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大豆异黄酮的提取与精制

龚凌霄  
【摘要】:大豆异黄酮是大豆生长过程中形成的次级代谢产物,是多酚类混合物,具有多种生物活性,特别是其防癌抗癌研究已成世界热门焦点。本文研究了从大豆胚芽粕中提取异黄酮,并进一步分离精制较高含量的产品的工艺技术。 首先,建立了异黄酮的HPLC分析方法。分析条件:Novapak C_(18)色谱柱(φ3.9×150mm,4μm),流动相:A——0.1%乙酸/水,B——0.1%乙酸/乙腈,梯度洗脱;流速为1.0mL/min,柱温为40℃,检测波长为254nm。 异黄酮的提取,采用渗滤的方式,60%乙醇,流速1.0BV/h,50℃的操作条件下,胚芽堆密度0.26g/mL,乙醇用量为4.0mL/g胚芽,在该条件下得到的粗提物总异黄酮含量为6.43%。 柱层析法对异黄酮粗品进行精制,但在此之前,为减少丙二酰型异黄酮在柱层析过程的损失,先对高温条件下异黄酮稳定性进行试验,并确定高温水解条件为100℃,水解5h。丙二酰型完全水解为乙酰型、非结合型和苷元型异黄酮。 采用聚酰胺树脂为层析介质,分别研究了动态吸附和解吸过程。并对影响吸附效果的流速、温度及上样浓度等因素进行了考察,确定吸附过程条件为:层析柱规格为φ1.2×53cm,在40℃,上样浓度为5mg/mL,流速1BV/h的条件下,聚酰胺对异黄酮的饱和吸附量为60.0mg/g,穿透吸附量为25.0mg/g,传质区高度为30.0cm; 异黄酮的解吸,以异黄酮产品的含量及异黄酮回收率为指标,对解吸溶剂浓度、温度及溶剂用量等因素进行考察,确定解吸操作条件为:40℃,流速1BV/h,洗脱剂为水1BV,50%乙醇1BV,95%乙醇2BV,产品收集为2.25~2.92BV,产品含量为41.11%,异黄酮回收率76.46%。


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