余甘子高效再生体系的建立及遗传转化条件的研究
【摘要】：余甘子是一种原产于亚洲南部地区,营养丰富的野生果树,具有极高的经济价值和药用价值,我国具有丰富的余甘子野生资源。余甘子的品种改良对余甘子大面积推广种植至关重要。由于余甘子遗传背景较复杂,许多园艺性状的遗传规律尚不清楚,使常规育种受到了很大的限制。植物基因工程技术在果树上的应用,为余甘子品种改良提供了新的途径。本文以余甘子下胚轴为外植体试材,研究了余甘子下胚轴器官形成和植株再生,建立了余甘子高效再生体系。在此基础上探讨了根癌农杆菌介导法对余甘子进行基因转化的研究,初步建立了余甘子遗传转化体系。为余甘子分子育种研究提供了技术参数,为通过基因工程有目的的改良余甘子某些性状莫定了基础。主要研究结果如下:
1.以余甘子下胚轴为外植体,通过器官发生途径诱导不定芽形成,建立了高效的再生体系。探讨了不同激素组合、外植体苗龄、外植体切段来源、AgNO_3处理、蔗糖浓度以及暗培养处理等对余甘子下胚轴再生的影响。结果表明,4周苗龄期下胚轴外植体在1/2MS(Murashige and Skoog,1962)+0.5μM NAA+5μM BA附加1mg/L AgNO_3、40g/L蔗糖的培养基上,进行14d暗处理后转到光下培养效果最好,5周后不定芽再生率达100%,平均每外植体再生不芽数为11.7个。
2.以余甘子下胚轴为外植体,探讨了各种抗生素对愈伤组织和不定芽形成的影响。结果表明,Kan明显抑制余甘子下胚轴的分化,当Kan浓度达到20mg/L时下胚轴的分化被完全抑制。在诱导不定芽形成中,Cef和Carb对下胚轴愈伤组织形成影响不大,但两者所有浓度处理对不定芽分化都有不同程度的抑制作用。相对而言,选用300mg/L Cef抑菌,对下胚轴不定芽的再生抑制作用较轻,也能够控制农杆菌的生长。综合考虑,余甘子农杆菌介导的遗传转化中,诱导下胚轴愈伤组织和不定芽形成宜选用Cef 300mg/L来抑制农杆菌的生长,Kan筛选的临界浓度为20mg/L。
【关键词】：余甘子 愈伤组织 暗处理 外植体 激素 不定芽再生 生根 蔗糖 AgNO_3 抗生素 根癌农杆菌 遗传转化 【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：S667.9
【DOI】：CNKI:CDMD:2.2006.084730
【目录】：
- 缩略语表7-8
- 中文摘要8-9
- 第一章 文献综述9-18
- 1.余甘子的生物学特性9-12
- 1.1 形态特征9-10
- 1.2 地理分布10
- 1.3 生态学习性10-11
- 1.4 余甘子果实类群和类型11
- 1.5 品种资源11-12
- 2.余甘子的营养成分和药用价值12-15
- 2.1 余甘子果实的化学成分12
- 2.2 余甘子果实的食用价值12-13
- 2.3 余甘子的药用和保健价值13-15
- 2.3.1 余甘子具有防癌作用13
- 2.3.2 余甘子果实具有延缓衰老的作用13-14
- 2.3.3 余甘子果实具有防肝损伤作用14
- 2.3.4 其它14-15
- 3.开发利用前景15
- 4.余甘子植物组织培养研究进展15-16
- 5.立题背景及主要研究内容16-18
- 第二章 余甘子高效再生体系的建立18-34
- 1.材料和方法18-21
- 1.1 试验材料18-19
- 1.2 试验设计19-20
- 1.2.1 激素组合和配比19
- 1.2.2 培养基种类19
- 1.2.3 外植体苗龄19
- 1.2.4 外植体切段来源19-20
- 1.2.5 蔗糖浓度处理20
- 1.2.6 AgNO_3浓度处理20
- 1.2.7 暗培养20
- 1.2.8 不定芽生根20
- 1.3 培养条件20-21
- 1.4 数据统计21
- 2 结果与分析21-30
- 2.1 激素种类和浓度对余甘子下胚轴愈伤组织和不定芽形成的影响21-24
- 2.2 培养基种类对余甘子下胚轴不定芽形成的影响24
- 2.3 外植体苗龄对余甘子下胚轴不定芽再生的影响24-25
- 2.4 下胚轴切段来源对不定芽再生的影响25-26
- 2.5 蔗糖浓度对余甘子下胚轴不定芽形成的影响26
- 2.6 AgNO_3浓度对余甘子下胚轴不定芽形成的影响26-27
- 2.7 暗处理对余甘子下胚轴不定芽形成的影响27-28
- 2.8 余甘子再生不定芽的生根28-30
- 2.8.1 NAA/IBA对再生不定芽生根的影响29
- 2.8.2 DA-6/CSN对再生不定芽生根的影响29-30
- 3.讨论30-34
- 第三章 根癌农杆菌介导的余甘子遗传转化条件探讨34-40
- 1 材料与方法34-38
- 1.1 供试材料、菌株及抗生素34-35
- 1.2 Kan对余甘子下胚轴不定芽形成影响35
- 1.3 羧苄青霉素对余甘子下胚轴不定芽形成影响35
- 1.4 头孢霉素对余甘子下胚轴不定芽形成影响35
- 1.5 农杆菌介导余甘子的遗传转化35-36
- 1.6 结果与分析36-38
- 1.6.1 卡那霉素对余甘子下胚轴愈伤组织和不定芽形成的影响36-37
- 1.6.2 Cef和Carb对余甘子下胚轴愈伤组织和不定芽形成的影响37-38
- 1.6.3 农杆菌介导余甘子的遗传转化38
- 2.讨论38-40
- 参考文献40-46
- Abstract46-48
- 图版说明48-49
- Explanation of Plates49
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