收藏本站
《浙江大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

频谱染色体核型分析技术体系的建立及其在产前诊断中的应用

任宇珂  
【摘要】:如何对细小的染色体异常做出准确的核型分析一直是困扰产前诊断技术人员的技术难题之一。传统的染色体显带核型分析由于其分辨率较低,往往难以对复杂易位做出准确判断,而且操作费时费力。荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)虽然与G带相比具有简便、快速、特异性高等优点,但是FISH技术往往要建立在已知的核型分析基础上,对没有任何可以确定的条带模式的未知染色体异常,检测就变得十分困难。频谱核型分析(SpectralKaryotyping, SKY)这种新式的全染色体着色技术允许在一次试验里使每一条染色体都清楚地按照不同的颜色呈现出来,并进行同步鉴定和分析,而且能识别染色体显带技术和单用FISH难以确认的一些畸变,为准确地诊断复杂核型异常提供了可能。目前,国内对SKY技术研究和临床应用还不够全面和深入,特别是对SKY染色体制片及如何与其他技术有效结合建立可行的操作模式研究比较欠缺。本实验观察并分析了各种实验变化因素对制片过程的影响,以及SKY技术、G带技术和FISH在临床上的应用,以求为制片技术标准化及进一步阐明三者的作用及如何进行有效分析提供思路,并为建立有序的临床诊断规范提供实验依据。 目的: 1.观察滴片高度、固定液比例、滴片方法等因素对SKY制片的影响作用并 浙江大学硕士学位论文 探讨其机制。 2.应用改良后的方法建立适合国情的SKY技术体系应用于临床诊断。 3.探索SKY技术在妇产科领域诊断复杂核型异常中的应用,研究G带、FISH、 SKY技术在产前诊断中的应用并探讨如何建立有效结合的规范流程。 方法: 1.用染色体分裂相大小、交叉数目、破裂频率来评估制片过程中的各种因素 对制片结果的影响。 2.通过蒸汽制片和化学法结合的改进方法与常规方法比较,探索SKY制片问 题的解决方案,从而建立SKY技术体系。 3.应用SKY、F工SH、G带结合分析临床病例,探讨各种技术的作用,及建立 规范的临床诊断流程。 结果: 第一部分SKY制片技术及其可能的影响机制 1.滴片高度Icm到30cm对SKY制片结果影响不大。 2.固定液比例的改变从2:1到4:1浓度对SKY制片结果有一定影响,比 例越大,染色体分裂相破裂越少,但有变小趋势、3:1的比例比较适中。 3.应用改进后的蒸汽法和化学法结合的新方法能使染色体分裂相有效扩 散,并达到制片要求。 4.离心速度对染色体分裂相的质量有一定程度的影响,相对于常规的6OOXg 离心速度,采用24OXg能够有效解决细胞质和杂质残留的问题,使制片 背景清晰。 第二部分SKY技术在临床诊断上的应用及和其他方法的有效结合 建立的适合国情的SKY技术体系能有效应用于临床诊断,在产前诊断中 复杂的染色体异常及标记染色体来源都得到了一一鉴别。 浙江大学硕士学位论文 2.病例1一24,SKY的分析结果与G带相符合,显示为正常的染色体核型。 3.病例25一28:SKY技术在G显带分析结果的基础上进一步揭示出标记染色 体的来源于6,14,16号染色体,FISH证实了SKY的结果。 4.病例29 SKY诊断是正确的,但是需要F工SH技术来确认.G显带分析显示 5号染色体的长臂的末端存在着不明来源的细小的标记染色体,经过DAPI 图像分析揭示这个不知名的片段源于Y染色体,SKY结果清晰的揭示了这 个易位,但是由于荧光信号闪烁的干扰,最后需要FISH确认了这个异常。 5.病例30先进行SKY尝试性诊断,然后选择FISH探针来鉴别标记染色体 的来源。G带结果提示存在着一个小的不明来源的易位,经过SKY技术的 分析,提示标记染色体可能来源于8,11,21号染色体,经过多个图像 的比对,8号染色体的频率最高,通过应用F工SH探针8,n,21,确 定了标记染色体确实来自于8号染色体。 结论: 1、应用蒸汽法和化学法结合的制片方法能够持续稳定地得到高质量的染 色体分裂相,可获得良好SKY制片效果。 2、我们所建立的SKY技术已达到了SKY技术分析染色体必须达到的质量 标准,其分辨率大小可达1.SMB。显色层次分明,已可用于临床诊断。 3、SKY技术能对许多复杂的染色体重排作出快速诊断;而对于不明来源的 标记染色体也能够根据其染色体颜色的不同快速的确定其来源。克服了 传统染色体显带分析技术的缺点和荧光原位杂交技术的局限。SKY技术 不是对G带和FISH技术的简单的替代,而是非常有益的补充。通过三 者的有效结合,可有效地解决产前诊断中的疑难病例的诊断。 4、根据对实验结果的分析和总结,我们所推荐的在产前和产后诊断中比较 合理的染色体分析技术的操作流程是:首先运用G显带分析进行筛查; 其次SKY分析(当需要鉴别标记染色体时);再接着是FISH技术(有怀 疑,需要确诊时),有两点需要注意的是,首先如果G带可以鉴别出明 确的额外染色体的来源时,SKY这一步就可以省略,而应用FISH确认。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R714.5

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 左启华,雷贞武,张致祥,陈荣华,黄录碧,和光祖,袁燕畴,李倬珍,刘权,张纯,汪梅先,王绍贤;全国0~14岁儿童智力低下的病因流行病学研究[J];中华医学杂志;1994年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郭宏慧,徐家丽,王淑德,梁玉华;智力低下儿童207例病因分析[J];蚌埠医学院学报;1996年03期
2 李焕武,张旭光,尹淮强,辛素莲;学习困难儿童体检及智力测验150例分析[J];蚌埠医学院学报;1997年02期
3 李成,李俊蕙,宫振;低智儿童153例实验室诊断分析[J];蚌埠医学院学报;1997年04期
4 冉霓,付芃,衣明纪;母亲妊娠年龄对婴幼儿智力发育的影响[J];青岛大学医学院学报;2002年03期
5 张鹏;赵虎;吴兴龙;李相运;;ROCK选择性抑制剂Y-27632提高小鼠胚胎干细胞传代效率研究[J];河北农业大学学报;2010年04期
6 张富昌,李瑞林,高晓彩,郑子健,黄绍平,宋合义,席恒,李芬;秦巴山区(宁强、柞水、安康试验区)0~14岁儿童精神发育迟滞患病状况调查[J];第四军医大学学报;2004年06期
7 张颖珍;;甘肃省0~14岁儿童智力低下的现患率及分布特点[J];第四军医大学学报;2009年04期
8 赵蓉香;50例智力低下患儿的临床分析[J];中华儿童保健杂志;1996年03期
9 刘振寰,张宏雁;小儿精神发育迟滞临床早期干预的研究[J];中国儿童保健杂志;1999年02期
10 官旭华,卢祖洵,石淑华,杨志,兰珍,杨小莉,饶继美,胡敏,卢媛,喻兰,冯德祥;武汉市武昌区精神发育迟滞患儿及其同胞的病因分析[J];中国儿童保健杂志;2004年05期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 张欣;季成叶;孙军玲;赵德才;李勇;;天津市区弱智学校学生智力低下病因调查[A];中华预防医学会儿少卫生分会第六届全国学术交流会、中国健康教育协会学校分会第三届学术交流会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前8条
1 韩宁;SYNGAP1基因和UPF3B基因与秦巴山区精神发育迟滞的关系研究[D];西北大学;2011年
2 刘勇;肺癌染色体和DNA甲基化异常改变及其诊断价值的研究[D];第三军医大学;2002年
3 夏方诠;单细胞分析的新方法和肾上腺素细胞传感器[D];山东大学;2005年
4 冯新玲;恐伤孕鼠对其仔鼠脑发育的影响及其机制研究[D];湖北中医学院;2006年
5 张科进;多巴胺能神经递质相关基因与秦巴山区儿童精神发育迟滞的相关性研究[D];西北大学;2007年
6 谈慧;“靳三针”治疗不同年龄儿童精神发育迟滞的临床和实验研究[D];广州中医药大学;2008年
7 秦玉峰;染色体22q11微缺失综合征的筛查与诊断及其智能发育状况的研究[D];浙江大学;2009年
8 林琬翎;靳三针治疗小儿精神发育迟缓的临床研究[D];广州中医药大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘英英;TRAPPC9基因与秦巴山区精神发育迟滞的关系研究[D];西北大学;2011年
2 杨晓娟;中国3-7岁儿童希—内学习能力测验常模修订及智力发育现况比较[D];山西医科大学;2011年
3 朱芳;0-3岁Griffiths精神发育量表中国常模修订及儿童精神发育影响因素研究[D];山西医科大学;2011年
4 刘玉辉;癫痫儿童智力结构及适应行为特点的初步研究[D];大连医科大学;2011年
5 巫静叶;针刺治疗儿童精神发育迟滞的临床研究[D];广州中医药大学;2000年
6 南亚萍;秦巴山区人群智力低下病因分析[D];西北大学;2003年
7 黄秋玲;丹参干预发育期癫痫大鼠学习记忆及脑组织NPY、BDNF表达的实验研究[D];东南大学;2006年
8 陈雪;比较基因组杂交在自然流产组织分析中的应用[D];东南大学;2005年
9 董雄英;湖南黄沙坪铅锌矿床地质特征及其矿石冶炼引发的重金属效应[D];中国地质大学(北京);2007年
10 王廷曦;PAK3、RAC1基因多态性与秦巴山区儿童精神发育迟滞相关性研究[D];西北大学;2007年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 施克珠;;在Mersey区和北威尔士细胞遗传学产前诊断及其效果[J];国外医学.计划生育分册;1987年02期
2 叶玲玲;高锦声;;国外产前诊断研究的新进展[J];国外医学.计划生育分册;1987年04期
3 叶桂蓉;陶春跃;刘惠敏;刘亚绵;王江涛;顾冬梅;;产前诊断胎儿水肿(附2例报告)[J];中日友好医院学报;1990年02期
4 孟敏华;冯丽;;应用基因内Hind Ⅲ多态性通过聚合酶链反应进行血友病A的产前诊断[J];国外医学.妇产科学分册;1991年04期
5 ;核磁共振和超声检查产前诊断显性脊柱裂[J];国外医学.生理.病理科学与临床分册;1994年04期
6 闫英地,吴卫东,周继萍,李聪敏,郝戈芳,才晶,陈春明,王敏峥;543例绒毛细胞染色体产前诊断[J];中华医学遗传学杂志;1995年04期
7 黄瑞萍,汤韧,俞旻;经腹取羊水及脐血检查在产前诊断中的应用[J];实用妇产科杂志;1996年02期
8 章珍珍;;产前诊断 看看腹中胎儿健康吗[J];健康博览;2001年08期
9 万淑梅,余艳红,苏桂栋,张燕;280例β-地中海贫血高风险患儿的产前基因诊断分析[J];现代妇产科进展;2004年05期
10 朱瑞芳,许争峰,胡娅莉,张颖,仲晓玲,郁锋;1005例羊水细胞染色体分析在产前诊断中的应用价值[J];中国优生与遗传杂志;2005年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张静引;孙丽洲;肖云山;;改良荧光原位杂交技术在产前诊断中的应用[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年
2 王静敏;吴晔;顾强;赵海娟;尚晶;赵璐;王慧芳;杨艳玲;方方;秦炯;吴希如;姜玉武;;佩梅病PLP1基因突变分析与5例产前诊断[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年
3 廖灿;钟燕芳;李秋明;马小燕;;经腹脐静脉穿刺术产前诊断2151例分析[A];中国优生优育协会第三届学术研讨会专辑[C];2003年
4 陈冬;葛艳芬;林婷;叶联珍;郑有为;;如何提高重型β地中海贫血在产前诊断中的准确率[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
5 李晓侨;姚凤霞;孟岩;王铮;彭园园;佃艳;周青;苏亮;黄尚志;;成人型多囊肾家系基因突变鉴定及产前诊断[A];第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)论文摘要汇编[C];2009年
6 冯翠竹;马继东;叶蓁蓁;马丽霜;;十二指肠梗阻的产前诊断、围产期管理与治疗[A];中华医学会第八次全国小儿外科学术会论文集[C];2010年
7 许争峰;胡娅莉;朱瑞芳;;高效羊水细胞培养进行临床产前诊断979例[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年
8 钟燕芳;廖灿;龚惠芳;潘敏;李坚;钟惠珠;黎丽仙;;妊娠妇女TORCH酶联免疫法筛查及产前诊断[A];中国优生优育协会第三届学术研讨会专辑[C];2003年
9 沈国松;张甦;何平亚;方嵘;;FISH技术在产前诊断中的应用价值研究[A];2011年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2011年
10 沈国松;张甦;何平亚;方嵘;;FISH技术在产前诊断中的应用价值研究[A];2011中国妇产科学术会议暨浙江省计划生育与生殖医学学术年会暨生殖健康讲习班论文汇编[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 马秀杰 李湛;产前诊断拦截“缺陷儿”[N];抚顺日报;2009年
2 李春;产前诊断出现曙光[N];福建科技报;2000年
3 金永红;产前诊断不能再随意而为[N];健康报;2003年
4 记者王丹;我国建成快速产前诊断技术体系[N];健康报;2009年
5 本报记者 邓益辉 见习记者 卫霞;血友病家庭产前诊断之痛[N];民主与法制时报;2011年
6 衣晓峰 记者 刘传江;产前诊断档案要保存50年[N];中国消费者报;2009年
7 通讯员 李化 许守年 记者 张启军;吉林将全面实施产前诊断筛查[N];健康报;2009年
8 本报记者 任荃;产前诊断缺位“生”出遗憾[N];文汇报;2008年
9 本报记者 周映夏;做好产前诊断生个健康宝宝[N];中山日报;2009年
10 刘正英;产前诊断保平安[N];中国中医药报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘俊涛;侵入性产前诊断技术的系列评估[D];北京协和医学院;2011年
2 卢彦平;几种染色体病及单基因病的产前遗传学诊断技术研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
3 张铭;利用孕妇外周血中胎儿有核红细胞无创性产前诊断染色体非整倍体异常[D];华中科技大学;2006年
4 朱前勇;无创性产前诊断遗传性疾病的生物芯片的研究[D];第三军医大学;2004年
5 胡华;芯片毛细管电泳检测β-地中海贫血及无创性产前诊断的研究[D];第三军医大学;2007年
6 葛芹玉;胎儿核酸检测分析方法的研究[D];东南大学;2006年
7 徐晓燕;富集纯化母血中胎儿有核红细胞并利用胎儿有核红细胞进行胎儿非整倍体的无创性产前诊断[D];华中科技大学;2006年
8 王谦;DYSTROPHIN基因的MLPA检测及其相关基因UTROPHIN的表达调控研究[D];中国医科大学;2009年
9 钟敏;DMD基因缺失突变及连接片段应用于基因诊断的研究[D];南方医科大学;2009年
10 杜颖颖;唐氏综合征无创性产前诊断及相关基因功能的研究[D];复旦大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 任宇珂;频谱染色体核型分析技术体系的建立及其在产前诊断中的应用[D];浙江大学;2005年
2 施蕊;产前诊断偏误之民事赔偿责任研析[D];重庆大学;2008年
3 王莹;孕早中期唐氏综合征筛查及297例介入产前诊断数据的分析[D];暨南大学;2010年
4 苗明珠;杂合型单核苷酸多态性定量焦测序分析技术在唐氏综合征快速产前诊断中的应用研究[D];南京医科大学;2011年
5 赵丽;FISH技术在遗传病诊断及产前诊断中的应用[D];苏州大学;2004年
6 田丹;我国产前诊断服务能力与管理模式研究[D];复旦大学;2009年
7 常静;孕妇外周血中胎儿DNA的检测及其在产前诊断中的应用[D];青岛大学;2004年
8 郭奇伟;实时荧光多重探针连接再扩增技术应用于染色体非整倍体的快速产前诊断[D];厦门大学;2008年
9 陈新华;胎儿超声心动图技术的发展与应用[D];河北医科大学;2009年
10 余蓉;单细胞水平实时荧光定量聚和酶链反应在诊断唐氏综合征中的应用探讨[D];华中科技大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026