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《浙江大学》 2005年
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人乙醛脱氢酶2基因的克隆及表达

裘丽珍  
【摘要】:人体中的乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)及乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)在乙醇代谢过程中发挥着重要的作用。若ADH及ALDH在人体内均充分具备,则能较快得分解乙醇,减少究竟对中枢神经的影响,因而即使摄入一定量的乙醇,其所含有的乙醇也能在很短时间内得到充分的代谢。在人体中,ADH在一般情况下是可充分表达,且表达量基本持平的。人群内缺乏ALDH的个体则较多,而ALDH的缺乏将导致乙醇不能被完全分解为水和二氧化碳,而是以乙醛的形式继续留存于体内,使人在酒后产生恶心欲吐、昏迷不适等中枢神经麻痹状态,即醉酒症状。其中的ALDH-2就是众所周知的有高度遗传多态性并与亚洲人群的饮酒行为密切相关的基因。近年来,随着人们对获得全新的、更有效的解酒保肝药物的需求日益迫切,关于ALDH的研究工作更显其深远意义。 本文采用PCR技术,克隆获得了人aldh2基因,构建质粒pUCm-aldh2并对其测序,发现其与预期序列完全一致。再以质粒pUCm-aldh2为模板进行PCR,并将这段含酶切位点的aldh2基因重组到原核表达载体pET22b(+)中,进行IPTG诱导表达,确认人ALDH-2蛋白已实现了高水平表达,最佳表达条件为37℃、1mmol/L IPTG浓度、诱导表达6h,表达量约占总蛋白的30%。二次洗涤包涵体,可以获得纯度较高的目的蛋白,这为工业化生产提供了条件。由于重组人ALDH-2融合了6×His标签,使用Ni~(2+)亲和层析纯化,可以获得超高纯度的目的蛋白,亲和层析结果表明,当咪唑浓度达到40mmol/L左右时,开始有目的蛋白洗出,直至咪唑浓度到达100mmol/L时结束。纯化后的目的蛋白经含有精氨酸的变性溶液稀释复性后,进行活性检测表明,该复性蛋白具有ALDH活性,比活力约为331.7U/mg。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R346

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 黄锟;赵玉凤;赵锦;雷明科;林宏楠;王存文;吴元欣;;人乙醛脱氢酶2基因在毕赤酵母SMD1168中的表达研究[J];中国医药生物技术;2010年01期
2 鞠建松;马宁;赵冉冉;刘景伟;徐书景;赵宝华;;假坚强芽胞杆菌中乙醇降解相关酶的克隆、表达及酶学特性[J];微生物学报;2013年04期
【参考文献】
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1 朱孔锡;乙醇脱氢酶乙醛脱氢酶基因多态性与酒精性肝病关系的研究现状[J];临床肝胆病杂志;2003年05期
2 罗怀容,张亚平;乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因研究进展及其与饮酒行为的关系[J];遗传;2004年02期
3 丁建华,吴建中,高长明,李苏平,周建农,曹海霞,苏平,周学富,丁保国,王如鸿;乙醛脱氢酶2基因多态性和饮酒习惯与肝癌的易感性[J];肿瘤;2004年04期
【共引文献】
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1 曹海霞,丁建华,吴建中,高长明,李苏平,周建农,苏平,刘燕婷,周学富,王如鸿,丁保国;泰兴汉族人乙醇脱氢酶Ⅱ基因型分布及其与饮酒习惯的关系[J];癌变.畸变.突变;2005年05期
2 游银伟,汪天虹,岳寿松;海洋青霉(Penicilliumsp.)FS010441的形态学观察和产纤维素酶性质初步研究[J];山东农业科学;2005年01期
3 李瑞国;朱秀敏;杨慧;;不同萌发期绿豆芽蛋白质含量的测定及营养价值分析[J];山东农业科学;2011年01期
4 葛宏华,孙莉宁,张其瑞;家蚕血淋巴蛋白的发育变化和BmLSP的纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年03期
5 孔小卫,李坤,江洪波;二甲亚砜对水稻浸种及苗期的后续效应研究[J];安徽大学学报(自然科学版);2002年03期
6 刘晓颖,丁毅;鸡脑P物质的制取及分析[J];安徽大学学报(自然科学版);2003年01期
7 朱华庆,陈飞,谢惠安,张萍;热击对水稻(O.sativaL.)叶绿素a,b及POR同功酶的效应[J];安徽大学学报(自然科学版);1998年04期
8 叶生梅;多菌联合固态发酵生产酒糟菌体蛋白饲料的实验研究[J];安徽机电学院学报;2001年04期
9 孔小卫;二甲亚砜(DMSO)对大豆萌发及幼苗期生理生化指标的影响[J];安徽机电学院学报;2002年04期
10 叶生梅,王岚岚,欧阳明;一株纤维素酶产生菌的固态发酵初步研究[J];安徽工程科技学院学报(自然科学版);2003年01期
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1 周亚军;康建波;刘妍菊;苏丹;马龙彪;;混合肉肌原纤维蛋白特性研究[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
2 龚加顺;胡小静;彭春秀;周红杰;;普洱茶及其原料多糖分子组成及光谱学特性研究[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第二卷)[C];2010年
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7 张娟;赵利;魏丽;刘建涛;曾志将;;贮藏温度和时间对蜂王浆水溶性蛋白质的影响[A];中国养蜂学会蜜蜂饲养管理专业委员会第十三次学术研讨会论文集[C];2007年
8 任慧霞;赵雪;聂晓燕;;健脾止遗片有效成分对家兔膀胱明胶酶作用的研究[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
9 曾义勇;陈洪;;超临界二氧化碳中的脂肪酶稳定性及香茅酯的合成[A];2006年中国香料香精学术研讨会论文集[C];2006年
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4 邵凌健;槐糖脂补料发酵及抗真菌、抗肿瘤活性的研究[D];山东大学;2010年
5 迟雷;基于过程控制优化的重组大肠杆菌高密度发酵研究[D];西北大学;2011年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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2 冷一非;嗜热链球菌抗噬菌体菌株的选育、培养及冻干发酵剂的研究[D];华中农业大学;2010年
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4 杜学敏;蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分组分的性质[D];河北大学;2007年
5 刘辉;红曲霉发酵提高γ-氨基丁酸含量的研究[D];安徽工程大学;2010年
6 洪伟;酪蛋白中血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的研究[D];安徽工程大学;2010年
7 王美花;里氏木霉swollenin在米曲霉中的表达和纯化[D];浙江理工大学;2010年
8 张袁;温特曲霉PZ322产岩藻多糖酶的液态发酵条件研究[D];安徽农业大学;2010年
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10 程小丽;同时分离大豆蛋白和油脂的反胶束体系研究[D];河南工业大学;2010年
【同被引文献】
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1 张晓霞;毛跟年;张云丽;;乙醇脱氢酶应用研究现状[J];动物医学进展;2007年12期
2 陆坚,韦宇拓,黄鲲,黄日波;运动发酵单胞菌乙醇脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达[J];工业微生物;2004年01期
3 李夏兰,蔡婀娜;从微生物细胞提取ADH的探讨[J];华侨大学学报(自然科学版);1997年02期
4 朱孔锡;乙醇脱氢酶乙醛脱氢酶基因多态性与酒精性肝病关系的研究现状[J];临床肝胆病杂志;2003年05期
5 陆晨晨;李宗亮;李盈叡;刘欢;金海如;;一株乙醇降解菌株的筛选、鉴定及其培养条件的优化[J];酿酒科技;2011年06期
6 彭惠;高毅;肖亚中;;一株高乙醇耐受的嗜热细菌Anoxybacillus sp.WP06的性质研究[J];生物工程学报;2008年06期
7 陈明杰;高明明;姚文兵;高向东;;大肠杆菌非偏爱密码子的数量及位置对外源蛋白表达的影响[J];中国药科大学学报;2008年06期
8 沈渔迪,范建华,崔玉华,周儒伦,王玉凤,田成华,周朝凤,王晶,赵竹林,白永贵,单松丘,康正姬,滕旭东,张宪武,樊智君,刘俊杰,张忠祥;中国蒙、汉族酒依赖与醇脱氢酶和醛脱氢酶基因多态性的相关研究[J];中华精神科杂志;1997年01期
9 赵玉凤;雷明科;吴元欣;王存文;;酿酒酵母乙醛脱氢酶活性检测反应体系优化[J];中国酿造;2008年09期
10 单鹏;;激活ALDH2可减轻心肌缺血的损伤程度[J];中国医药生物技术;2008年05期
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 孙莉;李智博;秦飞;邓帅;杨君;;人乙醛脱氢酶2的原核表达及其条件优化[J];基因组学与应用生物学;2012年02期
2 陈瑞;方剑;王静涵;;乙醛脱氢酶2基因在毕赤酵母中的表达和分离纯化[J];生物加工过程;2013年06期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 史勇;甜味蛋白Brazzein真核表达系统的建立[D];吉林大学;2011年
2 杨亚平;乙醇脱氢酶基因和乙醛脱氢酶基因的克隆及表达[D];安徽工程大学;2013年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 曹西蓉,吴德生;中国五个民族人群样本中酒精代谢相关酶基因多态型分布比较[J];卫生研究;2002年03期
2 丁建华,吴建中,李苏平,高长明,周建农,苏平,刘燕婷,周学富,丁保国,王如鸿;乙醛脱氢酶2基因多态性和饮酒习惯与肝癌、胃癌、食管癌的易感性[J];中国肿瘤;2002年08期
【相似文献】
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1 凌达;;垃圾食品偏好可能跟基因有关[J];心血管病防治知识;2009年02期
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8 杨志兴;杨学成;;免疫球蛋白轻链基因的结构、功能和表达[J];国际遗传学杂志;1986年01期
9 罗文娟;王传富;吕振华;刘湘萍;隋爱华;;人血小板源性生长因子B基因的体外扩增以及克隆和鉴定[J];中国临床康复;2006年25期
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1 刘佳瑶;郑光明;;鲮MSTN基因片段的克隆[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
2 王晓燕;施定基;贾晓会;田琪琳;黄希文;徐仰仓;何培民;;聚球藻7942磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因片段的克隆[A];中国藻类学会第八次会员代表大会暨第十六次学术讨论会论文摘要集[C];2011年
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4 李慧锋;李丽;李俊英;杨宁;;鸡PepT1基因5'调控区单核苷酸多态位点影响其在小肠中的表达[A];安全优质的家禽生产——第十五次全国家禽学术讨论会论文集[C];2011年
5 张倩;马文慧;赵梁军;;粗枝大叶黄杨中p5cs基因片段和3’端序列的克隆[A];中国园艺学会十届二次理事会暨学术研讨会论文摘要集[C];2007年
6 杜娟;梁晓红;曲忠花;张秋;曹丽丽;孙汶生;;HBV及其不同的基因片段对TRAIL诱导肝癌细胞凋亡的影响[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
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8 李泽孟;张劲;朱建宏;魏荣;蒋文英;刘建荣;张贺秋;张小平;任昭;王归真;杨璐;;慢性丙型肝炎患者HCV不同基因片段抗体应答与脂代谢关系[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
9 董燕;丁国富;李斌;和生琦;颜伟;周红;王仙园;;MRSA临床分离株青霉素结合蛋白2a的克隆、表达及鉴定[A];第五届全国烧伤救治专题研讨会烧伤后脏器损害的临床救治论文汇编[C];2007年
10 何桥;郭启高;李晓林;向素琼;汪卫星;梁国鲁;;不同倍性枇杷DELLA基因片段的PCR扩增的初步分析(摘要)[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年
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1 李燕燕 熊学莉;心脑血管病相关基因被发现[N];健康报;2006年
2 毛玉西;未来婴儿将有“基因说明书”[N];中国国门时报;2006年
3 张虎;高效菌株可以处理染料生产废水[N];中国纺织报;2005年
4 记者 耿挺;为T细胞“战士”打造“武器”[N];上海科技报;2008年
5 实习生 周英;得不得心脏病 基因说了算?[N];科技日报;2011年
6 ;性别基因 让男性易患帕金森[N];健康报;2006年
7 丁香;基因工程让蘑菇成为制药厂[N];中国医药报;2007年
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10 实习生 张梦然记者 徐玢;美成功制造出生命体完整基因组[N];科技日报;2008年
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1 段明;低温胁迫下番茄类囊体膜抗坏血酸过氧化物酶基因的表达和功能研究[D];山东农业大学;2012年
2 丁淼;构建基于热休克反应信号转导的“与门”基因电路及其在肿瘤靶向基因治疗中的作用机制研究[D];重庆医科大学;2012年
3 王刚;F9基因无义突变导致重型血友病的分子机制[D];山西大学;2013年
4 刘怀然;SARS冠状病毒S糖蛋白基因片段的表达及初步应用[D];东北农业大学;2005年
5 毛甜甜;基因工程改性变异链球菌替代疗法防龋研究[D];武汉大学;2013年
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7 韩建军;IL-24与endostatin双基因联合治疗肝癌的实验研究[D];山东大学;2011年
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9 赵小波;基因条码(DNA Barcode)在海藻系统学领域中的研究应用[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2013年
10 程方俊;黄颡鱼溃疡综合征病原菌及主要毒力因子研究[D];西南大学;2012年
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1 陆鸿燕;山羊Hr基因和RORα基因的克隆及序列分析[D];内蒙古农业大学;2010年
2 李风翠;转基因饲料中bar基因检测方法的研究[D];南京农业大学;2011年
3 陈燕;结核分枝杆菌Rv3717基因的克隆、表达及功能鉴定[D];大连医科大学;2011年
4 侯元春;棉铃虫活化蛋白激酶C受体1(RACK1)基因的研究[D];河南农业大学;2011年
5 吴广宇;两个野大麦CBLs基因家族成员的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
6 周雪莲;JAK3缺陷和网状发育不全的临床和分子诊断[D];重庆医科大学;2012年
7 郭珊;婴幼儿人巨细胞病毒临床分离株糖蛋白H基因多态性研究[D];华中科技大学;2012年
8 邱良焱;转Bar、Bt基因双抗稻米定性检测及其重组DNA降解的研究[D];南京农业大学;2012年
9 赵凯;食酸菌属中三价砷氧化细菌As(Ⅲ)氧化酶基因和调控基因的功能研究[D];华中农业大学;2010年
10 董娇;云南红皮梨PpCHS、PpDFR及PpPAL基因的克隆及其表达分析[D];西南林业大学;2012年
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