宇;刘川鹏;朱榴琴;静国忠;周筠梅;;Trigger Factor体内分子伴侣作用与其PPlase活力无关而作用效果与其同底物的比例相关[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
8 渠琛玲;张寒琦;白雨萍;孙颖;王璐;;电喷雾质谱法研究人参皂苷Rd与生物分子的相互作用[A];第十届中国化学会分析化学年会暨第十届全国原子光谱学术会议论文摘要集[C];2009年
9 刘越存;张玉虎;王丽娟;王丽敏;王艳艳;;分子伴侣辅因子CHIP与帕金森病PINK1基因的相互作用[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
10 谢韵;周健;;溶菌酶在带电表面的吸附取向的计算机模拟[A];中国化学会第十二届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;解读“溶菌酶”[N];江苏科技报;2001年
2 姚云昕;新型保健添加剂——溶菌酶[N];中国食品报;2009年
3 李山;分子伴侣和异构酶合作机理揭开[N];科技日报;2009年
4 由中国科学院生物物理研究所王志珍等完成;蛋白质二硫键异构酶的分子伴侣活性以及分子伴侣帮助的蛋白折叠[N];中国医药报;2003年
5 丁亮;怎样从蛋清中提取溶菌酶[N];山西科技报;2002年
6 上海蓝岛加华食品有限公司 严进;溶菌酶应用探讨[N];中国食品质量报;2004年
7 刘永平郑义;我国白内障发病机理研究获重大进展[N];中国医药报;2008年
8 陈国东;努力寻找攻克非典的新型武器[N];医药经济报;2003年
9 广东省家禽科学研究所 邹仕庚 安徽省含山畜牧兽医站 朱光道;溶菌酶及其在畜禽饲料中的应用[N];中国畜牧兽医报;2009年
10 第四军医大学唐都医院眼科教授 严宏刘永平 郑义 整理;从发病机理探寻白内障药疗[N];健康报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王君;表面活性剂辅助蛋白质复性过程机理研究[D];清华大学;2004年
2 张新潮;重组人亲环素A的类分子伴侣功能及部分结构研究[D];武汉大学;2010年
3 董晓燕;辅助因子促进蛋白质复性的研究[D];天津大学;2005年
4 徐蔚晶;分子伴侣与白细胞介素-2促增殖信号通路的相互作用——信号分子伴侣Hsp90功能研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2002年
5 王孟春;内质网分子伴侣家族成员在幽门螺杆菌感染胃粘膜中的表达及意义[D];中国医科大学;2002年
6 陈瑶;特异性下调内质网分子伴侣GRP94对人大肠癌细胞生物学特性影响的研究[D];中国医科大学;2003年
7 王琪;内质网分子伴侣GRP94、GRP78和PDI在人体肺癌组织中表达的研究[D];大连理工大学;2002年
8 李波;内质网分子伴侣与小鼠脑发育的关系[D];中国医科大学;2003年
9 张琇;海洋芽孢杆菌S-12-86溶菌酶的发酵、纯化与生物活性的研究[D];中国海洋大学;2007年
10 王彦;液-固界面的吸附及溶菌酶在液相色谱中复性的应用研究[D];西北大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 贾长虹;人工伴侣与小分子添加剂协同辅助变性溶菌酶复性的研究[D];天津大学;2007年
2 李进;胆固醇配基色谱在蛋白质复性中的应用[D];天津大学;2007年
3 程晓玲;人工分子伴侣体系辅助溶菌酶复性的研究[D];浙江大学;2005年
4 刘红妮;弱阳离子交换色谱固定相对还原变性溶菌酶的折叠贡献[D];西北大学;2004年
5 郝杰;蜡状芽孢杆菌S-12-86产海洋溶菌酶的研究[D];中国海洋大学;2004年
6 姜馗;蛋清溶菌酶提取技术的研究[D];中国农业大学;2005年
7 权宇彤;溶菌酶的制备与活性检测[D];吉林大学;2006年
8 卜兴江;中国对虾组织蛋白酶L和溶菌酶的重组表达及性质研究[D];山东大学;2006年
9 周翔;重组大鼠溶菌酶N端多肽的原核表达及其与AGEs的结合作用[D];暨南大学;2006年
10 孙同虎;过量表达大分子热激蛋白HSP84对烟草抗逆性的影响[D];山东师范大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026