收藏本站
《浙江大学》 2006年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

β防御素1基因单核苷酸多态性与脓毒症发生发展的相关性研究

吕晨  
【摘要】: 研究背景 脓毒症(sepsis)系微生物入侵机体感染后所致的全身性炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS),机体促炎症反应和抗炎症反应间的不平衡及免疫功能的失调和凝血纤溶系统的异常是其发生、发展的病理生理基础。重症脓毒症(severe sepsis)、脓毒性休克(septic shock)及多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)是脓毒症的后续症。脓毒症是重症监护病房(ICU)中高发及高致死率的主要疾病,它是一种环境因素(病源微生物)和遗传因素共同作用的多基因病,多个常见的、微效的遗传变异独立或相互间通过目前尚未能阐明的分子机制在脓毒症的发生、发展中起着一定的作用,不同个体对脓毒症的易感性和预后存在明显的差异,这种个体间的基因背景差异和基因多态性,影响了个体对感染及创伤所致的系统性炎症应答反应。基因决定着各种炎症介质、细胞因子的合成和释放,以往的研究提示编码炎症介质和纤溶凝血分子基因的多态性可能是脓毒症及MODS的高危预警标识。 天然免疫系统在脓毒症的发生、发展中起着重要作用,在人呼吸道上皮中具有天然免疫活性的阳离子多肽分子主要是人β防御素(human beta defensin,DEFB)和LL-37。DEFB是一类具有抗菌活性的阳离子多肽,它具有广谱的抗微生物活性的同时又具有某些免疫调节作用,如对树突状细胞及T细胞有趋化作用。DEFB1是最早发现的DEFB,研究发现DEFB1在皮肤及多种上皮组织中均有表达,它在呼吸道黏膜的抗微生物过程中起着重要作用。DEFB1的基因定位于8号染色体,p23区,在对五类人种DEFB1基因的研究中共发现了15个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs),其中7个SNP在不同人种中等位基因频率存在明显差异。尽管DEFB1是组成型表达的,但已有研究表明DEFB1基因中SNP与某些疾病存在相关性,5’非编码区的SNP与儿童HIV病毒感染、哮喘和遗传性过敏症存在相关性,而-44C/G可能与口腔黏膜假丝单胞菌感染关联,1654A/G是一个第二外显子非同义突变,曾报道日本COPD患者中等位基因G的频率高达8%,但DEFB1基因多态性是否与脓毒症的发生和预后存在相关性,至今仍无相关报道。 研究目的 通过病例一对照关联研究,探讨DEFB1基因单核苷酸多态性与脓毒症的易感性、肺损伤的严重程度及预后是否存在相关性,进而寻找有效的脓毒症相关基因标识。 方法 本研究经医院伦理委员会批准,患者知情同意后,由本人或直系亲属签字后进行。 脓毒症患者268例,均符合1992年和2001年美国胸科医师协会及危重病学会制定的脓毒症诊断标准的病人,排除孕妇及年龄小于18岁的患者。疾病严重程度采用急性生理学及慢性健康评分(APACHEⅡ)和脓毒症相关器官衰竭评分(Sepsis-related Organ Failure Assessment Score)(SOFA),呼吸系统损伤程度以氧合指数(OI)表示。对照组157例,为同期择期手术后未并发脓毒症的病人。 抽取外周静脉血10ml,以2%乙二胺四乙酸二钠(EDTA)抗凝,移取200μl全血用QIAamp DNA Blood Mini Kit(QIAGEN公司)提取基因组DNA。将提取的基因组DNA溶于200μl TE缓冲液中置-80℃冰箱保存。 聚合酶联反应(PCR)扩增DNA片段及DNA直接测序-1816A/G(rs2741136)、-52A/G(rs1799946)、-44C/G(rs1800972)、-20A/G(rs11362)的测定采用PCR扩增DNA片段后DNA直接测序的方法。随机抽取30例标本,采用限制性酶切分析验证结果的准确性。 聚合酶链式反应双引物等位基因特异性扩增法(PCR-ASA)-390A/T(rs2738182)检测采用PCR-ASA的方法,分别设计两条上游引物,引物的3′端首个碱基恰好分别结合-390A/T多态位点的A和T,其余序列相同,同时设计两条不同的下游引物。每一标本均用两对引物分别扩增,将两次扩增PCR产物混合匀后抽取8μl于2%琼脂糖凝胶(0.25μg/ml溴化乙锭)电泳(90V,40min),置于紫外成像仪下分析:A/A纯合在408bp处呈现一条亮带,A/T杂合分别在408bp、263bp处有两条亮带,T/T纯合在263bp处呈现一条亮带,随机抽取30个标本进行直接测序,两种检测结果均吻合。 TaqMan检测SNP 1654G/A(rs2738047)采用TaqMan检测其基因型,引物、探针及检测设备由上海基康生物公司提供,荧光基团FAM和VIC分别标记野生型等位基因A和突变等位基因G,淬灭基团均为TAMRA。随机抽取30个标本进行直接测序,两种检测结果均吻合。 统计学处理各组中每个SNP均采用x~2进行Hardy-Weinberg(H-W)平衡检验,各组间基因型和等位基因频率比较采用x~2检验及Fisher’s Exact检验;等位基因的风险概率以比值比(OR)和95%可信区间(95%CI)表示;APACHEⅡ、SOFA评分和OI的组间比较采用Kruskal Wallis非参秩和检验。P<0.05认为有显著性差异。 结果 1脓毒症组和对照组均为汉族人种,两组间的性别构成和年龄无统计学差异(P>0.05)。 2各组中SNPs的Hardy-Weinberg(H-W)平衡经x~2检验P值均大于0.05,符合Hardy-Weinberg(H-W)平衡。 3 -44C/G(rs1800972)和-20A/G(rs11362)的三种基因型的构成比及等位基因频率在脓毒症组和对照组中均存在显著性差异(P<0.05),在脓毒症组-44C/G位点G的频率较高(15.86%),而对照组仅为8.60%,OR为2.00(1.27-3.17);-20A/G位点G的频率较之对照组高,分别为64.93%和55.73%,OR为1.47(1.11-1.96)。其余4个SNPs基因型的构成比及等位基因频率在脓毒症组和对照组中均无显著性差异(P>0.05),其中1654G/A中等位基因A的频率为0。 4死亡组中-44C/G位点G的频率较高为22.13%,而在存活组中仅为8.43%,差异有显著性;另一SNP-1816A/G位点中等位基因G的频率在死亡组和存活组中分别为21.31%、10.48%,同样存在显著差异(P<0.05)。其余SNPs中等位基因频率在死亡和存活两组中无显著性差异(P>0.05)。 5脓毒症患者-1816A/G位点G/G纯合子的氧合指数较A/G、A/A的氧合指数有显著性降低(P<0.05),而APACHEⅡ和SOFA评分在各基因型中无显著性差异。 结论 本研究首次报道汉族人群中DEFB1基因单核苷酸多态与脓毒症的相关性。我们发现-44C/G(rs1800972)、-20A/G(rs11362)与脓毒症的易感性相关,而-44C/G(rs1800972)、-1816A/G(rs2741136)与脓毒症的预后存在关联,-1816A/G(rs2741136)与肺损伤的严重程度有相关。尽管上述SNP在脓毒症这一复杂的多因素疾病中所起的作用我们并不清楚,但它们可能是脓毒症发生发展有效的预警标识。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R631

免费申请
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 石卓;β防御素在机体免疫应答中的作用[J];国外医学(免疫学分册);2004年05期
2 詹芝娅;王宏伟;陈大方;程宝莉;王海宏;方向明;;纤溶酶原激活物抑制剂-1基因启动子区4G/5G多态性与脓毒症患者易感性和预后相关性的研究[J];中华医学杂志;2005年34期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 方向明;黄丽霞;;脓毒症的分子遗传学研究进展[J];国际麻醉学与复苏杂志;2006年03期
2 张霓;潘小玲;黄礼燕;蒲爽;赖曾珍;宋亮;;人β防御素-1及Toll样受体基因多态性与慢性宫颈炎的相关性研究[J];第三军医大学学报;2012年22期
3 樊海宁;任利;邓勇;;脓毒症相关基因的多态性研究进展[J];青海医学院学报;2009年04期
4 王海英;祁克宗;彭开松;;禽防御素代替抗生素作为饲料添加剂的研究现状[J];兽药与饲料添加剂;2008年05期
5 刘海燕;岳华;杨发龙;;β-防御素的生物学活性及应用前景[J];西南民族大学学报(自然科学版);2005年S1期
6 王秋菊;曹立亭;万向;马跃;;玉屏风散对小鼠β防御素-2基因表达的影响[J];中兽医医药杂志;2010年03期
7 孟颜;司利钢;;β-防御素-2与呼吸系统的免疫调节及呼吸道过敏性疾病[J];细胞与分子免疫学杂志;2012年12期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 张伟;脓毒症瘀毒证相关的RAPD分子标记研究[D];北京中医药大学;2009年
2 程宝莉;重症脓毒症流行病学调查与防御素家族基因簇拷贝数多态性的研究[D];浙江大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘佳;清咽利喉冲剂治疗急乳蛾的临床疗效观察[D];黑龙江中医药大学;2005年
2 白萨日娜;孕酮对绵羊输卵管上皮细胞β-防御素表达的影响[D];内蒙古农业大学;2006年
3 郝永峰;驯鹿β-防御素-1(reBD-1)全长cDNA的克隆及序列分析[D];内蒙古农业大学;2006年
4 黄丽霞;β-防御素-1单核苷酸多态性的单倍型与脓毒症发生发展的相关性研究[D];浙江大学;2006年
5 解民;β防御素2基因酵母工程菌的构建和表达[D];河北农业大学;2008年
6 张宏霞;β防御素-3在慢性扁桃体炎组织中表达水平的研究[D];昆明医学院;2008年
7 李淑凤;雌二醇、孕酮对雌性绵羊生殖道β-防御素表达影响的研究[D];内蒙古农业大学;2008年
8 江龙海;家禽Gal-6基因片段克隆与成熟肽基因表达的研究[D];安徽农业大学;2008年
9 金岚;MTHFR基因,PAI基因多态性与早产及痉挛型脑性瘫痪的关系[D];安徽医科大学;2009年
10 张佩华;婴儿体外循环围术期β-防御素2水平变化的研究[D];浙江大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 翟艳苓,付研,王旭东,刘复强,钱筠,樊峥,祁雅惠,杨凌;冠心病发病与血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1及其基因4G/5G多态性的关系[J];临床荟萃;2003年05期
2 康兰,李小鹰,李金生,陈瑞晗,刘德新;血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1基因启动子区4G/5G多态性与周围动脉闭塞性疾病关系的研究[J];中华老年心脑血管病杂志;2003年02期
3 邱海波,杜斌,刘大为,陈德昌;全身炎症反应综合征与多器官功能障碍综合征的临床研究[J];中华外科杂志;1997年07期
4 富路,孔一慧,李佳,金红;纤溶酶原激活剂抑制物-1基因启动子区4G/5G多态性与血栓性疾病的[J];中华心血管病杂志;2001年03期
5 楚新梅,何秉贤;纤溶酶原激活物抑制剂-1基因多态性与代谢综合征[J];中华心血管病杂志;2004年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 胡东军;程宝莉;陈齐兴;俞欣;吴水晶;王海宏;方力争;方向明;;巨噬细胞移动抑制因子基因启动子区CATT微卫星多态性与脓毒症发生发展的相关性[J];国际麻醉学与复苏杂志;2006年01期
2 文爱清,蒋建新;脓毒症与基因多态性相关性研究进展[J];创伤外科杂志;2005年06期
3 董家鸿,王敖川,蔡景修,钱光相,张全周,黄志强;急性坏死性胰腺炎后胰腺脓毒症的外科处理[J];中国急救医学;1992年01期
4 孙诚谊;白细胞介素6(IL-6)是严重腹腔脓毒症的预后指标(英)[J];国外医学.外科学分册;1995年03期
5 倪元红,叶向红,黎介寿;霉菌性中心静脉导管脓毒症(附12例报告)[J];肠外与肠内营养;1998年01期
6 李红云!1000037北京,姚咏明!1000037北京,施志国!1000037北京,于燕!1000037北京,董宁!1000037北京,盛志勇!1000037北京;金黄色葡萄球菌肠毒素B单克隆抗体对烫伤脓毒症大鼠脏器功能的影响[J];中华医学杂志;2000年11期
7 孙建良;脓毒症时全身和局部氧供与氧耗的变化[J];国外医学.麻醉学与复苏分册;2000年02期
8 黄安林;脓毒症相关概念的变化及其意义[J];中华医院感染学杂志;2001年05期
9 尹会男,柴家科;Toll样受体/核因子κB信号通路与脓毒症的研究进展[J];中华实验外科杂志;2003年11期
10 曹国海;脓毒症中的胰岛素抵抗力[J];国外医学.外科学分册;2003年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 雒云祥;周领;任新生;;脓毒症与肠屏障功能障碍研究现状[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年
2 王新华;周荣斌;冬兰;王玉红;周高速;吴航宇;张源波;张平;;老年脓毒症的临床特点及免疫病理[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年
3 刘清泉;;中医对脓毒症的认识及辩证体系的研究[A];2004年全国危重病急救医学学术会议论文集[C];2004年
4 卢中秋;李萌芳;梁欢;邱俏檬;杨光田;周铁丽;洪广亮;;创伤弧菌脓毒症大鼠肝组织凋亡相关基因动态表达及抗菌药物的干预[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年
5 赵淳;;脓毒症的中西医结合诊治[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年
6 王军宇;李春盛;;脓毒症患者急性肾损伤早期的标志物[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年
7 盛志勇;;脓毒症研究新认识[A];“2008灾害创伤与急救新进展”学术交流会学术论文集[C];2008年
8 刘清泉;刘红旭;任爱民;江其敏;;血必净注射液治疗脓毒症(瘀毒互结证)随机、平行对照、多中心临床研究[A];2004年全国危重病急救医学学术会议论文集[C];2004年
9 赵擎宇;贾清颜;苏全冠;M WEIGAND;E MARTIN;;影响脓毒症病人生存的临床因素分析[A];2004年全国危重病急救医学学术会议论文集[C];2004年
10 方向明;;中国重症脓毒症的临床诊治[A];2009年浙江省麻醉学学术会议论文汇编[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张荔子;脓毒症研究取得新进展[N];健康报;2002年
2 陶锦琰;脓毒症的克星——齐格里斯[N];中国医药报;2001年
3 首都医科大学附属北京朝阳医院急诊科主任 李春盛;脓毒症需采用综合治疗策略[N];中国医药报;2009年
4 北京中医药大学东直门医院急诊科;基于四个环节辨治脓毒症[N];中国医药报;2009年
5 本报记者 任壮;聚焦脓毒症治疗策略[N];中国中医药报;2010年
6 张献怀;中药血必净防治脓毒症机制初步揭示[N];健康报;2010年
7 张献怀;中药血必净防治脓毒症机制被揭示[N];中国中医药报;2010年
8 特约记者 石谙丁;小儿脓毒症抗菌要领(二)[N];医药经济报;2011年
9 特约记者 石谙丁;小儿脓毒症抗菌要领(一)[N];医药经济报;2011年
10 记者 张荔子;我国启动人类单核苷酸多态性研究[N];健康报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 虞立霞;基于候选基因的肝癌、鼻咽癌和脓毒症的遗传关联研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
2 余自强;抗血小板胶原受体糖蛋白VI单克隆抗体的制备和功能研究[D];苏州大学;2005年
3 史丽;人类CYP2A13基因SNPs及其与喉、咽、鼻恶性肿瘤危险性的相关性研究[D];山东大学;2005年
4 刘丽波;精神分裂症相关基因的遗传学研究[D];吉林大学;2006年
5 汪颖;单体型和基因型问题的优化模型和算法[D];大连理工大学;2007年
6 刘洋;ACSL基因家族与精神分裂症的相关研究[D];吉林大学;2008年
7 富强;胆囊收缩素A受体基因的多态性与偏执型精神分裂症的关系[D];中国协和医科大学;2008年
8 罗培芬;多巴胺D2受体基因多态性与偏执型精神分裂症的关联研究[D];中国协和医科大学;2008年
9 季从亮;鸡肉IMP含量相关候选基因SNP筛查及其用于地方鸡种群体遗传结构分析的研究[D];扬州大学;2005年
10 李会晨;遗传性非息肉病性结直肠癌的分子遗传及临床病理研究[D];第二军医大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吕晨;β防御素1基因单核苷酸多态性与脓毒症发生发展的相关性研究[D];浙江大学;2006年
2 王志富;基于候选基因策略的脓毒症遗传易感性研究[D];中国协和医科大学;2009年
3 杨孟选;脓毒症及多器官功能障碍综合征白细胞介素-6表达及易感性研究[D];郑州大学;2007年
4 周莹;PD-1/PD-L1途径在脓毒症T淋巴细胞和单核细胞中的作用及机制研究[D];第二军医大学;2010年
5 王强;脓毒症大鼠JAK/STAT信号通路活化及其与肿瘤坏死因子-α表达的关系[D];第四军医大学;2004年
6 卢骁;低分子肝素抗炎性凝血效应对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用[D];第二军医大学;2010年
7 赵浩东;盲肠结扎穿孔脓毒症大鼠早期肝脏血管内皮细胞和肝损伤变化及其相关性研究[D];安徽医科大学;2011年
8 陈朴;乌司他丁对重症脓毒血症的疗效及作用机制的研究[D];浙江大学;2004年
9 吴洁莹;氯胺酮及胰岛素增敏剂对腹腔感染脓毒症小鼠的作用[D];暨南大学;2002年
10 王伟荣;肺炎相关性脓毒症的临床特点及中医证候研究[D];广州中医药大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026