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《浙江大学》 2007年
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Bt水稻及其外源基因表达蛋白的环境行为与生物学效应

汪海燕  
【摘要】: 国内外在转Bt基因作物的培育上,已经取得了较大进展。我国在转Bt基因水稻的转育方面居世界先进水平,且很有可能成为世界上率先商品化种植转基因水稻的国家之一。因此,有关Bt水稻的环境安全性研究显得尤为迫切和重要。Bt水稻中外源基因及其表达产物可能是一类潜在的环境外源污染物,有关这类生物大分子在农业生态系统中的环境行为等方面的研究已成为国内外新的研究热点,具有重要的科学和现实意义。然而,由于Bt作物中表达的Bt蛋白丰度较低,要从中获得足够量的Bt纯蛋白有一定的难度,致使目前研究多采用植物组织或源于微生物表达的Bt蛋白,难以全面反映Bt作物表达的Bt蛋白的实际环境行为。此外,外源基因的插入打乱了原有的基因网络,可能引起转基因作物的生理生化过程或代谢途径的改变从而产生多效性,转基因作物对逆境(重金属胁迫)的应答能力是否会因此而改变,国内外迄今报道甚少。克螟稻(Ke-Ming-Dao,KMD)是含有Bt基因(cry1Ab)和选择标记基因(hpt与nptⅡ)且高抗8种鳞翅目害虫的转Bt基因水稻。有关克螟稻及其外源基因表达蛋白(Cry1Ab、HPT和NPTⅡ蛋白)的环境行为与生物学效应的研究迄今鲜见报道。 本研究以克螟稻及其亲本(秀水11)为试材,在建立Cry1Ab蛋白纯化制备方法、土壤中Cry1Ab蛋白的提取方法以及HPT蛋白酶联免疫分析方法的基础上,通过实验室和田间试验,研究了(1)KMD中Cry1Ab蛋白的时空表达、根系分泌及根际残留;(2)Cry1Ab纯蛋白在膨润土、高岭石、腐殖酸及土壤中的吸附行为;(3)Cry1Ab蛋白在土壤中的好气和淹水降解动态;(4)KMD中HPT和NPTⅡ蛋白的时空表达、根系分泌及根际残留特性;(5)重金属胁迫条件下KMD对多种元素的吸收和积累。主要结果如下: 1.Cry1Ab蛋白纯化制备和土壤中该蛋白提取方法的建立 采用O.1mol·L~(-1)Na_2CO_3-NaHCO_3+5mmol·L~(-1)DTT缓冲液作为提取剂,从Bt水稻秸秆中提取Cry1Ab蛋白。提取液经过冷冻干燥浓缩、截留分子量浓缩至较小体积,然后用(NH_4)_2SO_4分级沉淀(20%去杂蛋白,80%收集Cry1Ab蛋白)、离子交换色谱(A-50)、凝胶渗透色谱(G-150)等步骤后,得到了纯度较高的Cry1Ab蛋白(经SDS-PAGE电泳检测相对纯度80%以上)。生物活性测定表明,所得的Cry1Ab纯蛋白保留杀虫活性。 从土壤中高效提取蛋白具有较高的难度。国内外现有的方法提取某些土壤中的Cry1Ab蛋白效率普遍较低(提取效率4.6~35%)。为了研究该蛋白在土壤环境中的行为与归趋,建立适宜的提取方法是尤为重要的。本研究通过Cry1Ab蛋白和Bt水稻秸秆添加试验,以0.1mol·L~(-1) Na_2CO_3-NaHCO_3(pH10.0)+5.0mmol·L~(-1) EDTA+50mmol·L~(-1) Na_4P_2O_7·10H_2O+0.1%Triton X-100为提取缓冲液,并结合Cry1Ab-ELISA方法,从不同土壤中高效提取Cry1Ab蛋白的效率分别46.18~81.73%和47.72~82.25%。 2.HPT蛋白检测ELISA方法的建立 利用一种简便并且高效的微生物表达体系,将hpt基因的全编码序列克隆到原核表达质粒pGEX-KG上,在E.Coli菌株BL21(DE3)-pLys中进行诱导表达,获得了融合蛋白GST-HPT,经Thrombin凝血酶酶切过夜,再经过柱纯化后获得不含GST且具有生物活性的HPT纯蛋白,所得蛋白纯度>90%。MALDI-TOF-MS分析表明,HPT蛋白分子量为39.4kD。用HPT纯蛋白免疫家兔,制备了高效价的多克隆抗体,进而构建了双抗夹心酶联免疫检测方法,其灵敏度为0.31ng·mL~(-1)。利用该方法可以检测转基因植物组织中微量的HPT蛋白。 3.克螟稻Cry1Ab蛋白的表达、分泌与根际土中的残留特性 分蘖始期至成熟期,KMD地上部和根中Cry1Ab蛋白的表达量分别为3.23~8.22μg·g~(-1)FW和0.68~0.89μg·g~(-1)FW;KMD根系分泌的Cry1Ab蛋白量仅为1.66~48.02ng/簇·天;KMD根际土中的Cry1Ab蛋白残留量低于检测限(0.5ng·g~(-1)air-dried soil),这表明田间种植条件下生育期间中的Cry1Ab蛋白不易转移到根际土壤中。考虑到KMD地上部相对较高的蛋白表达量(μg级),因此应该尽量避免KMD秸秆还田。 4.Cry1Ab纯蛋白在腐殖酸、膨润土、高岭石及不同土壤中的吸附解吸规律 Cry1Ab蛋白与腐殖酸、膨润土和高岭石的吸附解吸动态。高岭石、膨润土和腐殖酸对Cry1Ab蛋白的吸附量分别为131.27~1731.44ng·g~(-1)、107.09~1846.42ng·g~(-1)和78.02~1066.10ng·g~(-1),它们相应的吸附率分别为41.34~79.95%、26.60~69.90%和30.34~45.83%。这3种吸附剂对Cry1Ab蛋白的吸附量随添加浓度的增加而增加,而吸附率却随蛋白添加浓度呈相反变化趋势。对Cry1Ab蛋白的吸附能力大小依次为高岭石>膨润土>腐殖酸,而解吸附能力大小为腐殖酸>高岭石>膨润土。 Cry1Ab蛋白与不同土壤的吸附解吸动态。Cry1Ab纯蛋白在供试的5种土壤中的吸附率随添加浓度的增加而下降。浓度为782.55ng·mL~(-1)和125.64ng·mL~(-1)的Cry1Ab蛋白时小粉土的吸附率均为最高,分别是24.85%和40.81%;而黄松土和滨海盐土的吸附率相对最低,分别是9.12%,31.67%和12.47%,30.75%。解吸附率随着吸附量的减少而降低。小粉土的解吸附率比较低,分别是12.95%和5.88%。土壤对Cry1Ab纯蛋白的单位吸附量与Cry1Ab蛋白加入浓度和土壤OM呈现显著的正相关。 5.Cry1Ab纯蛋白和KMD秸秆在土壤及水体中的降解规律 Cry1Ab纯蛋白在水溶液和土壤中的降解。Cry1Ab纯蛋白在溶液(pH 4.0~8.0)中的水解与溶液pH成负相关,与蛋白浓度成正相关。好气条件下,Cry1Ab纯蛋白的添加培养试验表明,在5种不同土壤中其降解趋势符合一级动力学反应方程C=C_0exp(-kt),半减期为19.6~41.3d,主要是生物降解,与土壤的单一因子无显著相关性。相比之下,Cry1Ab蛋白在淹水土壤中的降解速度较慢,半减期要长得多,为45.9~141d。这就表明厌氧条件下,转基因作物表达的Cry1Ab蛋白相对稳定。 KMD秸秆在土壤中的降解动态。在好气培养的90d内KMD秸秆在土壤中的降解动态显著符合以下方程C=C_0exp(-kt)。他们的可提态Cry1Ab蛋白的半减期的变化从11.5~34.3d。蛋白降解最快的土壤是碱性土。相反地,蛋白降解速率较慢的土壤是酸性土,他们是半减期为34.3d的黄金泥和23.9d的红砂土。进一步的试验表明,黄松土中添加不同比例的KMD秸秆后Cry1Ab蛋白的降解也符合一级动力学方程。分别添加3%、4%和7%KMD秸秆时,蛋白降解半减期分别是9.9d、13.8和18d。由此可知,随着秸秆添加量的增加,Cry1Ab蛋白在土壤中的半减期有相应的延长。在淹水条件下培养60d的秸秆中Cry1Ab蛋白降解也显著符合动力学方程。秸秆中的Cry1Ab蛋白在酸性土壤,黄金泥和红砂土中降解较慢,其半减期分别为70.0d和61.3d。而在中性或碱性土中降解速度较快,半减期为43.9d。 6.KMD中HPT蛋白和/或NPTⅡ蛋白的表达、根系分泌动态及根际土残留特性 不同生育期的KMD地上部与根部的HPT蛋白含量分别约为24.59~60.12ng·g~(-1)FW和15.67~33.13ng·g~(-1)FW,相应的NPTⅡ蛋白含量分别为1.61~2.99ng·g~(-1)FW和3.86~9.97ng·g~(-1)FW。其精米中HPT蛋白含量约为5.28ng·g~(-1)DW,而NPTⅡ蛋白未检出。这意味着它们不会导致致敏性,可能不会直接对人体健康造成危害。同时,KMD表达的NPTⅡ蛋白和HPT蛋白不易通过根系分泌途径向土壤环境转移,而且其根际土中也未检出NPTⅡ蛋白。因此,田间种植的KMD不会导致HPT蛋白和/或NPTⅡ蛋白的严重积累,这也就预示着HPT蛋白和/或NPTⅡ蛋白不会直接对农业生态环境构成威胁。 7.重金属污染区KMD中元素吸收和积累的变化初探 本论文研究了在Cd、Cu、Pb和Zn胁迫条件下,KMD和亲本对Al、As、Ca、Cd、Co、Cr、Cu、Fe、K、Mg、Mn、Na、Ni、Pb、Zn15种元素的吸收和积累。发现在四种污染条件下,KMD和亲本对这15种元素的吸收和积累规律既存在相似性也存在明显的差异。尤其在Cd浓度为5、10和20mg·kg~(-1)soil的污染条件下,KMD糙米中Cd含量分别达到0.68±0.12、0.68±0.04和1.45±0.09mg·kg~(-1),均已超过了国际限量标准的范围,这表明在高Cd污染地区种植KMD可能存在着安全隐患。Cu污染条件下,KMD秸秆中有毒金属元素Cr和Cd的含量都有不同程度的提高。同时,还发现在Cd污染条件下,KMD地上部对Cd元素有较明显的积累效应;Pb污染条件下,KMD地上部中Pb元素的含量也有了显著的提高。从有毒重金属Cd或Pb积累的角度看,在Cd或Pb污染地区种植KMD时应该尽量避免其秸秆还田。 由于本研究是在盆栽试验和单一土壤研究中发现的上述现象,仍需要田间、多点和多年种植条件下的试验结果加以验证,因此,本文建议:在转Bt基因水稻商业化生产前,应该进一步拓展现有的生态风险性和安全性评价内容,加强对重金属胁迫条件下转Bt基因作物有关元素的吸收和积累规律以及其它非预期效应的研究。
【学位授予单位】:浙江大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S188;S511

【引证文献】
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1 张燕飞;岳龙;张素芬;沈佳君;付秋果;李菊英;汪海燕;叶庆富;;Bt水稻杀虫蛋白时空变化及秸秆还田后在土壤中的持留规律[J];核农学报;2011年04期
2 杨艳华;戴莉;陈克平;;Bt转基因抗虫水稻的研究进展及其对家蚕的风险评估[J];河南农业科学;2013年02期
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1 吕豪豪;转Bt基因对水稻根际及残茬降解土壤微生物生态的影响研究[D];浙江大学;2010年
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1 卢增斌;防治水稻螟虫单项技术措施的评价及储备技术—转基因水稻对非靶标生物影响的研究[D];华中农业大学;2010年
2 张燕飞;Bt水稻外源基因及其表达蛋白的环境持留研究[D];浙江大学;2011年
3 张焕春;转Cry1Ab基因水稻侧翼序列的扩增和转化体特异事件检测[D];沈阳师范大学;2012年
4 蔚霞;转Bt基因水稻秸秆还田对水稻土反硝化作用和微生物多样性的影响[D];华中农业大学;2012年
5 华桦;转基因水稻中Bt蛋白的表达规律及生态适应性研究[D];华中农业大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 于晓红,朱祯,徐鸿林,朱玉,吴茜,高越峰,付志明,肖桂芳,安利佳,李向辉;基因枪法转化小麦及转基因植株的获得[J];高技术通讯;2000年02期
2 杨丽琛,常团结,蔡华雅,陈宛新,杨晓光,朱祯;植物选择标记基因hpt在大肠杆菌中的融合表达、纯化及活性测定[J];高技术通讯;2003年06期
3 钱迎倩,魏伟;再论生物安全[J];广西科学;2003年02期
4 杨昌举,宋林,王竹;转基因大豆对生物多样性的影响[J];环境保护;2002年11期
5 陈英旭,林琦,陆芳,何云峰;有机酸对铅、镉植株危害的解毒作用研究[J];环境科学学报;2000年04期
6 汪海燕;叶庆富;;HPT-ELISA方法的建立及其在转基因水稻监测中的应用[J];核农学报;2007年02期
7 吴刚,崔海瑞,舒庆尧,夏英武,高明尉,吴刚,李毅,叶恭银,I.Altosaar;转基因水稻中转录水平cry1Ab基因的沉默及其阶段复活[J];中国科学(C辑:生命科学);2001年06期
8 程焉平;转基因植物杂草化问题及其对策[J];吉林农业科学;2002年04期
9 张永军,吴孔明,彭于发,郭予元;转抗虫基因植物生态安全性研究进展[J];昆虫知识;2002年05期
10 岳建雄,张慧军,张炼辉;以对潮霉素抗性为筛选标记的棉花遗传转化[J];棉花学报;2002年04期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 张明洲;农杆菌介导高梁转化体系的建立与Bt(Bacillus thuringiensis)抗虫基因的导入[D];浙江大学;2002年
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1 张敬华;于燕;;转基因食品的安全性评价[J];癌变.畸变.突变;2007年03期
2 张明辉;史修柱;李照会;;转Bt基因抗虫棉田棉盲蝽的发生规律及防治[J];山东农业科学;2006年03期
3 范广华;李冬刚;;不同生态因子对抗虫棉绿盲蝽发生消长的影响[J];山东农业科学;2008年02期
4 郭文文;诸葛玉平;李建勇;宗晓庆;娄燕宏;;转基因番茄栽培对土壤生物学特性的影响[J];山东农业科学;2010年03期
5 史梅娟;;转基因作物的现状和对策[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年09期
6 魏俊杰;;转基因植物的应用及其安全性分析[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年11期
7 向太和,倪大虎,张盘娣,吴家道,杨剑波,贾士荣;抗菌肽Shiva A基因导入杂交水稻恢复系明恢63的初步研究[J];安徽农业科学;1999年06期
8 郭春强,靳文奎,廖平安,黄全民 ,张松山;离子束注入对小麦品质性状的影响[J];安徽农业科学;2004年05期
9 李霞;何康来;王振营;;用转基因技术进行玉米抗螟育种的研究进展[J];安徽农业科学;2006年15期
10 李永春;王静英;尹钧;;转基因作物的生物安全性分析[J];安徽农业科学;2006年23期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 易成新;倪大虎;吴家道;杨剑波;;转Xa21基因大米对大、小鼠的毒性评价试验[A];食品安全的理论与实践——安徽食品安全博士科技论坛论文集[C];2005年
2 余建平;吕月萍;刘佳莉;刘建国;郭长虹;;GFP叶绿体转化烟草茎叶降解对土壤微生物及土壤酶活性的影响[A];2010植物免疫机制研究及其调控研讨会论文集[C];2010年
3 张启军;李聪;虞德容;孙永华;吕川根;;抗病虫转基因广亲和水稻新资源的创新[A];2010植物免疫机制研究及其调控研讨会论文集[C];2010年
4 彭文涛;汪峰;崔中利;曹慧;;转基因棉花种植对土壤卡那霉素抗性细菌多样性的影响[A];第五次全国土壤生物和生物化学学术研讨会论文集[C];2009年
5 黄民松;邱晓红;万鹏;吴金萍;;转Bt 基因棉对朱砂叶螨的适合度研究[A];节能环保 和谐发展——2007中国科协年会论文集(三)[C];2007年
6 潘洁茹;陈丽仙;黄天培;关雄;;荧光差异显示技术在Bt上的初步应用[A];2008年福建省科协第八届学术年会农业分会场论文集[C];2008年
7 林卫东;;浅谈转基因生物的环境风险及其防范对策[A];生态安全与可持续发展——广西生态学学会2003年学术年会论文集[C];2003年
8 韩美清;王路光;赵琪;卢虹;;复合污染土壤中菠菜对Pb、Cd、Cu、Zn吸收和累积规律的研究[A];环境与健康:河北省环境科学学会环境与健康论坛暨2008年学术年会论文集[C];2008年
9 焦晓国;张国安;涂巨民;崔旭红;;转Bt基因水稻抗虫性测定[A];华中昆虫研究(第一卷)[C];2002年
10 孙志新;崔金杰;雒珺瑜;王春义;陈海燕;;不同类型抗虫棉对棉铃虫几种主要酶系活性的影响[A];河南省植保学会第九次、河南省昆虫学会第八次、河南省植病学会第三次会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2009年
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1 李华;基于系统仿真和情景模拟的崇明生态安全评估[D];华东师范大学;2011年
2 孙国清;不同抗虫棉品种杀虫蛋白表达研究及影响抗虫性分析[D];新疆农业大学;2010年
3 曾凡荣;水稻铬毒害和耐性的生理与分子机理研究[D];浙江大学;2010年
4 陈洋;转cry1Ab/vip3H水稻抗螟性的鉴定及三类不同转基因水稻对其非靶标生物褐飞虱影响的评价[D];浙江大学;2010年
5 吕豪豪;转Bt基因对水稻根际及残茬降解土壤微生物生态的影响研究[D];浙江大学;2010年
6 苏长青;适合转基因抗虫水稻和棉花PCR检测标准质粒的构建及试用[D];中国农业科学院;2011年
7 石凤敏;蒙古冰草MwLEA3基因功能研究及MwRRT基因的克隆[D];内蒙古农业大学;2011年
8 刘海燕;转nisI基因植物乳杆菌Lactobacillus plantarum 590对SD大鼠肠道健康的影响研究[D];江南大学;2011年
9 李孝刚;转基因抗虫棉对土壤生态系统影响的研究[D];南京林业大学;2011年
10 吴丹丹;苏云金芽胞杆菌YBT-1520热胁迫下的生理变化及差异蛋白质组研究[D];华中农业大学;2011年
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1 邓雅丽;土壤中铁铝氧化物对Bt毒素吸附的影响[D];华中农业大学;2010年
2 郎晓磊;肠道菌对苏云金芽胞杆菌家蚕杀虫活性的作用[D];华中农业大学;2010年
3 刘姣;苏云金芽胞杆菌Sigma35因子对杀虫晶体蛋白基因表达的影响[D];华中农业大学;2010年
4 丛胜波;斜纹夜蛾与转基因棉(Cry1Ac)的互作研究[D];华中农业大学;2010年
5 卢增斌;防治水稻螟虫单项技术措施的评价及储备技术—转基因水稻对非靶标生物影响的研究[D];华中农业大学;2010年
6 俞艳栋;杞柳瘿蚊的生物学特性及防治技术研究[D];安徽农业大学;2010年
7 郭文文;转基因番茄对土壤生物学性质及养分吸收的影响[D];山东农业大学;2010年
8 李勇;臭氧与镉胁迫对冬小麦生理生态特征及品质的影响[D];山东农业大学;2010年
9 陈秀灵;不结球白菜耐高锌胁迫的生理生化机制研究[D];山东农业大学;2010年
10 杜文晓;新疆棉区棉铃虫种群对Bt毒蛋白(Cry1Ac)抗性的监测[D];新疆农业大学;2010年
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1 王新忠;谢家峰;樊道怀;胡玉龙;;频振式杀虫灯应用技术研究初报[J];安徽农学通报;2006年03期
2 沈雪梅;;土壤微生物多样性的主要影响因子[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年11期
3 李同亮;王坤波;宋国立;刘方;黎绍惠;王春英;张香娣;王玉红;;转抗草甘膦基因烟草T-DNA侧翼序列的扩增与分析[J];安徽农业科学;2009年21期
4 许瑞;徐红华;;转基因食品的安全性[J];保鲜与加工;2006年01期
5 钟茜;;转基因食品的安全性问题及其管理对策[J];重庆广播电视大学学报;2006年01期
6 宋萍,潘映红,陆秀君,王勤英,张凤巧;两种纯化苏云金杆菌HD-73毒素蛋白方法的比较研究[J];河北农业大学学报;2005年03期
7 叶平扬;董姗姗;卢宝荣;王锋;苏军;宋志平;;转基因水稻与野生稻(Oryza nivara Sharma et Shastry)杂交后代种子萌发率[J];复旦学报(自然科学版);2008年03期
8 闫鑫鹏;李杰;;白腐真菌在农作物秸秆中的研究与应用[J];饲料工业;2008年14期
9 戈峰,王常平,陈小飞,刘向辉;二化螟性信息素诱杀剂在贵州稻区诱蛾的效果[J];贵州农业科学;2002年05期
10 赵和,王海波;转基因作物对生态环境的影响分析[J];河北农业科学;2003年03期
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1 汪海燕;叶庆富;;转cry1Ab基因水稻中毒蛋白在土壤中的吸附解吸和生物降解[A];中国原子能农学会第七次代表大会暨学术研讨会论文集[C];2004年
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1 苏长青;适合转基因抗虫水稻和棉花PCR检测标准质粒的构建及试用[D];中国农业科学院;2011年
2 吴伟祥;转Bt基因克螟稻对土壤和根系微生物多样性的影响[D];浙江大学;2003年
3 林拥军;农杆菌介导的水稻转基因研究[D];华中农业大学;2001年
4 白耀宇;转Bt基因水稻Cry1Ab杀虫蛋白的环境动态及其对非靶标昆虫的影响[D];浙江大学;2004年
5 蒋彩英;Bt水稻花粉对家蚕安全性评价及对家蚕安全的Bt菌株生物学的研究[D];浙江大学;2004年
6 姜永厚;转基因抗虫水稻对几种天敌的影响及其机理研究[D];浙江大学;2004年
7 张炬红;转Bt基因抗虫棉对棉蚜的生态风险评价[D];中国农业科学院;2006年
8 罗举;上海地区水稻螟虫灾变规律的研究[D];南京农业大学;2005年
9 陈浩;三种Bt基因(cry1Ac、cry2A~*和cry9C~*)抗虫水稻的培育及评价[D];华中农业大学;2005年
10 韩兰芝;转cry1Ac/CpTI基因水稻对鳞翅目害虫种群的影响及靶标害虫的抗性风险评价[D];中国农业科学院;2007年
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1 吴月友;转基因水稻生态安全性研究[D];浙江大学;2003年
2 焦晓国;转Bt基因水稻抗虫性研究[D];华中农业大学;2001年
3 吴立成;克螟稻中cry1Ab基因表达产物在土壤中的环境行为[D];浙江大学;2004年
4 万鹏;长江中游棉区转Cry1A基因棉花杀虫蛋白表达及对靶标和非靶标害虫的影响[D];中国农业科学院;2004年
5 吴玉红;河北省农户应用转Bt基因抗虫棉品种的现状、效果及其影响因素研究[D];河北农业大学;2004年
6 徐晓宇;转Bt基因克螟稻秸秆还土对水田厌氧微生物、生物学活性及其种群多样性的研究[D];浙江大学;2004年
7 刘巧辉;应用BaPS系统研究旱地土壤硝化—反硝化过程和呼吸作用[D];南京农业大学;2005年
8 李闪红;螟虫对转Bt水稻的选择性及转Bt水稻对螟虫的抗性研究[D];华中农业大学;2005年
9 蔡雪涛;稻水象甲本地扩散及其与栖境质量的关系[D];浙江大学;2006年
10 谭红;转cry1Ab基因抗虫籼稻对非靶标害虫白背飞虱的安全性评价[D];浙江大学;2006年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 魏俊杰;;Bt毒蛋白在转基因植物中的表达[J];安徽农学通报(下半月刊);2012年06期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 蔚霞;转Bt基因水稻秸秆还田对水稻土反硝化作用和微生物多样性的影响[D];华中农业大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 卢天成,王兴智;植物转基因产品检测方法的评价[J];分子植物育种;2003年03期
2 于晓红,朱祯,徐鸿林,朱玉,吴茜,高越峰,付志明,肖桂芳,安利佳,李向辉;基因枪法转化小麦及转基因植株的获得[J];高技术通讯;2000年02期
3 杨丽琛,常团结,蔡华雅,陈宛新,杨晓光,朱祯;植物选择标记基因hpt在大肠杆菌中的融合表达、纯化及活性测定[J];高技术通讯;2003年06期
4 石太渊,杨立国,王颖,郑文静,高连军;PYH157广谱抗病基因导入高粱及转基因植株的筛选与研究[J];杂粮作物;2001年01期
5 石太渊,杨立国;基因型和培养基对高粱幼穗离体培养的影响[J];国外农学-杂粮作物;1995年04期
6 何富刚,徐秀德;国外高粱种质资源抗高粱蚜、玉米螟、黑穗病鉴定与评价研究[J];国外农学-杂粮作物;1996年01期
7 白志良,王良群,郑丽萍,李爱军,王丰林;高粱不同外植体离体培养[J];华北农学报;1995年01期
8 张剑冰,欧广东,孙明,陈亚华,喻子牛;苏云金杆菌CT-43菌株质粒与ICPs及苏云金素产生的关系研究[J];华中农业大学学报;1993年06期
9 沈晋良,周威君,吴益东,林祥文,朱协飞;棉铃虫对Bt生物农药早期抗性及与转Bt基因棉抗虫性的关系[J];昆虫学报;1998年01期
10 母秋华,陈泽光,杨振棠,王玉霞,张增明,刘志东,张桂兰,田惠香;高粱蔗茎尖培养获得成功[J];科学通报;1982年07期
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1 张明洲;农杆菌介导高梁转化体系的建立与Bt(Bacillus thuringiensis)抗虫基因的导入[D];浙江大学;2002年
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1 高立;张莉;杨本付;;转基因作物与人类健康[J];济宁医学院学报;2007年01期
2 余四斌,周芳,饶荣华;转基因作物种子检测技术研究进展[J];种子;2003年05期
3 张新梅,韩召奋,徐惠君,郭蔼光;转基因作物中选择标记基因的消除研究进展[J];广西农业科学;2004年06期
4 刘敏;朱延雄;刘爱华;王雷;;食品与饲料加工过程中转基因作物的检测技术进展[J];饲料工业;2006年11期
5 陈燕;;转基因作物的现状介绍[J];专业户;2004年12期
6 胡平;姚国新;盛继群;;转基因作物安全性研究进展[J];安徽农业科学;2006年16期
7 唐建淮;;“被转外源基因”的性状属性与其在转基因生物中表达效果关系的探讨[J];安徽农学通报;2007年15期
8 李艳大;欧阳西荣;;转基因作物的基因流及其安全性[J];作物研究;2005年S1期
9 胡安生;;转基因作物的安全性评价[J];浙江柑桔;2010年01期
10 朱占齐;王卫国;;转基因作物安全性及外源基因加工降解研究进展[J];饲料工业;2010年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵德刚;Yi Li;;“外源基因清除”技术(Gene Deletor)研究新进展[A];2008年全国生物化学与分子生物学学术大会论文摘要[C];2008年
2 赵天永;王国英;;果树的遗传转化研究-文献综述[A];中国科学技术协会第二届青年学术年会园艺学论文集[C];1995年
3 张林;郝兆芹;;阳离子聚合物介导的外源基因对体外培养的兔角膜内皮细胞生长影响的研究[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
4 王丹;付永平;马健;王丕武;;大豆根部特异性启动子的克隆及功能分析[A];全国植物分子育种研讨会摘要集[C];2009年
5 林栖凤;李冠一;黄骏麒;;第三章 鉴定[A];植物分子育种——第四届全国植物分子育种学术研讨会论文集[C];2004年
6 管敏;崔洪志;邓建华;武小平;郭三堆;;棉花arf1基因启动子的功能验证[A];全国作物生物技术与诱变技术学术研讨会论文摘要集[C];2005年
7 王军辉;张建国;韩一凡;胡建军;张守攻;;转Bt基因抗虫欧洲黑杨安全性评价研究[A];持续发展,再创辉煌——中国林学会林木遗传育种分会第五届年会文集[C];2002年
8 刘贤伟;吴建平;;环境关心与亲环境行为及其关系的研究进展[A];2010中国环境科学学会学术年会论文集(第二卷)[C];2010年
9 欧海龙;曲立娟;许淼;蔡勤;巩芷娟;黄英;曾溢滔;;牛基因组中有利于ΦC31整合酶介导的外源基因高效表达位点的研究[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
10 赵乃诗;;农民环境行为对农村环境的影响[A];2011中国环境科学学会学术年会论文集(第四卷)[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 田豆豆;推进转基因研发[N];人民日报;2010年
2 本报记者 贾丽君 王琥 蔡靓 刘学胜 陈英华 提供;政协委员黄大昉: 推进转基因作物新品种产业化[N];中华合作时报;2010年
3 留美学者,生物化学博士 方舟子;转基因作物安全吗?(中)[N];经济观察报;2010年
4 记者 金毅 朱海兵;转基因作物慎行产业化[N];浙江日报;2010年
5 本报记者 汪瑶;转基因作物商业化争议不断[N];中国贸易报;2010年
6 王凯园;欧盟拟修改转基因作物种植批准体系[N];粮油市场报;2010年
7 博西;非洲国家或将推广种植转基因作物[N];粮油市场报;2011年
8 新;转基因作物未必是“超级杂草”[N];健康报;2001年
9 记者 茹晴;美专家断言转基因作物安全[N];中国经济时报;2001年
10 蒋建科;我成为转基因作物种植大国[N];人民日报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 汪海燕;Bt水稻及其外源基因表达蛋白的环境行为与生物学效应[D];浙江大学;2007年
2 李芳芳;Bt毒蛋白在“转Bt水稻—稻纵卷叶螟—纵卷叶螟绒茧蜂”食物链中的传递和作用机制[D];浙江大学;2006年
3 周曙东;“两型社会”建设中企业环境行为及其激励机理研究[D];中南大学;2012年
4 侯英杰;转基因杨树生态安全性评价初步研究[D];中国林业科学研究院;2008年
5 高明清;Bt毒蛋白在褐飞虱及其天敌食物链中的传递与作用机制[D];浙江大学;2010年
6 李少骞;转基因植物外源基因的检测方法及整合位点的研究[D];湖南农业大学;2002年
7 吴伟祥;转Bt基因克螟稻对土壤和根系微生物多样性的影响[D];浙江大学;2003年
8 岳同卿;转Bt Cry1 Ah基因抗虫玉米的研究[D];中国农业科学院;2009年
9 刘微;水稻转Bt基因对稻田土壤光合碳固定和微生物多样性的影响研究[D];浙江大学;2009年
10 毕瑞明;农杆菌介导小麦成熟胚遗传转化体系的建立及转抗虫基因小麦分析[D];山东农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 唐晓东;转SCMV-CP基因抗花叶病甘蔗无性系的评价[D];福建农林大学;2009年
2 闫广为;抗草甘膦aroAM1基因转化烟草的研究[D];兰州大学;2009年
3 雍凌;食品中转基因作物溯源体系及相关检测技术研究[D];中国疾病预防控制中心;2011年
4 李俊;转基因作物检测阳性质粒分子的研制及应用[D];中南民族大学;2012年
5 吴立成;克螟稻中cry1Ab基因表达产物在土壤中的环境行为[D];浙江大学;2004年
6 张孝义;对转基因作物的社会认知及政策取向研究[D];吉林大学;2008年
7 马荣群;转基因农作物荧光PCR检测方法的研究[D];西北农林科技大学;2002年
8 侯敬尧;利用无选择标记表达载体获得转TPS1基因的百脉根[D];东北师范大学;2008年
9 吴影;Bt基因的组织特异性表达及转基因水稻分子检测方法的研究[D];安徽农业大学;2006年
10 江广莹;初中地理教学中学生环境行为培养研究[D];沈阳师范大学;2011年
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