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大鼠胚肝细胞肝内移植和慢病毒载体Lenti-lacZ的表达

陈继达  
【摘要】:很多研究已经证实了胚胎肝脏中大量存在的胚肝上皮祖细胞(Fetalliver epithelial progenitor cells, FLEC)具有肝干细胞特性,由于其数量较多而且较易分离,已经成为当前研究最多的一种肝干细胞。国内外很多学者对肝干细胞的生物学特性、增殖机制以及诱导方法等方面进行了研究,并取得令人鼓舞的成果。研究表明,胎龄14天大鼠胚肝细胞经门静脉移植到倒千里光碱/肝叶切除处理的大鼠肝脏,移植的胚肝细胞在肝内持续增殖,形成的集落数量和体积随着时间不断增加,最后可达到全部肝细胞的60-80%。胚肝细胞在肝内可分化为肝细胞和胆管上皮细胞,形成正常的肝小叶结构。相对于成熟肝细胞,胚肝细胞具有更大的增殖能力和双向分化能力,细胞体积更小,不易引起受体的排斥反应等优点,因此肝干细胞有可能作为肝病尤其是代谢性疾病基因治疗理想的受体细胞,将治疗基因带入体内,随着胚肝细胞的增殖而放大并长期稳定表达,从而在肝病ex vivo途径基因治疗中发挥重要作用,具有很大的研究前景。 为了研究大鼠胚肝细胞作为肝病基因治疗受体细胞的可行性,明确目的基因在体外培养的胚肝细胞中能否表达,携带目的基因的胚肝细胞移植到肝内能否大量增殖,目的基因能否持续大量表达,以及方法的建立,我们设计了本实验:第一部分,原代培养胎龄14天SD大鼠胚肝细胞,构建慢病毒载体Lenti-lacZ并体外转导大鼠胚胎肝细胞,检测LacZ基因的表达:


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