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《浙江大学》 2005年
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RAPD研究紫外诱变后的链霉菌AP19-1基因组DNA突变

李欧  
【摘要】:随机扩增多态性DNA(RAPD)利用一系列随机排列的寡核苷酸单链引物,以研 究对象的基因组DNA为模板进行PCR扩增,通过扩增产物DNA片段的多态性来检测 基因组DNA的多态性。然而,由于RAPD分析重复性较差和存在假带现象,如果没有 一个统一的优化条件,将导致试验结果的失真。通过对Mg~(2+)、dNTP、模板浓度、 引物浓度、‘Taq酶浓度等反应体系进行浓度梯度研究及对退火温度、退火至延伸 时的ramp速度、循环次数等反应条件进行优化。找出本实验室条件下的链霉菌 APl9-1的最佳RAPD扩增条件:扩增反应的总体积为20gl,其中包括1×buffer, 3.OmM MgCl_2 400μM dNTP,0.4m引物,2.5UT aq酶及200ng模板DNA,扩增程序 为94℃预变性5分钟,94℃变性30秒,36.4℃退火30秒,72℃延伸2分钟,共40 个循环,最后在70℃延伸10分钟。其中从退火到延伸的ramp时间为108秒。在获 得的最佳扩增条件的基础上,利用50种RAPD随机引物对野生型菌株及紫外诱变后 得到的高产菌株进行RAPD比较分析。发现引物BAO22能检测出高产菌株与野生株 差异,即高产株出现了两条特异性的条带,其大小分别为480bp和570bp左右。回 收特异性条带,经T—A克隆后测序,用BLAST程序在NCBI上进行比对,发现480bp 左右的条带与一种产志贺毒素(shiga toxin)的大肠杆菌的毒力岛基因簇中的 一段基因间序列有100%的相似性。推测此序列可能与APl9—1的抗生素相关基因 的调控有关。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q933

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 檀贝贝;孙蕾;杨振娟;武哲;张俊;张克诚;;武夷菌素产生菌阻断突变株的筛选及分析[J];中国生物防治学报;2012年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 王璇;玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63与其抗生素生物合成阻断突变株间的DNA多态性分析[D];河北农业大学;2008年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 刘春林,官春云,李木旬;植物RAPD标记的可靠性研究[J];生物技术通报;1999年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 姜慧芳,任小平;利用RAPD技术鉴定花生种质资源的差异[J];花生学报;2002年02期
2 唐荣华,高国庆,韩柱强,张君诚,钟瑞春,庄伟建;花生种质资源的遗传变异与DNA分子多态性[J];花生学报;2003年S1期
3 韩柱强,高国庆,韦鹏霄,唐荣华,钟瑞春;利用SSR标记分析栽培种花生多态性及亲缘关系[J];花生学报;2003年S1期
4 陈静,吴兰荣,胡文广,苗华荣,曹雅君;微卫星标记及其在花生上的研究[J];花生学报;2003年S1期
5 唐荣华,贺梁琼,高国庆,庄伟建,韩柱强,钟瑞春;多粒型花生的SSR分子标记[J];花生学报;2004年02期
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8 胡晓辉;吴兰荣;苗华荣;石运庆;崔凤高;陈静;;33个育成花生品种遗传多样性分析[J];花生学报;2010年02期
9 李杨;韩柱强;熊发前;王育荣;高国庆;;MFLP分子标记技术在花生上的应用初探[J];花生学报;2010年03期
10 王天菊;白德胜;何龙飞;李创珍;韦善清;;不同来源花生品种的ISSR分析及亲缘关系研究[J];花生学报;2011年02期
中国重要会议论文全文数据库 前8条
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2 曹家树;;RAPD技术在蔬菜育种上的应用[A];中国园艺学会首届青年学术讨论会论文集[C];1994年
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4 霍雨猛;何启伟;侯丽霞;赵双宜;;关于番茄抗根结线虫基因Mi的研究进展[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
5 马晓东;陈珊珊;李重九;;丙酰紫草素对烟草花叶病毒外壳蛋白的钝化作用研究初探[A];2008年全国有机质谱学术会议论文集[C];2008年
6 计汪栋;施国新;张慧;徐勤松;许晔;杜开和;;菹草对Hg~(2+)胁迫的生理和结构应答反应[A];中国植物学会植物结构与生殖生物学专业委员会、江苏省植物学会2007年学术年会学术报告及研究论文集[C];2007年
7 刘忠华;杨晓勤;张军;段修军;王健;董飚;龚道清;;鹅肝脏蛋白质提取与双向电泳分离技术[A];第五届中国畜牧科技论坛论文集[C];2011年
8 杨丽丽;胡红芳;宁保安;李晓芳;左佳;高志贤;;氯霉素高特异性抗体的制备与纯化[A];第三届中国奶业大会论文集(上册)[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 谷风林;酪蛋白美拉德产物的制备、性质及在烟草中的应用研究[D];江南大学;2010年
2 孙士生;人血清、唾液和H1N1流感病毒中的蛋白糖基化分析[D];西北大学;2011年
3 孙宇涵;秋水仙素诱导银杏2n雄配子低得率的机理研究[D];北京林业大学;2011年
4 李志勇;扁蓿豆种质资源遗传多样性机理的研究[D];中国农业科学院;2011年
5 何文锦;灰木相思无菌培养体系的建立与寒胁迫蛋白质组学的研究[D];福建农林大学;2007年
6 韦小敏;斜卧青霉胞外蛋白质组学分析与纤维素酶合成调控机制研究[D];山东大学;2011年
7 杨海燕;多胺对水生植物镉胁迫的缓解效应及机理研究[D];南京师范大学;2011年
8 陈辉;杜氏盐藻耐盐渗透调节与Ca~(2+)介导的渗透信号传导[D];华南理工大学;2011年
9 刘俊梅;水生栖热菌海藻糖合酶体外定向进化及重组菌BL35细胞透性化技术研究[D];吉林农业大学;2011年
10 熊鹏;血清细胞因子与精神分裂症的关系以及在诊断中的应用研究[D];云南大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王彦玲;我国玉米核心种质磷胁迫蛋白质表达差异和基因组SSR分析[D];郑州大学;2010年
2 毕思远;棒曲霉Asp-195v蛋白酶的特性及其功能cDNA片段克隆的研究[D];辽宁师范大学;2010年
3 王新新;~(60)Coγ射线辐照毛竹种子的生物学诱变效应[D];安徽农业大学;2010年
4 史瑜婷;酶法降低β—乳球蛋白含量的研究[D];安徽农业大学;2010年
5 蒲媛媛;白菜型冬油菜抗寒性的生理特性与蛋白质组的电泳分析[D];甘肃农业大学;2010年
6 程小丽;同时分离大豆蛋白和油脂的反胶束体系研究[D];河南工业大学;2010年
7 李磊;灰树花优良菌株的筛选及其液态发酵特性研究[D];河南工业大学;2010年
8 潘涛;一株酸性α-淀粉酶产生菌的筛选、发酵条件及基因克隆研究[D];河南工业大学;2010年
9 张晓丽;花生浓缩蛋白制备工艺及功能性研究[D];河南工业大学;2010年
10 陈阳;花椰菜种质资源的RAPD标记研究[D];中国农业科学院;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐丽芳;陈吉炎;罗光明;;分子标记技术及其在植物育种中的应用[J];食品与药品;2007年10期
2 王艳萍;张永生;张阳;左志晗;;产克拉维酸的棒状链霉菌突变株的选育[J];食品与发酵工业;2007年05期
3 朱传合;贺亚男;路福平;杜连祥;;微波对阿维拉霉素产生菌诱变效应的研究[J];现代生物医学进展;2006年04期
4 王世伟,齐小辉,刘军,马玉超,周东坡;AFLP技术在微生物分类鉴定、基因标定及遗传多样性方面的应用[J];生物技术;2003年05期
5 吕振岳,周达民,黄东东;AFLP标记及在微生物和动物中的应用[J];生物技术通报;2001年06期
6 彭燕;李戈;陈秀贤;曾会才;;抗生素产生菌诱变育种的研究进展[J];生物技术通报;2007年05期
7 黎裕,贾继增,王天宇;分子标记的种类及其发展[J];生物技术通报;1999年04期
8 李民;冯银刚;高杨;吴庆余;;谷氧还蛋白系统及其对细胞氧化还原态势的调控[J];生物物理学报;2007年05期
9 闫华超;高岚;李桂兰;;分子标记技术的发展及应用[J];生物学通报;2006年02期
10 徐安毕;王文泉;;几种分子标记方法相结合建立的新型分子标记方法[J];生物学通报;2007年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 李永亮;链霉菌Men-myco-93-63抗生素的提取纯化及生防制剂的研究[D];河北农业大学;2004年
2 刘华梁;Pavon76抗叶锈性基因的鉴定[D];河北农业大学;2006年
【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 檀贝贝;武夷菌素生物合成基因簇的克隆及分析[D];中国农业科学院;2011年
2 安欣;基于4种抗生素抗性诱变的Xenorhabdus bovienii YL002菌株抑菌活性研究[D];西北农林科技大学;2012年
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