收藏本站
《浙江大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人β防御素3和植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein基因的重组表达研究

李春丽  
【摘要】:食品安全一直是人们关注的焦点,安全、天然的食品添加剂是保障食品安全的重要方面。人β防御素3(hBD_3)因其广谱高效的杀菌作用和较低的细胞毒性,有望成为新型食品防腐剂。植物des-pGlul-Brazzein甜蛋白因其高甜度和对pH、热的稳定性而有望成为新型甜味剂。本课题以大肠杆菌和甲醇酵母为宿主重组表达了hBD_3、des-pGlul-Brazzein以及两者的嵌合基因,并采用摇瓶发酵分析了适合三株重组大肠杆菌菌株生长和目的蛋白表达的发酵条件。主要结果如下: 采用细菌和酵母偏爱密码子分别合成了hBD_3、des-pGlul-Brazzein及两者的嵌合基因片段(中间加了一段编码凝血酶酶切位点的片段),这些编码序列被插入pET30a和pPIC9K载体,分别构建成重组载体pET-hBD_3、pET-Bra、pET-hBD_3-Bra和pPIC9K-hBD_3、pPIC9K-Bra、pPIC9K-hBD_3-Bra。 以E.coli为重组表达宿主,pET30a为表达载体,对hBD_3进行了融合表达,重组hBD_3融合蛋白占总蛋白的30.9%,实现了目的蛋白的高效表达。通过亲和层析和进一步酶切纯化得到了较纯的hBD_3蛋白,无论是重组hBD_3融合蛋白还是hBD_3蛋白对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性菌大肠杆菌都具有较高的抑菌活性,并且酶切后得到的hBD_3蛋白的活性比重组hBD_3融合蛋白高,完全可以与提取得到的天然hBD_3的活性相媲美。 以E.coli为重组表达宿主,pET30a为表达载体,对des-pGlul-Brazzein进行了融合表达,重组des-pGlul-Brazzein融合蛋白占总蛋白的35%以上,通过亲和层析和进一步酶切纯化得到了较纯的des-pGlul-Brazzein蛋白,两者的相对甜度分别是蔗糖的400和600倍,在80℃作用4h后其甜味并未丧失,说明得到的甜蛋白具有较强热稳定性。 以E.coli为重组表达宿主,pET30a为表达载体,对嵌合基因hBb_3-Bra进行了融合表达。hBD_3-Bra融合蛋白占总蛋白的30.5%,实现了在大肠杆菌中的高效表达。融合蛋白只有很弱的杀菌活性,但甜度约为蔗糖200倍,通过凝血酶切割纯化后,得到了具有明显杀菌活性的重组hBD_3融合蛋白和甜度约为蔗糖600倍的des-pGlul-Brazzein蛋白。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:TS201.1

手机知网App
【引证文献】
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 蒋瑞瑞;王彦彬;康相涛;孙桂荣;陈其新;韩瑞丽;田亚东;李国喜;;鸡β-防御素-11(Gal-11)cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达[A];中国家禽业——机遇与挑战——第十三次全国家禽学术讨论会论文集[C];2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 王长远;甜味蛋白Brazzein酵母表达系统的建立[D];黑龙江八一农垦大学;2008年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 任洪艳,张苓花,王运吉;人α-防御素HNP-1基因克隆及其结构分析[J];大连轻工业学院学报;2003年04期
2 李晓东,刘敬梅,陈杭,程智慧,柴敏;甜蛋白基因MBLII对番茄的遗传转化[J];西北植物学报;2004年05期
3 袁汉英,艾华水,范长胜,高卜渝,黄路生,李育阳;单链莫奈林基因表达载体的构建及其分泌表达[J];复旦学报(自然科学版);2003年04期
4 蔡绍晖,余懋群,杨晓鹃,杜军,黄宁,王伯瑶;重组人β-防御素-2基因的植物表达载体的建立[J];四川大学学报(医学版);2003年03期
5 李英,尹俊,张树军;植物甜蛋白monellin基因的合成和克隆[J];内蒙古农业大学学报(自然科学版);2001年03期
6 杨晓娟,陈静,马欣荣,余懋群,蔡绍晖,王伯瑶;人β-防御素-2植物表达载体的构建[J];四川大学学报(自然科学版);2002年S1期
7 范长胜;甜蛋白的开发与应用研究[J];食品与发酵工业;2001年12期
8 王维荣,刘爱民,钱志康,黄伟达;青岛海葵强心活性多肽在毕氏酵母中的分泌表达[J];生物化学与生物物理进展;2000年04期
9 黄音,刘飞鹏,周天鸿,朱嘉明;蛙皮素-蜂毒素杂合肽基因在大肠杆菌中的克隆与诱导表达[J];生物工程学报;2001年02期
10 彭毅,杨希才,康良仪;影响甲醇酵母中外源蛋白表达的因素[J];生物技术通报;2000年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 卢翠华,李晶,石瑛,陈伊里,王凤义,吕文河,秦昕,苏俊峰;几丁质酶基因转入马铃薯品种东农303的研究[J];中国马铃薯;2003年05期
2 方平,龚一富,陈永文,高峰;马铃薯和甘薯营养改良基因工程的研究进展[J];贵州大学学报(自然科学版);2001年04期
3 金红,罗智敏,陈峥,李戍彤,王永,魏众济,程奕;马铃薯抗晚疫病基因工程育种研究[J];华北农学报;2005年01期
4 焦改丽,郭三堆,李淑君,陈志贤,赵俊侠;棉花遗传转化和植株再生的研究[J];华北农学报;1997年02期
5 朱芳,乔宏宇,武丽敏;农杆菌转化系统在蔬菜育种上的应用及常见问题的探讨[J];吉林蔬菜;1998年06期
6 白斌;;基因工程技术在马铃薯育种中的应用研究[J];江西农业学报;2006年06期
7 姜国勇,薛静,张玉娜,吕荣臻;马铃薯转化体系中愈伤组织的诱导效应[J];莱阳农学院学报;1998年03期
8 周思军,李希臣,刘昭军,刘文萍,南相日;通过农杆菌介导将菜豆几丁质酶基因导入马铃薯[J];中国马铃薯;2000年02期
9 张宁,司怀军,李学才,王蒂;根癌农杆菌介导的马铃薯高效遗传转化体系的研究[J];中国马铃薯;2004年03期
10 王萍;王罡;季静;;马铃薯两个基因型不同外植体的组织培养与植株再生[J];中国马铃薯;2006年06期
中国重要会议论文全文数据库 前6条
1 黄骐;林建丽;王冰梅;叶冰莹;陈由强;陈如凯;;农杆菌介导花生白藜芦醇合酶基因转化马铃薯的研究[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
2 王萍;王罡;季静;;马铃薯不同外植体的组织培养[A];2006年中国作物学会马铃薯专业委员会年会暨学术研讨会论文集[C];2006年
3 郭丽;王娇娇;肖凯;;植物植酸酶的生化特征和转基因表达植酸酶的研究进展[A];作物逆境生理研究进展——中国作物生理第十次学术研讨会文集[C];2007年
4 杨宝军;郭淑华;王晓武;杜永臣;;Brazzein甜蛋白基因克隆及其番茄果实特异表达载体构建[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
5 盛金良;陈创夫;田晶华;杨霞;黄红卫;;绵羊防御素sBD1成熟肽编码基因的克隆及大肠杆菌中表达[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会论文集[C];2005年
6 解民;亢春雨;苏旭东;樊喜福;马小燕;李英军;张会彦;张伟;;β-防御素基因在毕赤酵母中分泌表达的影响因素及优化[A];2007中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨中国中部地区农产品加工产学研研讨会论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 宋波涛;马铃薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶小亚基基因的克隆与功能研究[D];华中农业大学;2005年
2 杨应华;人源多肽抗生素LL-37/hCAP-18的初步研究[D];中国协和医科大学;2003年
3 万家余;甲、乙型肝炎口服二价DNA疫苗的研究[D];吉林大学;2005年
4 郑伟;中国鲎(Tachypleus tridentatus)基因工程抗菌肽的制备及其生物活性研究[D];吉林大学;2005年
5 孟岩;抗真菌病基因对葡萄植物遗传转化的研究[D];东北农业大学;2001年
6 蒋盛军;甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化和转基因植株的有效再生[D];中国农业大学;2003年
7 李晋涛;人源轮状病毒的转基因马铃薯口服疫苗研究[D];第三军医大学;2003年
8 王清;马铃薯PPO活性变化规律及抗块茎损伤褐化的基因工程研究[D];甘肃农业大学;2003年
9 农友业;植酸酶基因的克隆及转化玉米的研究[D];广西大学;2005年
10 贾笑英;利用转基因技术培育马铃薯(Solanum tuberosum L.)高淀粉及抗病新品系[D];甘肃农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘忠渊;利用毕赤酵母系统表达功能蛋白的研究[D];新疆大学;2004年
2 陈丽;CTB-PROIN和CTB-INSB融合基因构建及其在大肠杆菌和植物中的表达[D];宁夏大学;2005年
3 赵传志;稻瘟病菌漆酶基因的生物信息学分析及其功能验证[D];福建农林大学;2006年
4 李景文;马铃薯转FMDV P1全长基因的研究[D];吉林大学;2005年
5 孙怡;用毕赤酵母表达皮蝇素A蛋白的研究[D];中国农业科学院;2005年
6 李洪利;用于毕赤酵母组成型表达的白斑综合征病毒(WSSV)VAP1基因的优化、克隆及大规模简易发酵技术初探[D];中国海洋大学;2005年
7 杨海峰;酸樱桃(Prunus cerasus)叶片离体再生方法的研究[D];内蒙古农业大学;2001年
8 侯爱菊;黄瓜抗真菌基因遗传转化体系的研究[D];东北农业大学;2001年
9 巩慧玲;农杆菌介导的mtlD基因转化马铃薯的研究[D];甘肃农业大学;2001年
10 王志林;反义ACC氧化酶基因对樱桃的遗传转化[D];内蒙古农业大学;2002年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵红玲,陈劲春;利用毕赤酵母表达植物甜蛋白(brazzein)的初步研究[J];北京化工大学学报(自然科学版);2005年02期
2 吴金梅,陈丽颖,王艳玲;抗菌肽的研究进展及应用前景[J];动物医学进展;2005年09期
3 余兴邦;郭锁链;乌翠兰;李大竣;呼格吉勒图;鄂优;;防御素研究进展[J];动物医学进展;2006年08期
4 田翠环,俞森洋;β-防御素与呼吸系统的防御和损伤[J];国外医学.呼吸系统分册;2004年03期
5 文加才,秦永忠,宋爱刚;阳离子抗菌肽的研究进展[J];国外医药.抗生素分册;2002年06期
6 洪华珠,彭蓉,彭建新,杨忠;新型抗感染生物活性物质——昆虫抗菌肽的研究进展[J];华中师范大学学报(自然科学版);2003年03期
7 高广华,戴继勋,丁鸣,GranHellekant,王金凤,王大成;耐热甜味蛋白brazzein的溶液NMR结构研究——二级结构和分子骨架[J];中国科学C辑;1999年06期
8 于健,邱芳萍,张玲;抗菌肽及其应用前景[J];长春工业大学学报(自然科学版);2004年01期
9 高永贵,关怡新,姚善泾;包涵体蛋白的变复性研究[J];科技通报;2003年01期
10 郭玉梅,戴祝英,胡云龙;家蚕抗菌肽的一些性质及抗肿瘤活性[J];南京师大学报(自然科学版);1995年01期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 李敏;高甜度monellin基因和透明颤菌血红蛋白基因在毕赤酵母中的表达[D];中国农业科学院;2003年
2 马卫明;猪小肠抗菌肽分离鉴定及其生物活性研究[D];中国农业大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 唐博;骆驼β-防御素caBD-1 cDNA的克隆及序列分析[D];内蒙古农业大学;2004年
2 邢海云;鸡β-防御素在大肠杆菌中的高水平表达及复性工艺研究[D];山西农业大学;2005年
3 朱丽;甜蛋白Brazzein在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达[D];山西农业大学;2004年
4 金喜新;猪细小病毒NS1与VP2基因表达及重组蛋白ELISA方法的建立[D];河南农业大学;2005年
5 齐珂珂;固始鸡、丝毛乌鸡和鸵鸟中性粒细胞中抗菌肽分离纯化和部分性质研究[D];河南农业大学;2006年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李丹青,徐飞,黄自然,陈章良;人工合成柞蚕抗菌肽D基因转入根癌农杆菌[J];蚕业科学;1990年02期
2 高书颖,郭蔼光;根癌农杆菌介导法获得烟草转人骨形成蛋白-3成熟肽基因植株[J];西北植物学报;2001年06期
3 王义琴,陈颖,白琴华,赵世民,李文彬,孙勇如;以小球藻为载体生产兔防御素的研究[J];高技术通讯;2001年09期
4 范长胜,陈永青,李爽,雷肇祖;超甜蛋白的基因工程及开发研究进展[J];工业微生物;1999年01期
5 卢文菊,罗进贤,何建国,张添元;人血管抑素基因工程菌发酵条件的初步研究[J];广州医学院学报;2000年03期
6 施建科,叶蕴华,田桂玲;有甜味的蛋白质[J];化学通报;1998年08期
7 蔡绍晖,杜军,陈新年,黄宁,王伯瑶;重组人β-防御素基因在COS-7细胞的转染表达[J];华西医科大学学报;2000年04期
8 黄伟达,王维荣,王京端,尚诚;海葵素结构功能与基因工程的研究现状与进展[J];中国海洋药物;1997年04期
9 吴世宣,赵淑珍,王革娇,杨希才,张春霞,王昕,田波;由卫星互补DNA单体构建的抗黄瓜花叶病毒的烟草基因工程植株[J];中国科学B辑;1989年09期
10 李燕红,刘飞鹏,朱嘉明,周天鸿,李月琴;抗菌肽A-蜂毒素杂合肽基因在大肠杆菌中的克隆与初步分泌表达[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);1999年05期
【相似文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 李春丽;人β防御素3和植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein基因的重组表达研究[D];浙江大学;2005年
中国知网广告投放
相关机构
>浙江大学
相关作者
>李春丽
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026