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《浙江大学》 2006年
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微流控芯片上单细胞分析的研究

孙悦  
【摘要】:检测单个细胞内化学组分,以及测定单细胞对外界刺激的成分变化,有助于理解基本细胞功能以及细胞内外联系,有助于检测和鉴别大量细胞群体中少量的不正常细胞,因此单细胞的研究在重大疾病早期诊断、治疗、药物筛选和细胞生理、病理过程的研究方面有重要意义,已成为目前生命科学、生化分析等学科研究的热门课题之一。 由于单细胞体积小,胞内物质浓度低,需要高灵敏度的检测方法,如激光诱导荧光(LIF)法。但是大多数胞内组分浓度低又无天然荧光,因此在解决微衍生的问题上还存有相当的空间。 最近,用微流控芯片技术对生物细胞的研究引起了广泛注意,在近些年来得到快速发展。微流控芯片微米尺寸的通道适于单细胞引入,操纵,反应,分离及检测。 本论文首次用芯片毛细管电泳—激光诱导荧光法定量测定了单个人血红细胞内的活性氧(ROS),将细胞进样、单细胞定位、溶膜和毛细管电泳分离,集成到一块玻璃微芯片完成。ROS包括超氧阴离子(O_2~(·-))、羟自由基(·OH)、过氧化氢等,它不但与衰老、动脉硬化、关节炎、细胞凋亡及癌变等密切相关,并且由于它易扩散和降解,普遍存在于各类细胞中,它还起细胞间信使分子的作用。因此,细胞内ROS的测定已受到普遍重视。我们用可透膜的双氢罗丹明123(DHR 123)作为衍生试剂,DHR 123无荧光,进入细胞后,以细胞本身作为微反应器,和细胞内ROS反应生成荧光产物罗丹明123(Rh 123),通过微芯片电泳激光诱导荧光法检测细胞内的Rh123,间接对细胞内ROS进行了定量。我们讨论了Rh123迁移时间随pH的变化,得到最佳检测条件,通过标准曲线法,定量测定了单个人血红细胞内ROS。该法由于避免了制备细胞悬液时溶剂的稀释作用,使分析灵敏度大大提高。方法检测下限为0.74amol,每分钟检测两个细胞,连续测定6个单细胞迁移时间的精密度为2.1%。为研究单细胞受外界刺激前后ROS的变化提供了方法和工具。 在微流控芯片单细胞分析中,细胞能够进入微通道是微流控芯片分析细胞的
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R329

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 池振兴;四环素类污染物毒性的微观机制研究[D];山东大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 罗国安,王义明;单细胞水平的分析方法研究及进展[J];分析化学;1995年08期
2 胡深,庞代文,王宗礼,程介克,李之望,樊友珍,胡宏镇;毛细管电泳安培测定鼠单个交感神经细胞中儿茶酚胺类神经递质[J];分析化学;1998年06期
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前8条
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5 李成武;高云华;陈志锋;李清岭;;毛细管电泳芯片简化安培检测系统的研制[A];第二届全国微全分析系统学术会议论文摘要集[C];2004年
6 叶成;;化学学科发展综合报告(2006)[A];化学学科发展研究报告(2006)[C];2006年
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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3 徐春秀;微流控芯片动态胞吞和高通量单细胞分析的研究[D];浙江大学;2011年
4 庄宝雄;奥沙利铂脂质体的生物学研究[D];中南大学;2011年
5 马德旺;合成高分子对视黄醛膜蛋白功能的影响及相应功能材料的研究[D];复旦大学;2010年
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7 张勃;毛细管电泳在药物筛选中的应用和技术开发[D];天津大学;2012年
8 周文婷;温度-pH敏聚合物脂质体的合成、结构、性质及相行为[D];华东理工大学;2011年
9 郭春海;电磁力扰动作用下微管道中液体流动与混合的特性研究[D];南京理工大学;2012年
10 李洪民;基于微流控芯片的细胞内活性氧(O_2~(·-)、H_2O_2)多组分的同时分析[D];山东师范大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 段岐荣;毛细管液相色谱柱的制备及应用[D];郑州大学;2010年
2 罗婷婷;基于微流控技术制备单分散性载药微球及体外释放研究[D];华东理工大学;2011年
3 赵新泊;基于SU-8厚胶工艺的SAR型微混合器设计及实验研究[D];浙江大学;2011年
4 徐亮;面向微流控芯片的压电无阀微泵的研究[D];浙江大学;2011年
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6 雷磊;新型吲哚类钙离子荧光指示剂的合成与性质研究[D];西北大学;2011年
7 李湘广;新型Carbopyronine荧光探针的设计及合成研究[D];西北大学;2011年
8 王洁;毛细管电泳技术在远志有效成分分析及其指纹图谱建立中的应用[D];山西医科大学;2011年
9 朱亚男;气相色谱及毛细管电泳在环境水样和化妆品检测中应用[D];吉林大学;2011年
10 苗丽娜;油页岩灰渣提取氧化铝和白炭黑工艺技术研究[D];吉林大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张银志;阮起郡;孙秀兰;;高效液相色谱法检测鸡蛋中3种四环素类抗生素[J];安徽农业科学;2008年02期
2 王梦禅;钟文英;陈建秋;;盐酸金霉素及其光降解产物对淡水藻生长的影响[J];安徽农业科学;2011年07期
3 魏瑞成;裴燕;政晓丽;朱旭博;陈明;王冉;;金霉素和其代谢物胁迫对小白菜幼苗生长和抗氧化酶活性及累积效应的影响[J];草业学报;2011年05期
4 高利宏;敖林;胡冉;刘晋祎;黄明辉;杨梦苏;曹佳;;四环素致BALB/c小鼠肝脏毒性的基因表达谱研究[J];第三军医大学学报;2006年06期
5 贺德春;许振成;吴根义;丘锦荣;秦国建;;四环素类抗生素的环境行为研究进展[J];动物医学进展;2011年04期
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7 陈杖榴,杨桂香,孙永学,黄显会,曾振灵;兽药和饲料添加剂残留的毒性与生态毒理研究进展[J];广东饲料;2001年01期
8 焦少俊;窦艳艳;陈良燕;浦海清;郑寿荣;尹大强;;四环素对苦草(Vallisneria natans)生长及细胞超微结构的影响[J];环境化学;2008年03期
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10 林琳;安婧;周启星;;土壤四环素污染对小白菜幼苗生长发育的生态毒性[J];环境科学;2011年08期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 高宁;过氧化物酶和谷胱甘肽的单细胞分析及DNA的单分子检测[D];山东大学;2006年
2 侯延民;亲水有机溶剂气浮浮选分离/富集环境水中四环素类抗生素残留研究[D];江苏大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 肖亮;土霉素对异育银鲫毒性和残留研究[D];华中农业大学;2008年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 黄益民,李稼,刘丹晶,虞欣,赵辉,张平成,白春礼;原子力显微镜对自由基损伤的红细胞膜表面精细结构的研究[J];北京生物医学工程;1999年01期
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9 胡深,庞代文,王宗礼,程介克,李之望,樊友珍,胡宏镇;毛细管电泳安培测定鼠单个交感神经细胞中儿茶酚胺类神经递质[J];分析化学;1998年06期
10 汪丛莹,庞志功,汪宝琪,张鹏;荧光法测定SD大白鼠不同脑区的单胺类神经递质[J];分析化学;1999年01期
【相似文献】
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4 胡兰荣,温伟,郑昌学,吴健,董志伟;脂质体包裹阿霉素的体外抗肿瘤作用[J];中国生物化学与分子生物学报;1991年05期
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7 李国锋,周日红,曾抗,侯连兵;维生素E脂质体的制备[J];中国现代应用药学;1997年04期
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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4 安身景;甘礼华;姚远;张付清;徐子颉;郝志显;陈龙武;;异丙酚与卵磷脂脂质体相互作用研究[A];中国化学会第十二届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2009年
5 涂良钰;李绍珍;;抗代谢中药剂型及对晶体上皮细胞作用的研究[A];全国首届中青年中医眼科学术研讨会资料汇编[C];1996年
6 黄虹;龚永生;范小芳;毛孙忠;胡良冈;;脂质体L-精氨酸对慢性低氧高二氧化碳大鼠一氧化氮代谢及其合酶基因表达的影响[A];第六次全国缺氧和呼吸病理生理学术会议论文摘要汇编[C];2003年
7 梁晓飞;王汉杰;田惠;罗浩;成靖;郝丽娟;常津;;新型载药磁性阳离子高分子脂质体的制备[A];天津市生物医学工程学会2008年年会暨首届生物医学工程与临床论坛论文集[C];2008年
8 赵大庆;高新风;裴奉奎;倪嘉缵;黄芬;;用NMR方法研究山莨菪碱与DPPC脂质体的相互作用[A];第七届全国波谱学学术会议论文摘要集[C];1992年
9 刘汉清;刘文雅;刘嘉;王娟;;硫酸铵梯度法制备苦参碱脂质体的工艺研究[A];中华中医药学会第九届制剂学术研讨会论文汇编[C];2008年
10 何春艳;刘庆良;;包裹乙肝表面抗原和天然骨架CpG ODN的脂质体乙肝疫苗的免疫原性和安全性[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
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7 白毅;沈阳药大脂质体研究成效突出[N];中国医药报;2005年
8 王维亮;“多肽蛋白脂质体”开发前景广阔[N];中国食品报;2009年
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10 王迪;siRNA药物剂型取得技术突破[N];医药经济报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙悦;微流控芯片上单细胞分析的研究[D];浙江大学;2006年
2 李斌生;载端粒酶ASODN-t的壳聚糖纳米粒的制备和对肝癌HepG-2细胞的转染[D];中南大学;2007年
3 刘屹;和厚朴酚脂质体治疗卵巢癌的实验研究[D];四川大学;2007年
4 郑顺贞;9-硝基喜树碱脂质体抗肝癌作用研究[D];华中科技大学;2011年
5 周青峰;海藻糖的发酵制备和保护机理的研究[D];华南理工大学;1997年
6 冯力蕴;复合荧光CdSe量子点的制备、表征与光学性质研究[D];中国科学院研究生院(长春光学精密机械与物理研究所);2006年
7 戚凤春;新型流感疫苗的研究[D];吉林大学;2006年
8 康建功;鲜无蹼壁虎抗肿瘤活性成分脂质体研制及抗肿瘤实验研究[D];中国海洋大学;2007年
9 于建斌;乙酰肝素酶反义寡核苷酸对恶性黑素瘤生长抑制作用的实验研究[D];郑州大学;2007年
10 肖华;毛细管电泳—激光诱导荧光检测应用于单细胞分析和多药耐药性研究[D];中国科学院研究生院(大连化学物理研究所);2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 贡亦清;5-氟尿嘧啶脂质体防治增生性玻璃体视网膜病变的实验研究[D];安徽医科大学;2004年
2 王筱亮;重组水蛭素脂质体鼻腔给药的研究[D];北京中医药大学;2005年
3 赵海英;促肝细胞生长素前体脂质体的研究[D];沈阳药科大学;2001年
4 吕文平;脂质体转染胞嘧啶脱氨酶基因(CD/5-FC)联合放射线治疗人直肠癌的实验研究[D];第三军医大学;2002年
5 薛同春;单抗Au_(14-1)-脂质体-p53基因转染载体的制备及其在宫颈癌U_(14)细胞中的表达[D];江西医学院;2004年
6 赵占中;新孢子虫NcSRS2 DNA疫苗的研究[D];中国农业大学;2005年
7 王亚军;脂质体流感疫苗的制备及免疫效果评价[D];吉林大学;2006年
8 王艳丽;汉防己甲素脂质体的研制[D];河南大学;2008年
9 姚伟荣;宫颈癌U_(14)细胞正丁醇提取物脂质体瘤苗的制备及其抑瘤效应观察[D];江西医学院;2003年
10 吕天润;神经生长因子脂质体的制备及药代动力学初步研究[D];南京医科大学;2004年
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