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《浙江大学》 2007年
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PRIMA-1诱导骨肉瘤细胞珠MG-63凋亡的研究

吴荣寰  
【摘要】: 目的研究PRIMA-1对人骨肉瘤细胞珠MG-63的增殖和凋亡的影响,并探讨其可能发生的机制。 方法分别以50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml的PRIMA-1与P53突变型人骨肉瘤细胞MG-63共培养48小时。相差显微镜下观察细胞的形态变化,采用MTT法检测PRIMA-1对细胞MG-63增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡发生率,同时逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测Bax mRNA、PUMA mRNA、bcl-2 mRNA的变化,Western-Bloting检测P53、P53Ser15、Bax、PUMA、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达变化情况。 结果分别以50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml的PRIMA-1与P53突变型人骨肉瘤MG-63细胞共培养48小时后,相差显微镜下见死细胞逐渐增多,活细胞逐渐变少,细胞分布稀疏,细胞内碎片增多。MTT法检测PRIMA-1抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制率分别为(3.6±0.8)%、(15.2±1.2)%、(50.1±2.3)%、(63.3±3.5)%、(68.7±4.3)%(P<0.05);流式细胞术检测细胞早期调亡百分率分别为(45.2.1±2.8)%、(36.5±3.8)%、(27.1±3.1)%(11.7±0.6)%和(3.4%±0.3)%,晚期调亡百分率分别为(11.4±1.1)%(12.6±1.9)%、(13.9±1.6)%、(24.2±2.5)%、(40.4±3.6)%(P<0.05)。逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)显示Bax mRNA、PUMA mRNA表达均增高,bcl-2 mRNA表达明显降低。Western-Bloting检测到P53、P53Ser15、Bax、PUMA、Caspase-3、Caspase-9表达明显上调,而bcl-2表达明显下调。 结论PRIMA-1在体外能显著抑制P53突变型人骨肉瘤细胞MG-63的增殖并诱导其调亡,这种机制可能依赖于促进MG-63细胞P53蛋白的表达,并恢复突变P53蛋白的野生型结构和功能,从而进一步上调Bax和PUMA的表达,下调bcl-2的表达。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R738.1

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