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三疣梭子蟹卵黄蛋白原的基因克隆及分子特征分析

杨帆  
【摘要】:卵黄蛋白原是一种特异性存在于无脊椎及低等脊椎卵生动物雌性个体中的蛋白质,是卵黄蛋白的前体。卵黄蛋白是无脊椎及低等脊椎卵生动物成熟的卵母纸胞的主要成分,也是其胚胎发育过程中的重要营养来源。目前,已有关于卵黄蛋白原在许多物种中的研究报道。在甲壳类中,迄今为止卵黄蛋白原的研究主要集中在虾类。而在另外一种具有重要经济价值的甲壳类动物蟹中,有关其卵黄蛋白原的研究尤其是其分子生物学方面的研究还较少见。本研究通过RT-PCR,RACE等技术克隆得到了三疣梭子蟹卵黄蛋白原的一个基因,该cDNA序列全长7846bp,含有一个7680bp的开放阅读框,编码一个含有2560个氨基酸残基的蛋白质。其5’和3’的非翻译区分别为27bp和139bp。将其开放阅读框翻译为氨基酸序列后进行BLAST,该序列显示了与其他已知的甲壳类卵黄蛋白原序列32%—75%的相似性。通过SDS-PAGE和Western blotting分析,在三疣梭子蟹的卵巢中,卵黄蛋白主要包含有三个亚基(102kD,100kD和85kD)和一些小分子量的多肽。通过Northern blotting分析,卵黄蛋白原基因主要在三疣梭子蟹的肝胰腺内表达,而且随着它的不同发育时期,肝胰腺内的表达特征有显著的变化。另外通过RT-PCR检测,发现在卵巢中也有卵黄蛋白原的表达。


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