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《浙江大学》 2005年
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细茎石斛多糖DMP4a-1的结构特性和免疫活性研究

陈璋辉  
【摘要】:石斛为名贵中草药,石斛多糖是其主要的有效成分。本文以药用石斛之一的细 茎石斛为材料,以从其茎断提取的多糖成分。DMP4a-1为研究对象,对其结构特性 作了进一步的分析;同时主要以巨噬细胞为模型研究了细茎石斛多糖DMP4a-1的 免疫调节活性,主要实验结果如下: 细茎石斛酸性多糖DMP4a-1为灰黄色絮状固体,紫外分析推测其为蛋白多糖; 经高效液相凝胶渗透色谱分析,根据标准曲线测得其分子量:Mw 3049;用其三甲基 硅醚衍生物进行气相色谱分析主要由葡萄糖,甘露糖,鼠李糖,阿拉伯糖和半乳糖 组成,其分子摩尔比为:2.873:2.850:1.762:1.279:1;红外光谱图中895 cm~-1 的吸收峰显示该多糖为β—D吡喃糖;高碘酸氧化分析表明糖链结构中存在1→4,1 →3及1→6 糖苷键其摩尔数比为1.194:2.430:1。由以上结果表明细茎石斛多糖 DMP4a-1 结构特性较为复杂,是一种β(1→3)-D吡喃杂多糖。 细茎石斛酸性多糖 DMP4a-1作用于对数生长期的巨噬细胞 RAW264。7后,用 双抗夹心ELISA法检测细胞培养上清中的TNF α浓度,发现细胞迅速分泌TNF α, 随刺激时间的延长,TNFα量亦明显增加(P0.01);进一步的浓度梯度实验证明在 12.5μg/ml时TNFα 分泌量即有显著升高(PO.01),随着DMP4a-1的刺激浓度升 高,TNFα量亦随着增加,说明其对巨噬细胞的刺激作用具有浓度依赖效应。同时, DMP4a-1激活RAW264.7细胞后,亦可诱导细胞NO生成量迅速增加,并且其生成量 也和DMP4a-1的浓度成正比。进一步的半定量RT-PCR分析结果提示DMP4a-1激活 RAW264.7促使TNFαmRNA表达上调,可能是TNFα 分泌量增加的直接原因。 另外,由MTI的改良试剂CCK-8检测实验表明DMP4a-1在体外培养条件下 可显著促进脾淋巴细胞的增殖(P0.05),但存在一个最适浓度,其范围在100- 200ug/ml之间。
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