收藏本站
《浙江大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

亚硝酸乙酯的细胞毒性作用及可能机制探讨

陈湘湘  
【摘要】:亚硝酸乙酯(Ethyl nitrite/O-nitrosoethanol,ENO),是一种广泛存在于食品中的有机物,也是有机化学工艺中常见的中间产物。尽管人们对它的认识已有百余年的历史,但其在医学方面的研究却极少报道。ENO作为一个古老的有机化合物,它引起医学科研工作者的注意与一氧化氮(nitric oxide,NO)在医学方面的研究进展有着极大的关联。 1992年Kinsellla等首次报道吸入NO(inhaled nitric oxide,iNO)治疗新生儿持续性肺动脉高压(persistent pulmonary hypertension of the newborn,PPHN)取得良好临床效果,此后iNO逐渐成为医学研究的一个热点。尽管大量的临床和实验研究都提示了iNO在治疗肺动脉高压和急性肺损伤的中的良好疗效,这些研究同时也发现了iNO的诸多副作用,其中犹为突出的两个毒副作用是:1、NO易与氧及超氧阴离子(O_2/O_2~-)反应形成有害的氮氧化合物(NO_x),后者可通过髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)作用等氧化途径使蛋白硝基化及造成氧化应激损害等;2、NO吸入的中止常引起肺动脉高压的“返跳”(rebound)现象。 与吸入NO不同的是,内源性NO产生后,除通过与血管内皮细胞的作用直接调节血管扩张外,另有部分可共价结合硫醇如谷胱甘肽、半胱氨酸和血红蛋白等,发生亚硝化反应以亚硝基硫醇(S-Nitrosothiols,SNO_s)的形式贮存于细胞内。人体内SNO_s主要包括亚硝酰基谷胱甘肽(S-nitrosoglutathione,GSNO)、 浙江大学硕士学位论文 亚硝酞基半肤氨酸(S一nitrosoeysteine,CsNO)及亚硝酞基血红蛋白 (s一nitrosohemoglobin,SNO一Hb)等。sNOs的形成,既避免T NO与02/02‘的 结合,又可随血循环氧饱和度的高低及组织中O:梯度变化来调节NO水平从而 发挥调节血管张力的作用。 为了模拟内源性NO的特性,Duke大学的Stamler教授领导的小组筛选出 了ENO这种有机物。由于ENO的沸点低(17℃)常温下能气化,因此其可作 为一种候选气体用作吸入研究。ENO的基本特性是在O:存在下不易降解(在 100%O:中稳定)、能与谷肤甘肤反应生成GSNO、不易对血红蛋白氧化及有很 好的生物兼容性。对于ENO的初步研究发现,腹腔境手术过程中用ENO混合 COZ吹入腹腔,可显著减轻手术过程中腹腔脏器血流的减少,显示了ENO可选 择性扩张血管的作用;而用ENO吸入治疗肺动脉高压,也显示了其有选择性扩 张肺血管及改善氧合的作用,与传统的一氧化氮吸入治疗相比,它无明显的“返 跳”现象及毒性产物(如NO、)产生。这些初步研究成果提示ENO将可能成为 继NO’后吸入治疗的新的研究方向。 由于ENO在医学方面的研究尚处于起步阶段,不管是动物或临床实验中, 其应用的适宜剂量及毒性作用均无明确报道,所以本课题拟用细胞培养的方法, 通过研究不同浓度不同作用时间ENO对V79细胞生存率的影响,以了解ENO 的细胞毒性作用;并通过研究增加/消耗还原型谷肤甘肤(GSH)对ENO细胞 毒性的影响及ENO对细胞凋亡影响来探讨ENO产生毒性作用的可能机制。我 们期望通过本课题的研究,为今后实验中ENO应用剂量的选择提供依据,并为 进一步研究其毒性提供思路。 第一部分亚稍酸乙醋的细胞毒性作用研究 目的: 研究不同浓度不用作用时间ENO对V79细胞生存率的影响,探讨ENO可 能存在的细胞毒性作用。 浙江大学硕士学位论文 方法: l、ENO的合成、提纯和纯度测定: 合成:常温下,浓硫酸缓慢滴定亚硝酸钠、乙醇和水的混合溶液,产生气体 经冷凝后收集。 提纯:制得的液体状态ENO室温下经反复气化冷凝而纯化。 纯度测定:气相色谱法。 2、细胞培养:常规细胞培养。 3、MTT法研究不同浓度不同作用时间ENO对V79细胞生存率的影响(重复3 次)。 研究6个ENO浓度0、0.0001%、0.0005%、0.0025%、0.0125%、0.0625 %作用4h、sh、12h、24h对V79细胞生存率的影响,同时设空白对照组,以该 组生存率为100%。 4、乳酸脱氢酶法进一步确定0.0125%ENO作用4h的毒性作用。 设空白对照组:单加培养基作用4h; 对照组:加含l%乙醇的培养基作用4h; ENO组:加含0.0125%的ENO处理4h。 结果: I、ENO测定结果:ENO+乙醇99.7337%。 2、MTT结果: (1)、不同浓度ENO对细胞生存率影响 作用4h时,0.0125%和0.0625%组与0浓度组比较生存率均显著下降(P 0.01),0.0625%组较0.0125%组生存率更进一步下降(p0.01);作用sh、12h 和24h时,0.0025%、0.0125%和0.0625%组较0浓度组生存率均显著下降 (P0 .01),该三组间随浓度增加生存率逐渐下降(P均0.01)。 (2)、不同时间对细胞生存率的影响 O、0.0001%和0.0005%组,24h内各时间点无显著差异;0.0025%组,sh 浙江大学硕士学位论文 生存率较4h显著下降(P0.05),12h和sh无显著差异,24h较12h生存率更 进一步下降(P0.01);0.0125%组,8h生存率较4h显著下降(P0 .01),12h 和8h无显著差异,24h较12h生存率更进一步下降(P0 .01);0.0625%组8h 较4h生存率显著下降(P0.01),12h较sh生存率更进一步下降(P0.01),24h 和12h无显著差异。 3、LDH结果:0.0125%ENO作用4h后培养上清LDH显著增高(P0.05)。 结论: 1、成功合成并提纯ENO。 2、ENO具有一定细胞毒性,其毒性具有一定的浓度依赖性和时间依赖性。一 次性给予0.0125%的E
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R114

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 蔡文清;;妇科恶性肿瘤患者化疗的护理体会[J];临床误诊误治;2010年S2期
2 郭菁;;植入式静脉输液港在肿瘤患者中应用及护理[J];内蒙古中医药;2010年02期
3 吕素芳;郭广君;唐娜;魏凤;沈志强;;猪胸膜肺炎放线杆菌分子生物学研究进展[J];中国人兽共患病学报;2011年06期
4 李丽;李勇文;唐爱存;;甲基阿魏酸对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用[J];中药药理与临床;2011年03期
5 莫利求;兰爱平;林琳;周舸;张莉莉;杨春涛;王秀玉;杨战利;陈培熹;冯鉴强;;右美托咪定对抗化学性低氧引起的PC12细胞损伤[J];中国药理学通报;2011年09期
6 程琦;施光峰;;肝脏自然杀伤细胞在慢性肝病中的作用[J];临床肝胆病杂志;2011年07期
7 叶裕良;兰爱平;林琳;袁福利;周舸;张莉莉;莫利求;陈培熹;冯鉴强;;谷氨酸转运体-1在H_2S保护PC12细胞对抗化学性低氧损伤中的作用[J];中南医学科学杂志;2011年04期
8 高岑;马跃荣;史书龙;陈秋;;蜕皮甾酮对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质含量的影响[J];泸州医学院学报;2011年04期
9 何丽丽;段江曼;裘佳寅;于飞;刘叔文;李琳;;邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的活性研究[J];南方医科大学学报;2011年07期
10 邱芳;薛今琦;李晶;孟庆凯;;辛基酚对MCF-7乳腺癌细胞增殖及凋亡作用研究[J];中国现代应用药学;2011年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 全海天;楼丽广;;U0126增强combretastatin A4细胞毒性的作用不依赖于MEK[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
2 全海天;楼丽广;;p38MAPK在combretastatin A4介导的细胞毒性中起关键作用[A];2007医学前沿论坛暨第十届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2007年
3 樊彩妮;丁健青;陈生弟;汤荟冬;;β淀粉样前体蛋白羧基端肽对小鼠神经母细胞瘤细胞的毒性作用[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
4 魏翠柏;贾建平;;人参皂甙Rg1、Rb1抗Aβ25-35神经细胞毒性作用的研究[A];2009全国抗衰老与老年痴呆学术会议论文汇编[C];2009年
5 褚彬;朱平;袁谷;;二萘嵌苯类小分子Pery-2Dp对白血病K562细胞作用的基因表达谱分析[A];第一届全国难治性淋巴瘤学术研讨会暨第二届全国多发性骨髓瘤学术研讨会(国家级血液系统恶性肿瘤继续医学教育学习班)继续教育集[C];2007年
6 王以美;彭双清;阳海鹰;王国强;仲伯华;刘河;陈兰福;刘克良;;手性化合物盐酸戊乙奎醚及其光学异构体的细胞毒性作用[A];中国药理学会毒理专业委员会第十次学术会议论文摘要汇编[C];2004年
7 郑临;杨益大;吕国才;;慢性乙型肝炎患者与乙肝病毒携带者CD1c阳性树突状细胞表达TRAIL水平的比较[A];第十七次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2008年
8 张文元;边敏章;何浙生;;O_(157):H_7(浙江株)的细胞毒性作用及其意义探讨[A];浙江省医学科学院建院55周年院庆论文专辑[C];2005年
9 贾珍容;邱银生;王大菊;顾性初;王程;;齐多夫定对原代大鼠肝细胞的毒性评价[A];2007年全国药物毒理学会议论文集[C];2007年
10 周兆丽;缪泽鸿;于冰;蒋轶;童林江;丁健;;缺氧诱导因子HIF-1α表达上调与雷公藤甲素对人卵巢癌SK-OV-3的细胞毒性作用相关[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前9条
1 肖祥云;冬季三害您记着防[N];健康报;2008年
2 ;镇咳药如何使用[N];中国畜牧兽医报;2009年
3 主任医师 容小翔;过量饮酒易骨折[N];医药养生保健报;2009年
4 副主任医师 姚继霞;常食番茄健心防癌[N];中国老年报;2000年
5 陈雪寒;常食番茄 健心防癌[N];中华合作时报;2002年
6 陈雪寒;常食番茄 健心防癌[N];中国石油报;2001年
7 余志平;新途径带来新武器[N];医药经济报;2001年
8 傅德明;红霉素逆转乳腺癌多药耐药[N];中国医药报;2001年
9 本报记者 白毅;多胺可作为载体将药物转运至癌细胞[N];中国医药报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杜靖;亚硝酸乙酯吸入干预新生大鼠高氧肺损伤的实验研究[D];浙江大学;2006年
2 申俊;组蛋白去乙酰化酶抑制剂与顺铂联用对口腔鳞癌细胞作用的体外研究[D];四川大学;2007年
3 刘英霞;酵母朊蛋白Sup35NM及其变异体体外淀粉样纤维形成动态及其细胞毒性作用[D];中国协和医科大学;2007年
4 张金亮;新型非肽类小分子Caspase-3抑制剂的设计、合成、活性检测与分子对接研究[D];吉林大学;2009年
5 檀德宏;胆碱酯酶抑制剂类农药的神经毒性及机制研究[D];沈阳药科大学;2009年
6 曹军;姜黄素生物学作用的细胞与分子机制研究[D];大连医科大学;2006年
7 李晓波;金属氧化物纳米颗粒的神经毒性研究[D];华中科技大学;2008年
8 高旭辉;睾丸Sertoli细胞免疫豁免机制的研究及对大鼠同种心脏移植的影响[D];第一军医大学;2007年
9 王艳艳;马兜铃酸通过膜转运蛋白进入肾小管上皮细胞的研究[D];中国协和医科大学;2009年
10 郭春霞;商陆抗病毒蛋白抑制HBV复制的研究[D];华中科技大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈湘湘;亚硝酸乙酯的细胞毒性作用及可能机制探讨[D];浙江大学;2005年
2 蒋静静;一氧化氮和亚硝酸乙酯吸入对急性高氧肺损伤新生大鼠肺水通道蛋白的影响[D];浙江大学;2006年
3 闫永娟;亚硝酸乙酯再生反应工艺及动力学研究[D];天津大学;2008年
4 李海成;晚期糖基化终产物对人正常肝细胞的毒性作用及功能的影响[D];暨南大学;2009年
5 尹东学;滴流床反应器中亚硝酸乙酯合成新工艺研究[D];天津大学;2004年
6 周琪;芥基醇衍生物与新木脂素类化合物的合成及细胞毒活性研究[D];浙江大学;2006年
7 焦旸;亚硝酸乙酯溶解度测定及传质研究[D];天津大学;2008年
8 郑安祥;苦参碱对人骨肉瘤MG-63的毒性作用及其机制的实验研究[D];浙江大学;2005年
9 范明明;一氧化碳与亚硝酸乙酯气相催化合成碳酸二乙酯的研究[D];天津大学;2004年
10 何翠英;CO气相催化偶联制草酸二乙酯的宏观动力学研究[D];天津大学;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026