收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

SAM高产酿酒酵母菌株的诱变选育和高密度发酵培养以及SAM的分离纯化

杜银明  
【摘要】: S-腺苷-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,简称SAM,SAMe或AdoMet),是存在于所有生物体内的重要代谢中间物质,作为甲基供体参与体内许多关键的生化反应。SAM对肝病、抑郁症、关节炎等疾病均有显著疗效,在医药行业和保健品领域得到广泛的应用。目前国内对SAM的研究尚处于实验室水平,早日实现SAM的工业化生产具有重大的社会意义和经济效益。本文主要研究了SAM高产酿酒酵母菌株的诱变选育和高密度发酵培养以及SAM的分离纯化。 酿酒酵母(S.cerevisiae)胞内积累SAM的能力要比其它的微生物高出许多,是目前工业化发酵生产SAM的主要菌株。本文通过对十种酵母菌株胞内积累SAM能力的考察,筛选到一支SAM高产菌株ZJUSC007,其SAM单位产量为297.82mg·L~(-1),胞内含量为37.76mg·gDCW~(-1)。 酿酒酵母细胞中,通过甲基化反应合成麦角固醇是SAM的主要消耗途径之一。以ZJUSC007为出发菌株,通过紫外线诱变的方法,以制霉菌素抗性为筛选标记,获得了具有麦角固醇合成缺陷的突变菌株。确定紫外线照射时间为20s,制霉菌素浓度为15mg·L~(-1)。总共对364个突变株进行了复筛,最终得到一支SAM高产突变菌株ZJUSCM186,其单位产量为450.07mg·L~(-1),胞内含量为62.73mg·gDCW~(-1),比出发菌株分别提高了42.24%和57.02%。通过单因素实验对突变菌株的培养条件进行优化。结果表明:初始葡萄糖30g·L~(-1),酵母提取物5g·L~(-1),(NH4)_2SO_4 5g·L~(-1),K~+ 0.15M,补加L—甲硫氨酸1g·L~(-1),转化时间30h,最终SAM单位产量达到582.59mg·L~(-1),胞内含量达到71.52mg·gDCW~(-1)。 考察了三种不同的酿酒酵母细胞在高密度发酵培养过程中生产SAM的能力。结果表明:突变菌株ZJUSCM186的SAM单位产量和胞内含量以及菌体密度都很低,分别只有0.43g·L~(-1),6.6mg·gDCW~(-1)和55,不适合用来高密度发酵培养生产SAM。酿酒酵母SC021的菌体密度高达300,SAM产量接近3.0g·L~(-1),胞内含量达到43mg·gDCW~(-1),基本实现了高密度发酵培养生产SAM的目标。基因工程菌ZJUSCG054是以酿酒酵母SC021为宿主菌,其高密度发酵培养过程与SC021十分相似,SAM产量和胞内含量均略高于SC021。 采用HD—2树脂对SAM进行分离纯化。确定最佳吸附条件:流速2.0BV·h~(-1),料液浓度10.11g·L~(-1),pH5.0;最佳洗脱条件:硫酸浓度0.1mol·L~(-1),洗脱流速2.0BV·h~(-1)。洗脱液中SAM的HPLC纯度达到98.16%;洗脱效率91.78%,回收率71.29%。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 戴耀勋;王灿珍;黄培仁;童葵塘;;高密度发酵后的重组人α_1型干扰素基因序列分析[J];生物制品学杂志;1988年00期
2 李华;;高速公路SAM级单坡型混凝土防撞护栏施工技术分析[J];公路交通科技(应用技术版);2017年05期
3 党玮;;基于SAM的宏观统计数据质量评估方法研究[J];统计与信息论坛;2013年08期
4 党玮;;基于国民经济核算的SAM表式结构内在机理分析[J];统计与决策;2012年21期
5 李晖;董国成;居鹤华;;基于SAM模糊行为控制的月球车运动规划方法[J];计算机测量与控制;2013年11期
6 杨国震;;SAM身份认证系统在高职院校中的应用分析[J];天津市财贸管理干部学院学报;2009年01期
7 董卫军;周明全;耿国华;;基于sam多小波的图像压缩[J];计算机应用与软件;2006年05期
8 姚宇峰;曲立艳;;编组站SAM系统停车器自动控制功能的研究与设计[J];铁道通信信号;2011年03期
9 贺永宜;SAM中的集合函数[J];天津工程师范学院学报;2005年01期
10 ;吉林省居民健康卡安全存取模块(SAM)卡 管理工作规范(试行)[J];吉林医学信息;2016年12期
11 邢科家;蒋元华;;编组站SAM系统作业信息流程整合原则的研究[J];铁道通信信号;2011年03期
12 李明泽;张培赢;;基于SAM算法的遥感影像湿地植被分类[J];森林工程;2015年02期
13 柴家前,陆庆泉,沈志强,刘吉山;大肠杆菌高密度发酵研究进展[J];中国预防兽医学报;2000年06期
14 许展瑛;韦泰奎;;SAM系统驼峰头部尾部自动防护软件编制[J];铁道通信信号;2016年03期
15 罗亚玲;蒋峥;张世强;;显著性分析(SAM)方法在乳腺癌基因芯片数据分析中的应用[J];数学的实践与认识;2015年01期
16 张长拴;王文祥;;扫描俄歇微探针(SAM)对掺镧氨合成催化剂表面特征研究[J];河南科学;1992年03期
17 戚薇;铁瑛;;SAM合成酶基因的克隆及在酿酒酵母中的高效表达[J];天津科技大学学报;2008年04期
18 陈洪章,李佐虎;酵母菌的高密度发酵[J];工业微生物;1998年01期
19 陈艳;史景超;钱佩玲;;基于SAM模型的软件资产管理研究和实践[J];华东电力;2013年08期
20 何小时,马鑫,古关华;电子封装失效分析新技术——双波透射SAM[J];电子产品可靠性与环境试验;2002年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 尚飞;王峥;谭天伟;;酿酒酵母高密度发酵技术及其应用[A];中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会论文摘要集[C];2006年
2 宋留君;孔毅;周长林;;高密度发酵的影响因素[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年
3 范金;梅娟;;2004年中国农村居民消费SAM的编制[A];Well-off Society Strategies and Systems Engineering--Proceedings of the 13th Annual Conference of System Engineering Society of China[C];2004年
4 何金海;吴志伟;李建平;韩桂荣;;东北冷涡异常对梅雨的影响及前期SAM的异常信号[A];中国气象学会2005年年会论文集[C];2005年
5 杜银明;徐志南;岑沛霖;;高产SAM的制霉菌素抗性酿酒酵母菌株的诱变选育[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(上)[C];2006年
6 刘晓慧;梁昌勇;;基于SAM的企业云计算战略规划路径决策[A];第八届(2013)中国管理学年会——管理与决策科学分会场论文集[C];2013年
7 张祎昕;王磊;刘武军;杨薇;赵宗保;;端位烯烃取代的SAM类似物在蛋白质修饰中的应用[A];第八届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2013年
8 张兴群;王梁华;焦炳华;缪辉南;袁勤生;;高密度发酵制备重组人OCIF活性域多肽融合蛋白[A];中国海洋生化学术会议论文荟萃集[C];2005年
9 陈保立;王世立;韩金祥;;VHb在工程菌高密度发酵中的应用研究进展[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
10 后雯璟;庄炜;魏雅;李红丽;吴霞琴;;葡萄糖氧化酶在SAM修饰电极上的直接电化学及其应用研究[A];上海市化学化工学会2006年度学术年会论文摘要集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 熊智强;还原型谷胱甘肽高产菌的胁迫生理特性与高密度发酵过程优化技术[D];华东理工大学;2011年
2 商婷婷;耐热木聚糖酶重组酵母高密度发酵工艺及其生物学特性研究[D];中国农业大学;2017年
3 迟雷;基于过程控制优化的重组大肠杆菌高密度发酵研究[D];西北大学;2011年
4 徐兆华;基因芯片数据统合分析方法的若干拓展[D];浙江大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杜银明;SAM高产酿酒酵母菌株的诱变选育和高密度发酵培养以及SAM的分离纯化[D];浙江大学;2007年
2 任淑东;裂殖壶菌高密度发酵和农副产品处理液利用[D];大连理工大学;2018年
3 高志敏;Lactobacillus fermentum IMAU 10129高密度发酵工艺研究[D];内蒙古农业大学;2017年
4 徐晓肆;SAM公司供应商评价改善研究[D];苏州大学;2016年
5 张鑫;基于新疆地区SAM的产业发展路径选择研究[D];新疆财经大学;2015年
6 李运明;基于SAM的基因表达谱数据分析方法研究及应用[D];第四军医大学;2008年
7 李岚;哈尔滨南编组站SAM控制系统运作管理研究[D];吉林大学;2016年
8 谭植红;SAM公司多元化经营优化研究[D];中南大学;2012年
9 丁兰宝;重组大肠杆菌高密度发酵研究[D];江南大学;2008年
10 方德林;基于SAM的河南省水资源乘数分析[D];河南大学;2014年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978