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《浙江大学》 2006年
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空气或纯氧复苏宫内窒息新生大鼠血气和大脑SOD水平的比较

朱佳骏  
【摘要】: 背景 新生儿窒息是常见临床问题,也是导致新生儿早期死亡和远期神经系统后遗症的重要原因之一。正确的新生儿复苏技术能有效降低窒息新生儿死亡率,减少神经系统后遗症,对提高人口素质具有重要意义.一直以来,人们普遍接受采用纯氧作为新生儿复苏气源的做法,而事实上这种做法缺乏足够的理论依据。随着对新生儿窒息后病理生理学改变,以及高浓度氧气可能对新生儿产生不良后果的了解,新生儿复苏气源的选择问题开始受到重视。尽管目前有关新生儿复苏气源选择的问题仍然存在争论,但是保证复苏气源的有效性和安全性是此问题的关键。 上世纪80年代,欧美等发达国家学者开始对空气作为新生儿复苏气源的有效性进行研究,此类研究大部分为动物实验,以新生动物缺氧缺血性脑损伤为研究模型,比较空气和纯氧复苏的效果。但是由于这些研究以生后数天健康稳定的新生动物为对象,忽视新生动物白宫内向宫外过渡的环节,故对此类动物模型进行复苏不能很好地反映新生儿窒息复苏的真实过程。此外,简单地以动物缺氧缺血性脑损伤模型来替代新生儿窒息也不十分恰当。为使有关新生儿复苏气源选择问题的动物实验内容更接近人类新生儿窒息,有必要建立更为合理的动物模型。 氧自由基(reactive oxygen species,ROS)包括超氧阴离子、羟自由基、氢过氧化物及超氧氮化合物等。ROS由于电子不配对,具有高度生物活性,会对许多细胞成分如脂质、蛋白质及DNA等造成损害。此外其还可通过多种机制触发细胞凋亡。目前研究表明,机体组织在缺氧缺血后再灌注过程中,会产生一定数量ROs,从而进一步加重组织细胞的损伤。所以在新生儿复苏气源选择问题中,组织产生氧自由基的水平可以作为评价内容之一。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)是机体重要的ROS清除剂之一,其活性下降可作为评定氧自由基生成的指标,而且其含量变化还可以间接地反映组织氧自由基的数量,进而预测组织细胞可能受到氧自由基损伤的程度。 本次研究通过建立与人类窒息新生儿更为接近的宫内窒息新生大鼠模型,比较采用空气或者纯氧复苏后,新生大鼠复苏后短期死亡率以及复苏后新生动物血气变化和大脑SOD水平等方面的差异,为新生儿复苏气源的选择提供一些实验依据。 方法 第一部分:宫内窒息新生大鼠模型的建立 建模前根据抽签法随机决定每只新生大鼠的分组,参照Loidl和Harald H的方法建立宫内窒息新生大鼠模型。取孕龄21天清洁级SD大鼠8只,分别将其断头后,以下腹正中线切开腹部,迅速剖宫娩出对照组新生大鼠,结扎并离断含有剩余胎鼠的子宫,将其置于37℃生理盐水中水浴15分钟,然后再剖宫娩出窒息组新生大鼠。所有纳入研究的新生大鼠体重要求在4.5-5.5克,雌雄不限。对照组新生大鼠12只,宫内窒息组新生大鼠14只。观察各组新生大鼠出生当时的表现,并在生后30秒内断头取血,比较各组新生大鼠血气结果。 第二部分:空气或纯氧复苏宫内窒息新生大鼠血气及大脑SOD水平比较 建模前根据抽签法随机决定每只新生大鼠的分组,参照第一部分方法建立动物模型。取孕龄21天的清洁级SD大鼠7只,分别对其进行剖宫产,得到对照组新生大鼠24只,宫内窒息后采用空气复苏组新生大鼠26只,采用纯氧复苏组新生大鼠27只。对照组新生大鼠剖宫产娩出后,迅速擦干其全身后置于已预热至28-30℃的环境中。宫内窒息新生大鼠剖宫产娩出后,迅速擦干其全身后分别置于已预热至28-30℃的空气或纯氧环境中,通过刺激新生大鼠口周及腹部皮肤促其自主呼吸的方法进行复苏,复苏时间为30分钟。如新生大鼠在复苏时间结束后仍无自主呼吸,同时肤色灰白,对外界刺激无反应,即被认为死亡,不再进行后续研究。我们首先判断复苏后0小时新生大鼠的存活情况,然后根据抽签结果分别于复苏后0小时,6小时,24小时断头处死存活新生大鼠,取血进行血气分析,取大脑组织进行SOD水平检测。 结果 第一部分宫内窒息新生大鼠模型的建立 1各组新生大鼠出生当时的表现:宫内窒息组新生动物剖宫产娩出后,85.7%(12/14)新生大鼠未立即出现自主呼吸,14.3%(2/14)出现微弱呼吸;所有新生大鼠肤色呈灰白色;对照组新生大鼠剖宫产娩出后,100%(12/12)新生大鼠立即出现自主呼吸,肤色均呈粉红色。 2各组新生大鼠血气的比较:宫内窒息组新生大鼠血气pH,PO_2,PCO_2,BE分别为6.70±0.11,39.7±5.2mmHg,90.4±10.6mmHg,-21.3±2.2mmol/L,对照组新生大鼠血气pH,PO_2,PCO_2,BE分别为7.13±0.04,46.5±5.6mmHg,59.2±7.8mmHg,-8.2±2.9mmol/L,两组比较,各指标差异均有显著性统计学意义(P<0.01)。 第二部分空气或纯氧复苏宫内窒息新生大鼠血气和大脑SOD的比较 1各组新生大鼠死亡率的比较:纯氧复苏组新生大鼠复苏后死亡率为3.7%(1/27),空气复苏组新生大鼠复苏后死亡率为0(0/26),对照组新生大鼠死亡率为0(0/24)。各组比较,差异无显著性统计学意义(P>0.05)。 2各组新生大鼠血气的比较:纯氧复苏组新生大鼠复苏后0小时血PO_2明显高于采用空气复苏组(69.2±8.2mmHg vs 55.5±10.3mmHg)。两组比较,差异有显著性统计学意义(P=0.004)。纯氧复苏组新生大鼠复苏后0小时血pH,PCO_2,BE分别为6.97±0.05,60.3±12.4mmHg,-17.7±2.0mmol/L,空气复苏组血pH,PCO_2,BE分别为6.99±0.10,60.4±12.8mmHg,-17.0±2.5mmol/L。两组比较,各差异均无显著性统计学意义(P>0.05);采用纯氧复苏组新生大鼠复苏后6小时、24小时血pH,PO_2,PCO_2,BE与空气复苏组比较,各差异均无显著性统计学意义(P>0.05)。 3各组新生大鼠大脑SOD水平的比较:纯氧复苏组新生大鼠复苏后0小时,6小时大脑SOD水平分别为38.3±9.8U/mgprot,8.6±3.6U/mgprot,空气复苏组新生大鼠复苏后0小时,6小时大脑SOD水平分别为53.8±10.6U/mgprot,13.0±4.6U/mgprot。两组比较,各差异均有显著性统计学意义(P<0.05)。纯氧复苏组新生大鼠复苏后24小时大脑SOD水平与空气复苏组比较,差异无显著性统计学意义(P>0.05)。空气或纯氧复苏组新生大鼠复苏后0小时,6小时,24小时大脑SOD水平均低于对照组(P<0.01)。 结论 1本法建立的宫内窒息模型效果可靠,且更类似于人类新生儿窒息的临床表现及血气特征。 2采用空气复苏不会增加窒息新生大鼠短期死亡率,同时能够避免高氧血症发生的危险。 3采用空气复苏能减少宫内窒息新生大鼠大脑氧自由基产生的数量,对机体有一定的保护作用。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R722.12

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