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《浙江大学》 2007年
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产D-氨基酰化酶菌株的选育

刘伟  
【摘要】: D-氨基酸作为医药、农药、食品添加剂等的组成部分,已越来越得到人们的重视,D-氨基酸的开发利用已经成为氨基酸产业的一个新热点。采用化学合成结合手性拆分的方法制备D-氨基酸,具有低成本、适于大规模生产等优点。而高效、绿色、安全的氨基酰化酶法拆分,是拆分氨基酸的最佳方法之一。 D-氨基酰化酶(EC.3.5.1.81,N-D-AAase)能专一性地水解N-酰基-D-氨基酸,得到高对映体过量值的D-氨基酸。因此,高活力和高立体选择性的D-氨基酰化酶的生产菌株的选育和产酶条件的优化,是高效、低成本制备D-氨基酸的基础。 本工作以N-乙酰-D-蛋氨酸(N-Acetyl-D-methionine)作为分离平板中的唯一碳氮源,从土样中筛选产D-氨基酰化酶的微生物菌株,得到一株酶活力和立体选择性均较高的菌株B'3。同时分析了酶催化体系温度、pH值等因素对D-氨基酰化酶活力的影响。实验结果表明最佳工艺为:温度37℃,转化体系pH值7.8,菌龄36h左右。D-氨基酰化酶在最适转化条件下酶活可以达到15U/ml。 以菌株B'3出发菌株,采用紫外线和NTG复合诱变方法,获得高D-氨基酰化酶活力的突变菌株,酶活达到30U/ml。通过单因素实验对突变菌株的培养条件进行优化。在单因素实验的基础上,进行正交实验。当胰蛋白胨的浓度为2.5%,N-Ac-D,L-Leu的浓度1.6%,K~+浓度为0.223%,Mg~(2+)浓度为0.16%时酶活最高,达到74U/ml。 通过对粗酶水解N-乙酰-D-蛋基酸条件的研究,确定了D-氨基酰化酶催化转化所需的适宜条件为:转化体系温度为37℃,pH值为7.8,低浓度的Zn~(2+)对酶活有激活作用。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:TQ920.1

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